儿童哮喘发作期血清调节性T细胞和辅助性T细胞表达分析

郝亮亮， 赵雅娟， 杨晓彤， 李哲

现代医学研究显示，支气管哮喘发生、进展与体内各种细胞免疫失衡关系密切，属于祖国传统医学“哮病”范畴[1-3]。儿童时期是支气管哮喘疾病好发年龄段，较为常见的支气管哮喘中医证型为寒哮证和热哮证[4-5]，但迄今为止，国内涉及不同中医证型的支气管哮喘患儿免疫学相关研究报道不多。为此，我们选择了一组近期来本院就诊和住院治疗的寒哮证和热哮证患儿为对象，观察血清调节性T细胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和辅助性T细胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)表达浓度，并与同期参加体检结论健康儿童(对照组)比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年10月至12月沈阳市儿童医院收治的支气管哮喘患儿55例为研究对象，根据临床表现所属的中医证候类型分为寒哮证组26例和热哮证组29例。同期选取参加体检结论健康儿童为对照组28例。3组儿童在年龄、性别方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1 3组对象基线参数资料比较

1.2 诊断标准

1.2.1 西医诊断标准 参照中华医学会儿科学分会呼吸学组2008年修订的《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》关于儿童支气管哮喘的诊断标准[6]。

1.2.2 中医辨证标准 参照《中医儿科学》[7]和其他文献[8]拟定中医辨证分型标准，主症:(1)反复发作、喘促气急；(2)喉间痰鸣；(3)咳嗽。次症：(1)寒性哮喘：①形寒怕冷；②鼻塞、涕清或有喷嚏；③痰白、易咯、泡沫多；④渴喜热饮或不渴；⑤无汗；⑥大便溏薄、小便清长；⑦舌淡红；⑧脉浮紧或浮滑、舌苔薄白或白滑、指纹红。(2)热性哮喘：①面赤身热；②鼻塞、涕浊；③痰多、黏浊稠厚、色黄；④烦躁不宁；⑤口渴喜饮；⑥大便干、小便赤黄；⑦舌质红；⑧苔黄腻或薄黄、脉滑数或浮数、指纹紫。入选患儿具备主症3项加次症4项，同时参考舌苔脉象、指纹，即可明确证型。

1.3 纳入标准 (1)符合儿童支气管哮喘的中西医诊断标准；(2)病情为哮喘急性发作期；(3)年龄3～14岁；(4)患儿家属知情同意。

1.4 排除标准 (1)近期患有急、慢性感染性疾病者；(2)心、肝、肾功能异常者；(3)近期接受过激素或免疫抑制剂治疗者。

1.5 外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平测定 各组入选对象均在空腹8 h后采集静脉血8 mL，然后高速离心、分离血清，并保存于-18 ℃低温冰箱待检。各类T细胞浓度检测机器采用美国FC-500-M型PL流式细胞仪，调节性T细胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)检测使用E-Bioscience公司提供的试剂盒；辅助性T细胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)检测使用北京江晨宏伟生物科技有限责任公司提供的试剂盒。操作分别依据各试剂盒使用说明书进行。

2 结果

2.1 3组研究对象血清调节性T细胞浓度比较 见表2。

表2 3组研究对象血清调节性T细胞表达浓度比较

注：与对照组比较，aP<0.05；与寒哮证组比较，bP<0.05。

表2结果表明，寒哮证组和热哮证组血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg浓度显著低于对照组，寒哮证组血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg浓度显著低于热哮证组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2 3组研究对象血清辅助性T细胞浓度比较 见表3。

表3 3组研究对象血清辅助性T细胞表达浓度比较

注：与对照组比较，aP<0.05；与寒哮证组比较，bP<0.05。

表3结果表明，寒哮证组和热哮证组血清CD4+浓度显著高于对照组，而血清CD8+浓度及CD4+/CD8+比值均显著低于对照组；寒哮证组血清CD4+和CD8+浓度显著低于热哮证组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

祖国传统医学认为“哮病”的宿根归结于“伏痰”，也就是“痰浊内伏”和“膈有胶固之痰”，病机是伏痰遇感后引触，痰随气长，气被痰所阻，相互黏结，壅塞于气道后致病[9-10]。“哮病”发作期中，素体阳虚，外感于寒为冷哮；素体阳盛，外感于热为热哮，并分别以“寒痰证”和“热痰证”进行辨证医治。

现代医学认为，支气管哮喘发病过程由T细胞参与，特别是调节性T细胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和辅助性T细胞(CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)[10-13]。CD4 CD25+Treg属于CD4+中一个亚型，主要功能抑制自身反应性T细胞及激活传统T细胞，促进特定细胞因子分泌等；CD4+CD25+Foxp3+Treg属于X染色体结构中Foxp3转录因子，提供CD4 CD25+Treg成长、发育及发挥作用必需能量。哮喘患儿外周血中CD4 CD25+Treg表达数量明显下降，诱导机体对自身组织细胞免疫耐受能力下降，并抑制了Th1细胞优势表达，Th1/Th2明确失衡，促成了儿童哮喘发病。它们之间的平衡与表达浓度影响着该病发生与发展。迄今为止，一些抗哮喘药，包括支气管舒张剂(β-受体拮抗剂和抗胆碱能药)、抗炎症药(类固醇激素、白细胞介素拮抗剂和巨细胞稳定剂)可快速舒张气道平滑肌，抑制局部炎症，疗效明显。但停药后病情反复、长期用药毒、副作用明显。近年来，一些研究证实了中药(包括复方、单味药、单体)能通过调节T细胞免疫而达到治疗目的[15-17]。因此，调查患儿发作期血清调节性T细胞和辅助性T细胞表达浓度，探讨不同证型“哮症”患儿的免疫学发病机制很有意义。我们选择了一组近期来我院就诊和住院治疗的寒哮证和热哮证患儿为对象，观察其急性发作期血清调节性T细胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和辅助性T细胞(CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)表达浓度，并与同期参加体检结论健康儿童(对照组)比较。研究发现，寒哮证组和热哮证组血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg表达浓度均明显偏低，同时，寒哮证组血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg表达浓度也明显低于热哮证组。两组证型患儿血清CD4+表达浓度均明显高于对照组，而CD8+表达浓度及CD4+/CD8+比值均明显低于后者，同时，寒哮证组血清CD4+和CD8+表达浓度均明显低于热哮证组。这些外周血调节性T细胞和辅助性T细胞变化与国内一些涉及哮喘成年患者的同类研究[18-19]结论一致，提示寒哮证和热哮证患病儿童们存在着明确的血清调节性T细胞和辅助性T细胞表达异常，且以寒哮证患儿更为显著。

鉴于寒哮证和热哮证患儿外周血存在着明确的调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达失衡，这些表现差异可作为“哮病”各证型儿童的微观辨证指标及治疗选择及疗效评估的判定标识。