高山红景天在药品检验中含量测定方法研究

彭振宇，隋思博

（吉林省药品检验所，吉林 长春 130000）

参照中国药典2015年版一部红景天项下和大株红景天注射液项下含量测定方法，采用高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇的含量。

1 方法考察与结果

1.1 仪器与试药

Agilent 1200液相色谱仪，LC-2010CHt高效液相色谱仪，对照品购于中检定院，供含量测定用，高山红景天批号：110818-201507（含量99.4%），酪醇111676-200401；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

1.2 测定波长的选择

取红景天苷、酪醇对照品适量，精密称定，分别加甲醇溶解，在紫外区200～400 nm扫描，结果，红景天苷、酪醇在275 nm附近有最大吸收，与大株红景天注射液方法所采用的检测波长（278 nm）基本一致。故选定278 nm作为本品的测定波长，见图1、图2。

1.3 流动相的选择

参照2015年版药典的方法，采用乙腈－水系统为本法流动相，通过试验，将二者比例调至7：93，在此条件下，供试品图谱基线平稳，供试品色谱图中红景天苷和酪醇能得到很好的分离，主峰前后无杂峰。

2 方法学验证

2.1 线性关系

取红景天苷、酪醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含红景天苷0.4536 mg（未折算纯度）、酪醇0.031584 mg的混合溶液，分别精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9 μL，进样测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标，分别绘制标准曲线，计算回归方程，数据见图3、图4。结果红景天苷在0.4536～4.0824 μg范围内，酪醇在0.031584～0.284256μg范围内，标准曲线线性关系良好，符合外标法定量测定的要求。

图1 红景天苷紫外光谱图

图2 酪醇紫外光谱图

2.2 精密度试验

2.2.1 重复性

取同一份供试品溶液，按正文拟定的色谱条件，连续进样6次。结果表明6次测定的红景天苷峰面积平均值为612，RSD=0.38%（n=6）酪醇峰面积平均值为167，RSD=0.88%（n=6），试验表明本法的精密度良好。

2.2.2 重现性

取同一供试品依正文的方法平行测定6份，计算，6份样品测得红景天苷含量的平均值为0.152%，RSD=1.22%（n=6），含量的平均值为0.89%，RSD=1.3%（n=6），酪醇含量的平均值为0.094%，RSD=2.2%（n=6），试验结果表明本法的重现性良好。

2.3 准确度试验

精密称取红景天苷和酪醇对照品适量，加甲醇制成每1 mL含红景天苷0.9242 m（纯度99.4%）g、含酪醇0.0848 mg的混合溶液，作为加标对照品溶液。精密称取同法测定已知含量的供试品6份，每份约1 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入加标对照品溶液10 mL，再精密加入甲醇15 mL，按正文的方法提取、测定，计算回收率及RSD。结果：红景天苷平均回收率为98.5%，RSD=2.26%（n=6），酪醇平均回收率为98.7%，RSD=2.83%（n=6）。

2.4 耐用性试验

色谱柱考察：实验中比较了Sepax Bio-C18（5 μm，Φ4.6×150 mm），Luna C18（5 μ，Φ4.6×25mm）两种色谱柱，按照正文方法色谱条件进行实验，结果两者均能较好地将红景天苷和酪醇两种成分分离，采用上述两种柱进行试验，供试品色谱峰分离良好，根据上述两种柱的检测结果，参考中国药典2015年版一部红景天项下，确定本品理论板数按红景天苷计算应不低于4000。

3 样品测定及含量测定的测定

按正文含量测定方法，测定了本品10批样品中红景天苷、酪醇的含量，见表1，上述10批样品，红景天苷及酪醇的含量值差异较大，最大最小值相差4、5倍，与高山红景天性状相近的药材7～10四批含量均较低，且批次较少，不具有代表性。故以对照药材测定值60%为最低限，暂定本品按干燥品计算，含红景天苷（C14H20O7）不得少于0.15%，含酪醇（C6H10O2）不得少于0.020%。红景天苷、酪醇HPLC图、红景天苷样品HPLC图分别见图3、图4。

表1 10批高山红景天样品含量测定结果（%）

图3 红景天苷、酪醇对照品HPLC图

图4 样品HPLC图