门静脉高压症大鼠脾脏大小与脾功能亢进关系的初步研究

杨 军,李向农

(徐州医科大学附属医院普通外科， 江苏徐州 221002)

脾肿大、脾功能亢进是肝硬化门静脉高压症的常见临床特点，表现为一系或多系外周血细胞减少，以血小板减少为主并较早出现。脾切除可使大部分患者血细胞成分正常或接近正常,症状缓解。然而，肝硬化门静脉高压症时脾功能亢进的原因，尤其是脾脏大小、门静脉压力与外周血细胞改变之间的关系尚不清楚。明确脾功能亢进的发病机制是进行有效治疗的关键。本实验将对门静脉高压症大鼠门静脉压力、脾脏大小、肝功能与外周血细胞减少之间的关系进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1动物分组 健康雄性SD大鼠28只，体质量200～320 g，由徐州医学院实验动物中心提供。称体质量并随机分成3组：肝硬化组(A组)10只、门静脉缩窄组(B组)10只、正常对照组(C组)8只。

1.2动物模型建立 (1)肝硬化模型：A组以0.03%硫代乙酰胺(TAA)作为饮用水初始浓度,饲以颗粒饲料，每周根据体质量变化调整饮用水TAA浓度，共6周[1]。(2)门静脉缩窄模型：B组正常饲喂3周后，禁食一夜,腹部脱毛。以3%戊巴比妥钠每千克体质量1 mL腹腔注射麻醉，消毒、铺巾，自剑突向下作2 cm腹部正中切口,暴露门静脉主干,从脾静脉汇入门静脉处上方将门静脉主干分离,直至肝门处。以16 G钝头直针平行置于门静脉主干旁,从门静脉深面穿过两道3-0丝线,将门静脉主干与钝头针一起结扎,缓慢旋转抽出钝头针,关腹，继续饲喂3周[2]。C组：正常饲喂6周。饲喂过程中观察有无肝性脑病出现。

1.3实验方法 6周后，全部大鼠禁食一夜并称体质量、脱毛。麻醉后开腹肉眼观察肝脾形态、腹水量等变化。采用5号头皮针穿刺脾实质和门静脉主干，水柱法测量脾髓压力(SP,cm H2O)和门静脉压力(PVP,cm H2O)。抽取下腔静脉血2～3 mL，分别置入普通试管和含有EDTA的试管中，使用全自动分析仪测定肝功能、凝血酶原时间(s)、血红蛋白(Hb,g/L)、白细胞(WBC,×109/L)、血小板(PLT,×109/L)等。切除肝脾，称脾质量。脾脏指数(SI)按公式计算[3]：SI=脾脏质量(mg)/大鼠体质量(g)。肝组织切块约为15 mm×15 mm×2 mm,HE染色,常规病理检查。

2 结 果

2.13组大鼠SI、PVP、SP、WBC、PLT、Hb计数结果比较 见表1。

2.23组大鼠PVP、SP、SI与Hb、WBC、PLT的Spearman相关分析结果 见表2。

表1 3组大鼠SI、PVP、SP和外周血细胞计数结果比较

注：与C组比较，#P<0.05;与B组比较，*P<0.05

表2 3组大鼠肝功能、腹水、肝性脑病和凝血酶原时间结果比较

注：与C组比较，#P<0.05;与B组比较，*P<0.05；-表示无数据

2.33组大鼠PVP、SP、SI与外周血细胞的相关性 A组大鼠有2只于实验第4周时死亡，剩余8只肝脏外观和病理切片呈肝硬化表现，肝功能也出现不同程度异常。B组大鼠无死亡，肝脏外观、病理切片和肝功能与C组相似。根据肝功能、凝血酶原时间结果、腹水量和有无肝性脑病等对大鼠肝功能进行Child-Push分级评分[4]。见表3和图1。

表3 3组大鼠PVP、SP、SI与外周血细胞的相关性

图1 PLT计数与SI之间的拟合曲线

3 讨 论

本实验结果表明，A组和B组大鼠的SI、PVP、SP相似并明显高于C组(P<0.05)；血液学改变方面，A组与另外2组之间PLT计数比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而3组之间Hb、WBC计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)；下降明显的PLT计数与SI全变量回归分析结果：PLT=839.14―16.142SI，P=0.71。PLT与SI拟合曲线(图1)提示PLT减少与脾肿大无直线相关关系。

血液异常是肝脏病变的常见临床表现,包括血液成分、细胞形态、血浆总容量的改变。肝硬化门静脉高压可导致脾肿大，而脾肿大被认为可聚集并破坏血液有形成分，是引起血细胞减少的主要机制[5]。可能与以下几个过程有关[6]:(1)脾脏对血细胞过分阻留和吞噬破坏。(2)脾脏可能分泌某种已知或尚未证实的“激素”“细胞因子”等,抑制骨髓。(3)脾脏产生某种自身抗体,破坏自身血细胞。(4)脾功能亢进时血液稀释造成循环血细胞减少。各过程在脾功能亢进发生中所起的作用因引起脾功能亢进的原发病不同而有差异。多年来一直采用切除脾脏治疗脾功能亢进，缓解门静脉高压，但临床有时发现切除脾脏后，血细胞计数并未完全恢复正常，因此，脾肿大与外周血细胞减少的关系尚不明确[7]。

本实验结果显示，肝硬化、门静脉缩窄均可造成不同程度的PVP升高、SP升高和脾肿大，血液系统改变出现较早的是PLT减少，这与其他研究结果一致[8]。但本实验发现脾肿大与血细胞计数减少无明显相关关系，而肝功能可能在血液系统改变方面发挥着一定的作用。因此，本研究认为脾肿大可能仅是引起血细胞减少的因素之一，肝功能和其他体液因素也可能发挥重要作用。脾切除术对缓解肝硬化门静脉高压时脾功能亢进的作用还有待于进一步认识。