布鲁氏菌病诊断技术的研究进展

布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的危害严重的人畜共患传染病。该病给人类健康带来了严重危害，给畜牧业造成巨大的经济损失。本文将从布鲁氏菌病诊断技术的研究进展进行综述。面的应用越来越广泛。布鲁氏菌特有的DNA序列使PCR技术的检测效果特异而敏感。PCR技术主要用于人布鲁氏菌病的检测。然而，PCR技术用于布鲁氏菌病的诊断中也有一定的问题：已治愈患者体内仍能检测到布鲁氏菌DNA。

一、病原学诊断

1.布鲁氏菌的分离培养。细菌的分离培养是诊断布鲁氏菌病的“金标准”，但失败率高，对慢性布鲁氏菌病几乎无效，常用于羊种布鲁氏菌病和猪种布鲁氏菌病的鉴别诊断，很少用于牛种布鲁氏菌。布鲁氏菌生长困难而且缓慢，Araj对173位急性布鲁氏菌病（可能是羊种布鲁氏菌病）患者的细菌分离培养试验中有91例成功。分离出细菌的时间间隔如下：1周～13%；2周～65%；3周～19%；4周～3%。

2.显微镜检查。采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝脏、脾脏、淋巴结、胎儿和胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法或改良柯氏法染色，镜检，如染成红色球杆状或短杆状，即为布鲁氏菌，小杆菌，而其他细菌则呈现蓝色。这种方法操作简单，结果判定直观明了，但失败率较高。

3.PCR技术。今年来，随着分子生物学技术的发展，PCR技术在布鲁氏菌病的检测，种型鉴定等方

二、血清学诊断

机体在感染布鲁氏菌约一周后便可产生特异性抗体，血清学诊断技术通过对抗体的检测来诊断布鲁氏菌病，目前常用的血清学诊断技术主要有试管凝集试验（SAT）、抗球蛋白试验（AHG或Coombs试验）、补体结合试验（CFT）、以及酶联免疫吸附（ELISA）试验等检测方法。

1.凝集试验。试管凝集试验（SAT）是目前使用最广泛的布鲁氏菌病检测方法，对急性布病有很好的检测效果，试验操作简单，但耗时较长。试管凝集试验结果的判定标准为：牛、马、骆驼等大家畜和人的血清稀释度1∶100及以上为阳性，1∶50为可疑；猪、羊（绵羊、山羊）、犬等小家畜血清稀释度1∶50以上为阳性，1∶25为可疑。

虎红平板凝集试验（RBPT）是用被虎红染色并灭活处理后的布鲁氏菌作为抗原，根据待检血清是否与其发生凝集而判断阴阳性，敏感性较高，操作简便，耗时短，成本低，但准确性易受到温度、缓冲液PH等因素的影响。

2.抗球蛋白试验（AHG）或库姆斯试验（Coombs）。抗球蛋白试验克服了前带效应对凝集试验的影响。许多情况下，AHG可以检测出凝集反应的结果为阴性的阳性样本。由于AHG检测针对IgG抗体，所以将此法用于检测慢性布病收到了良好的效果。

3.补体结合试验（CFT）。补体结合试验（CFT）原理是抗原与相应的抗体结合形成抗原抗体复合物时，抗体分子的构象变化，Fc片段上的补体结合位点暴露，补体与之结合，无法与加入的溶血素和红细胞形成的复合物结合，就没有溶血现象的产生；反之，当待检血清中没有相应抗体，游离的补体与加溶血素和红细胞复合物结合导致溶血现象。因此可以根据溶血现象的发生与否来判断受检血清中是否存在布鲁氏菌的特异性抗体。补提结合试验操作复杂，结论受主观因素影响较大，不利于基层工作的检测。

4.酶联免疫吸附试验（ELISA）。

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一项具有较高灵敏度的检测技术，但其特异性却比凝集试验低。用于布鲁氏菌病诊断的方法主要有间接酶联免疫吸附试验（iELISA）、斑点酶联免疫吸附方法（Dot-ELISA）及竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）等。Magee比较了ELISA（IgG），补体结合试验和抗人球蛋白试验，认为ELISA反应最敏感。

5.各种血清学诊断方法的分析。试管凝集试验，虎红试验，ELISA（IgM）最好在急性感染的早期阶段使用，因为这些试验所检测的IgM是机体从感染后

3 d左右就开始产生初始抗体。机体感染7 d左右产生IgG和IgA抗体，可以通过补体结合试验，抗球蛋白试验，巯基乙醇试验和ELISA（IgG）试验检测。2002年，Nielsen根据多篇文献分析了几种常用的布鲁氏菌免疫学诊断方法敏感性、特异性，具体结果结果见表1：

表1 各血清学诊断试验敏感性、特异性及表现指数

目前存在多种布鲁氏菌病的诊断方法，但都存在一定的缺陷，迄今为止没有任何一种诊断方法能够完全准确的检测出布鲁氏菌病，一般都是综合多种方法的检测结果用于诊断布鲁氏菌病的。布鲁氏菌病的净化需要将疫苗免疫和阳性动物的淘汰相结合，而现有的诊断方法无法区别疫苗接种动物和自然感染动物，但相信随着对布病诊断技术的不断研究，快速、准确，能够区分自然感染动物和疫苗免疫动物的布鲁氏菌病诊断方法一定能够建立出来，这将为布病的防制与净化产生重大意义。