转基因产品成分检测技术研究进展

◎ 汪 新

（浙江方圆检测集团股份有限公司，浙江 杭州 310018）

随着转基因技术的发展，大量的转基因食物出现在人们的生活之中，因此应当有效促进转基因食品检测技术的有效提升。在国际上建立一定的转基因食品标志监督体系，这也是在国际贸易中突破技术性壁垒的重要发展方式。目前采用的对于转基因成分的检测方式主要有蛋白质水平的检测、核酸水平的检测以及将两者联合进行检测。

1　蛋白质水平的检测技术

酶联免疫吸附法（EnzymeLinked Immunosorbent Assay，ELISA）是以抗原、抗体为基础的免疫学方法，通过特异性检测外源蛋白来定性或定量检测转基因产品。该方法借助于酶标仪可根据已知标注物质的一系列浓度梯度与吸光度值来制作标准曲线，以此确定样品中转基因蛋白的含量，但只能达到半定量检测的水平。

Roland等早在1992年就将ELISA技术用于转基因植物中nptⅡ基因表达产物的定量分析，以抗草甘膦转基因大豆为材料，建立了检测表达CP4EP-SPS蛋白的ELISA定量方法。Kim等采用ELISA检测技术对转基因胡椒中外源基因不同时间表达效率进行了定量比较研究。针对转基因棉花Bt基因表达蛋白和nptⅡ基因表达蛋白能够建立双抗体夹心酶联免疫吸附定量检测方法。

ELISA法具备酶反应的高灵敏度和抗原抗体反应的特异性，同时还可以与PCR相结合，将PCR扩增产物与标记探针进行杂交，再与抗体特异性结合，并使底物显色，可以根据吸光值的标准曲线进行半定量分析，具有操作简单，费用低、特异性好，可实现高通量检测的优点。但ELISA法本身易出现本底过高，以及如保温时间的差异、洗涤方法不同等相关因素都有可能导致检测结果出现偏差，在实际操作中只能检测有限种类未加工的转基因产品。

2　核酸水平上的检测技术

目前，转基因食品技术已经比较成熟，在世界各地中转基因食物已经具有了非常广泛的应用价值与应用空间，为了加强转基因食物的有效食用，应有效地提升加强转基因食物检测安全性。目前核酸水平上的检测技术主要包括多重PCR检测技术、巢式PCR检测技术与定量PCR检测技术，本文从这3个方面进行了相应分析。

2.1　多重PCR检测技术

多重PCR的运用在普通的PCR体系中加入两对或者量对以上的特异性引物，通过一次反应的发生有效扩增多个基因片段，比较快速高效，具有很强的经济性，由于扩增过程中竞争性的存在，使得假阳性出现的概率较低。在基因甜米酒的检测过程中能够达到比较良好的特异性[2]。

2.2　巢式PCR检测技术

巢式PCR检测技术是对同一个基因目标设计两对引物，其中第二对引物能够实现在第一对引物增产的基础上实现二次扩增，同时这两条引物在退火的温度上能够实现互相独立运行，不会产生干扰，通过两轮PCR扩增方式最终实现了对某一基因进行检测的目的。采用半巢式PCR检测技术与巢式PCR检测的原理相同，只是具有一对半引物，运行中只有一条引物被用来当作第二轮的PCR扩增反应。如此采用巢式与半巢式PCR检测技术能够通过检测特异性的提升加强灵敏度与扩增效率的有效提升，在深加工产品的转基因定性分析中具有重要的应用价值与空间[3]。

2.3　定量PCR检测技术

定量PCR检测技术中，应用较多的是实时荧光定量PCR技术，在普通PCR反应中加上荧光基因，这种荧光信号能够实现随着PCR反应的变化而出现相应的变化，一直到反应的平台期即n。在这一过程中可以使用计算机充分记录荧光信号的变化情况，通过比较标准曲线的方式，定量分析被检测样品中的特定成分。由于添加的荧光基因的不同，实时荧光定量PCR分析法可以分为TaqMan探针法与DNA结合染料法即SYBR Green染料法[4]。

3　联合检测技术

不同的检测技术具有其相应的优缺点，在使用过程中将两者进行结合是最有效的检测方式。通过将PCR技术与ELISA技术相结合，能够有效避免有毒物质EB的使用，实现杂交检测的自动化发展，对于仪器的要求比较低，实行起来比较容易操作。通过对NOS终止子、Bar基因、CaMV35S启动子、Gus以及筛选标记基因hpt进行联合检测体系的建立，能够实现对于转基因大米0.1%检测灵敏性的达成，并且在一天之内就可以完成，具有重要的应用价值。将两者进行联合运用符合目前转基因产品成分检测的趋势发展。

4　结语

现代生物技术的发展为外源基因的培育提供了有效的发展途径，但是转基因食品在研究、生产与销售环节上存在着各种扩散与污染隐患，在发展过程中应当引起足够的重视，加强对转基因食品商品化的管理，采用有效的转基因产品成分检测，从而实现对转基因食物进行统一安全地检测。