九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检测的临床应用

郑龙荣

【摘要】 目的：对九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检测的临床意义进行探究。方法：从2014年9月-2017年8月笔者所在医院收治的疑似呼吸道感染患者中抽取9 432例为研究对象，抽取静脉血检测九项呼吸道感染病原体IgM抗体，并对结果与意义进行分析。结果：9 432例疑似呼吸道感染患者的检出率为26.59%（2 508/9 432），其中嗜肺军团菌血清1型-IgM（LP）阳性占阳性病例百分率为0，肺炎支原体-IgM（MP）为67.26%、Q热立克次体-IgM（COX）为0.56%、肺炎衣原体-IgM（CP）为1.48%、腺病毒-IgM（ADV）为1.24%、呼吸道合胞病毒-IgM（RSV）为1.87%、甲型流感病毒-IgM（IN-FA）为0.60%、乙型流感病毒-IgM（IN-FB）为7.41%、副流感病毒-IgM（PIV）为19.58%。结论：九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检出阳性率高，病原体种类多，对呼吸道感染的诊断与治疗具有重要临床意义。

【关键词】 呼吸道感染； 病原体； 荧光抗体技术； 间接； IgM抗体

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.11.025 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2018）11-0052-02

呼吸道感染在临床上具有较高的发病率，主要诱因为细菌等病原体感染。临床资料证实，超过90%的上呼吸道感染患者发病原因为病毒感染[1-2]。该病病原学比较复杂，并且具有季节流行特征。探究更为迅速、准确的检测方式对于呼吸道感染的诊断与治疗意义重大。本次研究将笔者所在医院9 432例疑似呼吸道感染患者作为研究对象，对九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检测的临床意义进行探究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

于2014年9月-2017年8月笔者所在医院收治的疑似呼吸道感染患者中抽取9 432例为研究对象，所选患者均有明显呼吸道感染的临床表现，排除合并严重心肝肾等器官功能障碍患者。患者均知悉采集数据的目的和用途，研究获得患者同意，研究经医院伦理委员会批准。其中男5 561例、女3 871例，年龄60 d～105岁，平均（23.6±0.9）岁。临床表现为发热、咳嗽、咽部充血、喘息、肺部湿啰音、扁桃体肿大者分别有5 214、3 624、2 154、7 489、1 478、4 157例。

1.2 方法

患者静脉抽血，抽血量为2.0 ml，血清样本采集后在8 h内检测，否则应在2 ℃～8 ℃冷藏，如7 d内不检测，则应冷冻（<-20 ℃）保存。采用间接免疫荧光法。

1.2.1 检测试剂 试剂为西班牙VIRCELL公司原装进口产品，购自郑州安图生物有限公司。将九种抗原吸附在载玻片上，包括嗜肺军团菌血清1型-IgM（LP）、肺炎支原体-IgM（MP）、Q热立克次体-IgM（COX）、肺炎衣原体-IgM（CP）、腺病毒-IgM（ADV）、呼吸道合胞病毒-IgM（RSV）、甲型流感病毒-IgM（IN-FA）、乙型流感病毒-IgM（IN-FB）、副流感病毒-IgM（PIV）。檢测人血清中相应的呼吸道感染病原体IgM抗体，待测样本中的IgM抗体与吸附在载玻片上的抗原发生特异性反应，再与荧光素标记的抗人球蛋白反应，形成抗原-抗体-抗人IgM-FITC复合物，最后在荧光显微镜下观察结果。其他试剂还包括抗人IgM磷酸缓冲液、吸附剂、PBS溶液等。

1.2.2 检测仪器 荧光显微镜[产品型号：CX23LEDRFS1C；生产单位：奥林巴斯（广州）工业有限公司]，恒温水浴箱（型号：TL型电热恒温水浴箱；生产单位：姜堰市天力医疗器械有限公司），水平摇床（型号：KJ-201BD型水平摇床；生产单位：江苏康健医疗用品有限公司），低速离心机（型号：DD-5M；生产单位：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），台式高速冷冻离心机（型号：TGL-16；生产单位：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。

1.2.3 检测方式 使用PBS洗液将25 μl血清等比例稀释，然后将稀释后的样品30 μl与150 μl吸附剂充分缓和均匀，在13 000 r/min的速度下离心10 min，防止检测被其他因素干扰，将沉淀去除。将使用吸附剂处理后的血清放入载玻片的孔中，15 μl/孔。将未稀释的15 μl阳性对照放入一个载玻片的每个孔中，然后将未稀释的15 μl阴性对照放入另一个载玻片的每个孔中。把载玻片放入37 ℃的湿盒中培育1.5 h。使用PBS洗液对载玻片进行冲洗，然后将载玻片浸泡在PBS洗液中，使用水平摇床轻轻摇动10 min。将载玻片在蒸馏水中简单蘸洗，然后自然晾干。每孔加入15 μl抗人IgM FITC结合物溶液（不需稀释），把载玻片放入37 ℃的湿盒中温育0.5 h。将前面洗涤晾干步骤重复进行，然后将封闭介质加入，盖上盖玻片。尽快用荧光显微镜在400倍放大率下对结果进行观察。ADV、IN-FA、IN-FB、RSV、PIV阳性表现为：阳性血清1%～15%细胞的细胞核、胞浆为苹果绿色荧光；LP、CP、COX阳性表现为：全部细菌为苹果绿色荧光；MP阳性表现为：细胞外围为苹果绿色荧光。

2 结果

9 432例疑似呼吸道感染患者中，检出率为26.59%（2 508/

9 432），其中LP阳性占阳性病例百分率为0，MP为67.26%、COX为0.56%、CP为1.48%、ADV为1.24%、RSV为1.87%、IN-FA为0.60%、IN-FB为7.41%、PIV为19.58%，见表1。

3 讨论

诱发呼吸道感染的病原菌种类多样，例如病毒、衣原体、支原体等[3-4]。当前人类生活环境的持续恶化使得病原微生物毒性与病原性随之变化，加上临床上多种抗生素应用范围的拓宽，细菌性感染率有所下降，但病毒性感染率却有所上升，病原体感染所占比例也发生了变化，提升了用药准确、对症治疗的难度[5-6]。九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检测只使用一份血清样本就能实现九项病原体检测，具有重要的临床价值。检测这些病原体有很多方式，例如分离培养、PCR等[7-8]。呼吸道感染，尤其是下呼吸道感染的诊断通常使用实验室检查的方式，但并不能达到预期目标。分离培养的方式过去虽然被大多数临床工作者认可，但需要花费较长的培养时间，并具有较高的技术难度，已经被分子生物学的检测方式取代[9-10]。但分子生物学需要较高的实验室条件，不能实现大多数的病原菌检测[11-12]。当前血清学检测操作便捷、经济，使用范围逐渐拓宽[13]。

郭红仙等[8]研究显示，九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检测结果中MP阳性率最高，阳性感染率为30.2%，其次为IN-FB（15.8%）。提示引发呼吸道感染的病毒主要为MP。本次研究结果显示，9 432例疑似呼吸道感染患者中，检出率为26.59%（2 508/9 432），在阳性例数中，其中LP占阳性病例百分率为0，MP为67.26%、COX为0.56%、CP为1.48%、ADV为1.24%、RSV为1.87%、IN-FA为0.60%、IN-FB为7.41%、PIV为19.58%。在引发呼吸道感染的病毒中，MP最为常见，是感染率最高的呼吸道病原体，引发上呼吸道感染与肺炎；其次是PIV，可导致呼吸道疾病，突然发热，轻微呼吸道感染；然后依次为IN-FB、RSV、CP、ADV、IN-FA、COX，LP检出率为0，可能是由于该次研究样本数量不足，需要进一步选取大数量样本深入探索。

综上所述，九项呼吸道感染病原体IgM抗体早期检测能实现较高的阳性检出率，在呼吸道感染的诊断与治疗中能够发挥重要的临床作用。

参考文献

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（收稿日期：2017-11-02）