卵巢子宫内膜异位症女性AMH与免疫水平的研究

季沈杰

(江苏省启东市人民医院检验科 226200)

子宫内膜异位症(EMT)又叫内异症，主要由于具有生长功能的异位子宫内膜所致，是妇科一种常见的良性疾病[1-2]。其发病率在育龄女性中高达30%，且近年来逐渐上升[3-4]。目前EMT的发病机制说法不一，最经典的理论为1921年SAMPSON提出的经血逆流种植学说理论。该理论解释，异位的内膜源于子宫内膜组织，而这些组织通过经血逆流、血管播散、淋巴传播、医源性种植等方式转移到宫腔外各部位再生长[5]。

虽然病理组织学表明EMT是一种良性疾病，但也存在浸润、增生、转移等不良风险，所以揭示EMT的发病机制是为了更好地进行预防和治疗[6]。较多研究者发现EMT患者的免疫水平可能会改变，但目前无系统研究。现探讨EMT患者的免疫水平，并进行统计和研究。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年12月至2017年6月该院收治的EMT患者49例作为观察组，均经病理学检查确证，按照修正的AFS分期标准，其中Ⅰ～Ⅱ期为轻度，20例患者，Ⅲ～Ⅳ期为重度，29例患者。对照组为同期住院因输卵管因素不孕行腹腔镜手术患者48例。2组患者的年龄、产次等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 2组患者一般资料结果比较

注：―表示无数据

1.2纳入与排除标准 纳入标准：育龄期女性，月经规律；术前未接受雌、孕激素治疗；取得患者及家属同意，并签署知情同意书者。排除标准：合并子宫腺肌症患者；结核性疾病、免疫性疾病及代谢性疾病患者。

1.3标本采集 分别取同一患者标本，同时进行相应处理，术前晨起采集患者外周血、静脉血，使用肝素钠管采血，手术直视下采集无血液污染的腹腔液，采集标本应严格按照无菌操作进行，避免影响检测的准确性。

1.4观察指标及操作方法 (1)抗苗勒管激素(AMH)：酶联免疫吸附试验(ELISA)法(法国Immunotech Beckman Coulter公司)，测定范围0.06～18.0 ng/mL，相关系数(r)≥0.990 0。(2)辅助性T细胞17 (Th17)及调节性T细胞(Treg)细胞所占比例：细胞流式仪[赛百慷(上海)生物技术股份有限公司]，取全血100 μL加入CD3 FITC、CD8 APC-CY7、CD127 PEMAB抗体各10 μL，避光孵育20 min，溶解红细胞，固定、破膜50 min，其次加入白细胞介素-17(IL-17)ALEXA647标记的抗体10 μL，继续避光孵育50 min，洗涤细胞后在PBS液重悬上机检测Th17及Treg细胞占CD4细胞比例。(3)血清和腹腔液白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平：分别取外周血及腹腔液3～5 mL，室温下3 000 r/min离心10 min，采用ELISA法(上海酶研生物技术有限公司)，按照说明书一次性检测血清及腹腔液IL-6和TNF-α水平。

2 结 果

2.12组患者血清AMH水平结果比较 不同组别不同年龄段EMT患者的血清AMH水平不同，随年龄增长其下降。2组AMH水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者AMH水平结果比较

注：与对照组比较,bP<0.05

2.22组患者免疫细胞Th17及Treg所占CD4+T细胞比例结果比较 观察组患者Th17所占CD4+T细胞比例高于对照组，Treg所占CD4+T细胞比例低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者外周血Th17及CD4+T细胞比例

注：与对照组比较,bP<0.05

2.32组患者血清及腹腔液IL-6、TNF-α水平结果比较 观察组血清及腹腔液IL-6、TNF-α水平均高于对照组，且Ⅲ～Ⅳ期患者水平高于Ⅰ～Ⅱ期，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 2组患者血清和腹腔液IL-6、TNF-α水平结果比较

注：与对照组比较,bP<0.05;与对照组比较，cP<0.01

3 讨 论

近年来，许多研究表明免疫因素参与了EMT的发病，患者血清中很多细胞因子发生了变化，并在疾病中发挥了作用，如AMH、Th17、Treg、IL-6、TNF-α等[7]。AMH是一种新型的、能预测卵巢储备功能的指标，许多研究通过对AMH指标评估其对EMT的影响。有研究报道，年龄和血清AMH水平密切相关，随年龄增加患者AMH基础水平逐渐降低[8]。本研究结果显示，观察组Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者血清AMH水平显著低于对照组(P<0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期患者水平低于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)。同时随年龄的增长患者AMH水平会降低，说明EMT患者AMH水平会降低，同时年龄越大AMH水平越低。

Th17是新发现的一种能够分泌IL-17的T细胞亚群，在机体防御反应和自身免疫性疾病中具有重要的意义。Th17的特异转录因子为ROR-γt，参与机体炎性反应和适应性免疫反应过程，并在对抗胞外特定病原体上发挥重要作用[8-9]。Treg是一种控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群,主要分泌IL-10、转化生长因子β(TGF-β)。Treg的特异转录因子为FoxP3，参与体内自身抗原耐受，保持机体免疫平衡，进而抑制机体免疫疾病的发生。当机体Th17与Treg之间的动态平衡打破，导致自身免疫疾病[10]。本研究结果表明，观察组患者Th17所占CD4+T细胞比例高于对照组(P<0.05)，Treg所占CD4+T细胞比例低于对照组(P<0.05)，且Th17/Treg观察组显著高于对照组(P<0.05)，说明EMT患者Th17/Treg比例更大，更易使机体免疫失衡。

IL-6是参与造血、免疫应答的调节及炎性等反应的细胞因子，其能活化T细胞，使B细胞前体成为产生抗体的细胞，能促进原始骨髓源细胞的生长和分化，增强自然杀伤细胞的裂解功能，并在内分泌和免疫系统中发挥重要作用[11-12]。TNF-α是一种由激活的巨噬细胞产生的、能抑制成刺激破骨细胞和骨细胞的细胞因子。具有杀伤肿瘤细胞、调节代谢，同时还能对女性经期排卵有所调节。另一方面，有研究证实TNF-α通过降低芳香化酶活性抑制雌二醇及酮的生成，影响卵泡发育[13]。本研究检测2组患者IL-6和TNF-α水平，观察组患者血清、腹腔液IL-6、TNF-α水平均高于对照组(P<0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期患者IL-6、TNF-α水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，说明EMT患者血清、腹腔液IL-6、TNF-α水平升高，且EMT后期较前期升高。

综上所述，EMT患者机体AMH水平随年龄增长逐渐下降，免疫调节细胞Th17及Treg存在紊乱现象。