两种试剂盒分别检测猪口蹄疫O型、A型疫苗抗体的对比试验

杨虹 吴聪

1.南昌市动物疫病预防控制中心 2.江西农业大学动物科技学院

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）和联合国粮农组织（FAO）列为A类烈性传染病，我国将其列为一类动物传染病。口蹄疫在世界上许多国家地区都有发生和流行，对各国养殖业造成巨大经济损失。目前，发达国家控制口蹄疫主要采取扑杀、无害化处理等措施。我国采取以疫苗强制免疫为主的综合措施来防控口蹄疫，主要是通过疫苗免疫使动物产生抵抗该病的有效抗体，以达到预防的目的。疫苗免疫后抗体水平检测是评价疫苗免疫效果最简单最直接的方法。

2018年以前，我国对猪一直进行O型口蹄疫的强制免疫，但根据农医发[2018]1号文件“农业部关于印发《2018年国家动物疫病强制免疫计划》的通知”各省自行确定对猪进行A型口蹄疫的强制免疫。因此，本检测室使用VP1-ELISA和SPC-ELISA两种检测试剂盒分别对猪口蹄疫O型、A型二价疫苗免疫抗体进行了免疫效果的对比试验。

一、材料与方法

1.疫苗种类。猪口蹄疫O型、A型二价疫苗，国内某生物制品公司生产。

2.血清样品背景。血清来自本市一个接种猪口蹄疫O型、A型二价疫苗的规模化猪场，随机从一次免疫后28天的猪群中采集30份血样。

3.检测试剂盒。（1）猪口蹄疫O型病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒（VP1-ELISA）：批号20180302，购自郑州中道生物技术有限公司；猪口蹄疫A型病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒（VP1-ELISA）：批号20171001，购自郑州中道生物技术有限公司；（2）口蹄疫病毒O型特异性抗体固相竞争ELISA（SPCE）检测试剂盒（SPC-ELISA）：批号PIO 20/2017，购自IZSLER（意大利进口）；口蹄疫病毒A型特异性抗体固相竞争ELISA（SPCE）检测试剂盒（SPC-ELISA）：批号PIA 4/2017，购自IZSLER（意大利进口）。

4.检测方法。采集的30份猪血液样品经4℃，3 000 r/min离心3 min后取上清液，按试剂盒使用说明书进行检测。

5.结果判定。VP1-ELISA诊断试剂盒O型被检样品OD450值≥Cut Off值0.2842则判为阳性，＜Cut Off值0.2842则判为阴性；A型被检样品S/P值≥0.3判为阳性，被检样品S/P值＜0.3判为阴性。SPCELISA检测试剂盒O型阻断率≥50%判为阳性，＜50%判为阴性。SPC-ELISA检测试剂盒A型阻断率≥50%判为阳性，＜50%判为阴性。

二、结果

1.抗体检测合格率。使用VP1-ELISA诊断试剂盒检测O型、A型口蹄疫抗体合格率分别为86.67%、80.00%，使用SPC-ELISA检测试剂盒检测O型、A型口蹄疫抗体合格率分别为90.00%、83.33%（表1）。

表1 两种试剂盒检测抗体合格率

2.抗体检测离散度。使用VP1-ELISA诊断试剂盒检测O型、A型抗体水平离散度分别为51.57%、62.85%；SPC-ELISA检测试剂盒检测O型、A型抗体水平离散度分别为41.10%、43.59%（表2）。

表2 两种试剂盒检测抗体离散度

3.两种试剂盒符合率。使用SPC-ELISA检测试剂盒检测O型、A型的合格样品中各有1份样品为VP1-ELISA诊断试剂盒检测的不合格样品，二者检测结果相差不大，符合率达96.67%（表3）。

表3 两种试剂盒检测结果符合率

三、结果分析

1.此次使用两种口蹄疫检测试剂盒分别检测O型、A型抗体合格率均在90%以下，影响疫苗免疫抗体合格率高低的因素较多，部分猪抗体不合格可能与猪只健康状况、母源抗体干扰、免疫程序不合理、疫苗保存使用不当、接种操作不规范等因素有关。建议首次免疫后28 d加强免疫一次，使抗体不合格的或低抗体水平的猪只抗体水平达到较高的抗体水平，进而达到更好的免疫效果。

2.抗体水平离散度越小，说明抗体整齐度越高，VP1-EISA诊断试剂盒和进口SPC-ELISA检测试剂盒检测口蹄疫O型抗体水平离散度小于A型抗体水平离散度，表明O型抗体水平整齐度较A型抗体水平整齐。主要原因有三个，一是疫苗中O型、A型抗原的含量有差异，O型的抗原含量比A型高；二是如果O型和A型的抗原含量一致，那么就说明O型抗原的免疫原性比A型强；三是母源抗体的干扰，仔猪免疫前如果母源抗体水平高，对首次免疫的疫苗有一定的拮抗作用。

3.试剂盒检测结果的准确性和试剂盒的敏感性有直接的关系，从两种试剂盒的符合率可以看出，国产VP1-ELISA诊断试剂盒和进口SPC-ELISA检测试剂盒都可以用来评价猪口蹄疫O型、A型二价疫苗免疫后抗体水平，两种试剂盒的敏感性差异不大。但从检测效率考虑，建议使用VP1-ELISA诊断试剂盒进行检测，此种试剂盒操作起来方便，省时省力。

4.根据农医发[2018]1号文件“农业部关于印发《2018年国家动物疫病强制免疫计划》的通知”各省自行确定对猪进行A型口蹄疫的强制免疫，因此从国家政策方面考虑，猪场不但要重视O型口蹄疫的免疫，还要重视A型口蹄疫的免疫，同时免疫后要加强O型、A型抗体的检测，从检测数据评价免疫密度和抗体水平，正确评估猪群抵抗口蹄疫病毒的能力。

参考文献（略）