铁皮石斛醇提取物对自发性高血压大鼠降压作用的研究*

赵文慧 马津真 聂晓静 吴 悦 陈 宇 陈 璇 吴人照#

1 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053 2 浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007

我国高血压病患病率为29.6%[1]。高血压病是引起诸如中风、心肌梗死、心衰等疾病的重要危险因素之一。现代医学的降压治疗均为对症治疗，目前常用的降压药包括钙离子通道阻滞剂（CCB）、血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）、血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂（ARB）、利尿剂和β阻滞剂5种[2]，尚不能完全阻止高血压病以及其继发病变的进展，大多数高血压患者需要2种或2种以上的降压药方可达到目标血压[3]。多数患者需要终身服药，因长疗程用药而药物疗效逐渐降低，产生毒副作用，还有随着寿命的延长而这些问题更加突出。目前高血压治疗依然需要深入研究和完善，中医药对于体质和血压的调节作用，具有整体调理的优势。铁皮石斛乙醇提取物对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响尚未发现有研究，为充分利用铁皮石斛资源，寻找更有效的铁皮石斛降压用法，本实验研究铁皮石斛醇提取物的降血压作用，并探索其降压机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物：10周龄SHR大鼠24只，Wistar大鼠8只，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证：SCXK(京)2016-0011。

1.2 实验药物：铁皮石斛药材批号：160509，购自华东医药股份有限公司。铁皮石斛醇提取样品：加5倍总生药量的75%乙醇55～60℃浸提24小时，提取2次，合并提取物，浓缩，灭菌。对照药品：络活喜（苯磺酸氨氯地平片），5mg/片，批号：R78401，辉瑞制药。

1.3 主要试剂：RNAisoPlus9109：批号：AKA6402，PrimeScript™ RT Master Mix（Perfect Real Time）RR036A：批 号 ：AK5101，SYBR® Premix Ex Taq™ II(Tli RNaseH Plus)RR820A：批号：AK9301，均购自宝生物工程（大连）有限公司，激素检测试剂：天津博奥赛斯高血压系列。

1.4 主要仪器：无创尾动脉血压测量仪BP-98A型，日本软融株式会社；DK-S型数显电热恒温水浴锅：上海浦东荣丰科学仪器有限公司；SW-CJ-1FD净化工作台：上海博迅实业有限公司医疗设备厂；PCR仪：美国ABI Veriti；荧光定量PCR仪：美国ABI StepOnePlus；核酸蛋白质定量仪：美国Thermofisher NanoDrop 2000。

1.5 实验分组：大鼠适应性饲养1周后测量血压及体重，随机将24只SHR大鼠分为3组：铁皮石斛醇提物组(0.8g/kg·d）、络活喜组(0.5mg/kg·d)、模型组、每组8只，雌雄各半。正常Wistar大鼠8只为正常对照组，雌雄各半。各组大鼠灌胃容量为1.33ml/100g体重，正常对照组和模型组均灌胃等量饮用水。实验疗程8周，每周测量1次给药2小时及24小时血压，观察收缩压（SBP）、舒张压（DBP）的1天中的波动变化。

1.6 血压的测量：将大鼠38℃预热5～10min，将BP-98A型无创尾动脉血压测量仪的加压感应器放在大鼠尾根部，并通过配套软件获取数据。每只大鼠清醒安静时测量3次，均值为测量值。

1.7 相关mRNA的表达量检测：大鼠4只/组麻醉处死后取肾脏组织，置于液氮中速冻后-80℃保存。用于检测组织mRNA的表达。使用试剂RNAisoPlus9109提取总RNA，测量浓度和OD260/OD280。用试剂盒PrimeScript™ RT Master Mix（Perfect Real Time）RR036A进行逆转录，cDNA产物稀释5倍后用于qPCR。用试剂盒SYBR®Premix Ex Taq™ II(Tli RNaseH Plus)RR820A检测肾脏血管紧张素Ⅱ1型受体（Angiotensin II Type I Receptors，AT1R）、内皮素(endothelin-1，ET-1)mRNA的表达量，内参引物为β-actin。基因的引物序列见表1。

表1 基因的引物序列

1.9 统计学处理：数据资料用SPSS17.0统计软件处理，采用单因素方差分析（ANOVA），以及LSD-t和Dunnett T3检验方法；数据描述以均数±标准差（±s）表示，P＜0.05和（或）P＜0.01为有统计学意义，差异显著。

2 结果

2.1 铁皮石斛醇提取物对SHR大鼠血压的影响：治疗前铁皮石斛醇提物组、络活喜组与模型组血压无显著差异（P＞0.05），组间有可比性；正常对照组大鼠血压低于同期各组，差异显著（P＜0.01）。

2.1.1 对收缩压（SBP）的影响：两个治疗组给药后2小时SBP从第1次治疗到治疗8周，均显著低于同期模型组（P＜0.01）。在治疗8周、停药3天，两个治疗组给药后24小时SBP均显著低于模型组（P＜0.01）。铁皮石斛醇提物(0.8g/kg·d)的给药后2小时、24小时SBP降压作用与络活喜相近。数据见表2、表3。

2.1.2 对舒张压（DBP）的影响：两个治疗组给药后2小时DBP从第1次治疗到治疗8周，均显著低于同期模型组（P＜0.01）。在治疗8周及停药3天，两个治疗组给药后24小时DBP均显著低于模型组（P＜0.01）；在治疗完成停药3天，铁皮石斛醇提物组给药后24小时DBP显著低于络活喜组（P＜0.05）。铁皮石斛醇提物(0.8g/kg·d)的给药后2小时、24小时DBP降压作用与络活喜相近，部分时间点的降压作用还显著高于络活喜。数据见表4、表5。

表2 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药2小时SBP的影响（±s，mmHg）

表2 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药2小时SBP的影响（±s，mmHg）

注：与模型组比较，▲P＜0.01；与络活喜组比较，●P＜0.01。

疗 程正常组例数 铁皮石斛醇提组 络活喜组 模型组治疗前第1次治疗治疗4周治疗8周141.29±3.44▲●140.25±3.51▲●139.21±3.37▲●143.54±3.62▲●8 8 8 8 207.36±6.66 179.54±2.93▲181.58±4.39▲178.00±4.42▲209.75±8.92 181.13±7.38▲175.67±5.54▲178.13±2.86▲208.42±8.80 205.21±10.58●210.17± 7.15●212.33± 5.75●

表3 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药24小时SBP的影响（±s，mmHg）

表3 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药24小时SBP的影响（±s，mmHg）

注：与模型组比较，▲P＜0.01；与络活喜组比较，●P＜0.01。

疗 程正常组例数 铁皮石斛醇提组 络活喜组 模型组治疗前第1次治疗治疗4周治疗8周停药3天141.29±3.44▲●139.38±4.23▲●139.54±3.38▲●141.83±2.58▲●142.17±2.48▲●8 8 8 8 4 207.36±6.66 207.58±5.23 207.08±6.73 202.00±4.39▲202.08±1.40▲209.75±8.92 203.71±9.18 208.96±7.09 201.96±5.88▲205.42±1.85▲208.42±8.80 205.67±7.52 211.04±9.15 216.96±6.39●214.17±3.57●

表4 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药2小时DBP的影响（±s，mmHg）

表4 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药2小时DBP的影响（±s，mmHg）

注：与模型组比较，▲P＜0.01；与络活喜组比较，●P＜0.01。

疗 程模型组例数 铁皮石斛醇提组 络活喜组正常组治疗前第1次治疗治疗4周治疗8周157.13±6.72 156.42±3.64 163.88±7.88●159.71±5.86▲●8 8 8 8 157.35±6.36 142.83± 4.47▲141.50±13.07▲141.67± 2.05▲156.03±4.47 143.33±10.97▲146.21± 8.50▲144.71± 3.66▲103.56±7.50▲●106.75±4.98▲●101.25±2.82▲●100.75±4.57▲●

表5 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药24小时DBP的影响（±s，mmHg）

表5 铁皮石斛醇提取物对大鼠给药24小时DBP的影响（±s，mmHg）

注：与模型组比较，▲P＜0.01；与络活喜组比较，○P＜0.05，●P＜0.01。

疗 程模型组例数 铁皮石斛醇提组 络活喜组正常组治疗前第1次治疗治疗4周治疗8周停药3天157.13±6.72 162.83±8.61 164.13±6.11 165.38±4.16●165.92±5.50○8 8 8 8 4 157.35±6.36 158.38±6.95 158.71±6.11 156.04±8.39▲149.58±3.45▲○156.03±4.47 158.88±8.34 161.25±7.00 154.33±5.50▲158.67±2.79▲103.56±7.50▲●104.96±6.41▲●102.29±5.30▲●107.54±4.87▲●101.75±7.03▲●

表6 肾脏AT1R、ET-1 mRNA的相对表达量（±s）

表6 肾脏AT1R、ET-1 mRNA的相对表达量（±s）

注：与模型组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与络活喜组比较，○P＜0.05，●P＜0.01。

ET-1mRNA 0.000718±0.000116▲○0.001097±0.000242 0.001287±0.000241 0.000944±0.000101△分组铁皮石斛醇提组络活喜组模型组正常组AT1RmRNA 0.020360±0.002184△●0.004760±0.001083▲0.016201±0.001676●0.013121±0.002459●

2.2 铁皮石斛醇提取物对AT1R、ET-1mRNA相对表达量的影响：如表6所示：模型组AT1R mRNA表达高于正常组，但无统计学意义（P＞0.05），铁皮石斛醇提物组AT1R mRNA表达显著高于模型组（P＜0.01）；络活喜AT1R mRNA表达水平显著低于模型组（P＜0.01）；模型组ET-1 mRNA表达显著高于正常组（P＜0.05），铁皮石斛醇提物组ET-1 mRNA表达显著低于模型组（P＜0.01）。实验结果初步说明，铁皮石斛醇提物下调了ET-1 mRNA表达，上调了AT1R mRNA表达。

3 讨论

高血压病属中医学“眩晕”“头痛”范围，病因多与阴虚阳亢有关，治疗原则为滋阴潜阳。铁皮石斛性微寒，具有滋阴清热作用。有研究表明，铁皮石斛水提取物对易卒中型自发性高血压大鼠具有持久的降血压作用，可有效提高生存率，预防中风[4-6]。有文献报告，不同浓度的石斛乙醇提取物对豚鼠正常血压有显著的降血压作用[7]，但该文献未报告对高血压的治疗作用。本研究表明，铁皮石斛醇提取物可显著降低SHR大鼠血压，降压作用达到了与西药络活喜相近，部分时间点的给药后24小时舒张压低于西药络活喜，说明铁皮石斛醇提取物降压比西药络活喜降压更稳定。

铁皮石斛醇提物上调肾脏AT1R mRNA表达，下调肾脏ET-1 mRNA的表达。其中下调肾脏ET-1 mRNA的表达可能与其降压作用机制有关。