五味子胶囊提取工艺研究

陶雪慧，王安琪，王康宇，高文义

（长春中医药大学，长春 130117）

五味子胶囊是由五味子、人参、远志、甘草等6味中药组成，具有提升免疫力、抗炎、促进细胞代谢等功效[1-2]，其有效成分为总皂苷、总多糖等[3-4]。本实验采用L9（34）正交试验优选提取条件，以药材出膏率和总皂苷、总多糖含量作为筛选指标[5-7]，确定6味中药的最佳提取工艺，为后续药理研究和机制研究等奠定基础。

1 材料

1.1 设备 TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），HWS-24型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司），DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏试验设备有限公司），TDL80-2B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2 药品与试剂 五味子、人参、远志、当归、甘草、菊花（均购于长春宏检大药房），均符合《中华人民共和国药典》（2015年版）要求。人参皂苷Re标准品、葡萄糖标准品（上海源叶生物科技有限公司），甲醇、高氯酸（分析纯， 北京化工厂），苯酚、香草醛（分析纯，天津市光复精细化工研究所）。

2 方法

2.1 测定药材吸水率 五味子、人参、远志等按照处方比例共100 g，加300 mL水浸泡过夜，过滤，称重，（n=3）。吸水率=（浸泡后药材总重-浸泡前药材总重）/浸泡前药材总重[8]。

2.2 预试验 按照处方比取五味子、人参、远志100 g，将药材剪碎，加水800 mL，回流提取1 h，过滤。设计出提取次数、提取时间、料液比三因素[9]。

2.3 单因素考察 分别对提取次数、提取时间、料液比进行单因素考察。每个试验组均按处方比例取100 g，回流提取、过滤、浓缩滤液，将浓缩液干燥后得干膏，称重，计算出膏率并测定总皂苷、总多糖含量[10]。

2.4 正交试验 以料液比、提取时间、提取次数为试验因素，各因素分别设计3个水平，见表1。采用 L（934）正交设计，热回流提取，过滤，滤液浓缩，将浓缩液干燥后得干膏，将干膏称重，计算出膏率并测定总皂苷、总多糖含量。

表 1 正交试验因素水平

2.5 紫外检测五味子胶囊浸膏中总皂苷、总多糖的含量

2.5.1 紫外检测总皂苷 产品用水饱和正丁醇纯化总皂苷[11-13]，以人参皂苷Re为参照，依照2015版《中华人民共和国药典》人参总皂苷含量测定，测定总皂苷的含量。

2.5.2 紫外检测总多糖 采用水提纯沉的方法粗提多糖，精确称量粗多糖0.01 g置于试管中，加1 mol/L的H2SO42 mL加热水解2 h，冷却，取1.0 mL置于10 mL试管中，加入5%苯酚溶液1.5 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸7.5 mL，摇匀，用紫外在484 nm处测定吸光度值[14-15]。

3 结果

3.1 药材吸水率 五味子等6味药材吸水率为187%。

3.2 单因素考察结果 提取时间1 h、料液比1:8，随着提取次数的增加出膏率增多，总多糖、总皂苷含量升高（n = 3）；提取次数2次、料液比1:8，随着提取时间的增加出膏率增多，总多糖、总皂苷含量升高（n = 3）；提取次数2次、提取时间1 h，随着料液比的增加出膏率增多，总多糖、总皂苷含量升高（n = 3）。

3.3 从出膏率看最佳工艺路线 见表2，方差分析见表3。

3.4 从总皂苷含量看最佳工艺路线

表2 正交试验结果（出膏率）

表3 方差分析（出膏率）

结果表明，A3B2C1实验，即提取次数3次，提取时间1 h，料液比为1:6，出膏率最多，且因素A有显著性差异。

3.4.1 皂苷标准曲线的绘制 以人参皂苷Re对照品浓度为横坐标，以不同浓度人参皂苷Re对照品在540 nm处的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：Y = 17.48 X + 0.062 8，r = 0.999 6。

3.4.2 紫外检测五味子胶囊中总皂苷含量 见表4，方差分析见表5。

3.5 从总多糖含量看最佳工艺路线

3.5.1 多糖标准曲线的绘制 以葡萄糖对照品浓度为横坐标，以不同浓度葡萄糖对照品溶液在254 nm处的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：

Y = 6.631 3 X+0.011 9，r = 0.999 5。

3.5.2 紫外检测五味子胶囊中总多糖含量 见表6，方差分析见表7。

3.6 工艺验证 对提取次数3次，提取时间1 h，料液比为1:6进行工艺验证，平行3次试验，平均出膏率39.8 %，平均总皂苷含量0.71 %，平均总多糖含量10.6 %。

表4 正交试验结果（总皂苷）

表5 方差分析（总皂苷）

结果表明，A3B2C1实验，即提取次数3次，提取时间1 h，料液比为1:6，总皂苷含量最多，因素A有显著性差异。

表6 正交试验结果（总多糖）

表7 方差分析（总多糖）

结果表明，A3B2C1实验，即提取次数3次，提取时间1 h，料液比为1:6，总多糖含量最多，因素A有显著性差异。

4 小结

前期预试验确定水煎工艺比较乙醇回流提取提升免疫力效果更佳。本文通过总多糖含量、总皂苷含量以及出膏率对实验进行筛选[16-17]，确定最佳提取工艺参数A3B2C1，即：提取次数3次，提取时间1 h，料液比为1:6，为后续质量标准的建立奠定了基础。