白鲜皮中脂肪酸类成分的分离与结构鉴定*

杨圣财，王剑丽，李 正，郑 畅，王 涛，张 祎

（天津中医药大学,天津市中药化学与分析重点实验室，天津 300193）

白鲜皮是白鲜（Dictamnus dasycarpus Turcz.）的干燥根皮，其主要成分为萜、柠檬苦素、生物碱、脂肪酸等化学成分，首录于《神农本草经》中品系列，性苦、寒，归脾、胃、膀胱经，具有清热燥湿、祛风解毒之功效[1]。现代药理研究表明，白鲜皮具有抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗变态反应、抗溃疡、抗冠状动脉粥样硬化及保护肝脏、神经等多种生理活性[2]。作者采用多种色谱法相结合，对白鲜皮70%乙醇提取物的化学成分进行分离制备，并利用与文献[3-4]类似的方法，鉴定了5个脂肪酸类化合物，分别为亚油酸（1）、1-O-linoleoyl-glycerol（2）、油酸（3）、棕榈酸（4）、α-棕榈酸单甘油酯（5）。其中2为首次从白鲜属中分离得到，5为首次从该植物中分离得到的化合物。图1。

1 仪器与材料

Bruker 500MR超导核磁共振波谱仪（德国Bruker公司，AvanceⅢ 500 MR），安捷伦 6520系列四级杆-飞行时间质谱仪（美国Aglient公司，6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS）。正相柱色谱用硅胶（48～75 μm），高效液相色谱法用分析柱以及制备柱型号分别为 [Cosmosil 5C18-MS-II（250 mm×4.6 mm，5 μm）及（250 mm × 20 mm，5 μm），Cosmosil PBr（250 mm×4.6 mm，5 μm）及（250 mm×20 mm，5 μm），日本 Nacalai Tesque公司]，氘代试剂（北京崇熙科技孵化器公司）。分析/色谱纯氯仿、乙酸乙酯、石油醚、正己烷、甲醇、乙腈、冰醋酸等试剂购自天津康科德科技有限公司。白鲜皮购自于河北安国，由天津中医药大学李天祥教授鉴定为白鲜属植物白鲜（Dictamnus dasycarpus Turcz.）的干燥根皮。标本保存于天津中医药大学中医药研究中心。

图1 化合物1-5的结构

2 提取与分离

取干燥白鲜皮（9.0 kg），用70%乙醇溶液加热回流提取，减压回收溶剂，得浸膏1 910.1 g。取浸膏1 725.3 g溶于水，用EtOAc-H2O萃取，得到EtOAc和H2O层萃取物分别为267.3 g和1454.9 g。EtOAc层萃取物（175.0 g）经硅胶柱层析 [正己烷-乙酸乙酯（100∶1 → 20∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 3∶1 → 1∶1 → 0∶1，v/v）→ MeOH]，得到 10 个组分（Fr.E1～Fr.E10）。FractionE5（3.9g）经制备型高效液相色谱法（PHPLC）分离制备[MeOH-H2O（90∶10，v/v）5C18-MS-II柱]，得到 10个组分（Fr.E5-1～5-10）。Fraction E5-8（190.0 mg）经 PHPLC 分离制备 [MeOH-H2O（88∶12，v/v）+1%HAc，PBr柱]，得到棕榈酸（4，57.2 mg）和油酸（3，32.3 mg）。Fraction E6（13.0 g）经硅胶柱层析[石油醚-氯仿（1∶1 → 1∶5，V/V）→ 氯仿-丙酮（100∶0→ 100∶1 → 100∶2 →0∶100，V/V）]，得到 5 个组分（Fr.E6-1～Fr.E6-5）。Fraction E6-3（3.4 g）经 PHPLC 分离制备 [MeOH-H2O（85∶15，v/v），PBr柱]，得到 8 个组分（Fr.E6-3-1～Fr.E6-3-8）。Fraction E6-3-6（107.3 mg）经 PHPLC 分离制备 [MeOH-H2O（90∶10，V/V），PBr柱]，得亚油酸（1，34.5 mg）。Fraction E8（37.0 g）经正己烷溶解后离心，将上清液（35.1 g）经硅胶柱层析[石油醚-乙酸乙酯（5∶1 → 3∶1 → 2∶1 →1∶1 → 0∶1，V/V）]，得到 9 个组分（Fr.E8-2-1～Fr.E8-2-9）。Fraction E8-2-6（7.1 g）经硅胶柱层析 [石油醚-乙酸乙酯（5∶1 → 4∶1 → 3∶1 → 2∶1 → 1∶1 → 0∶1，V/V）→ 甲醇]，得 8 个组分（Fr.E8-2-6-1～Fr.E8-2-6-8）。Fraction E8-2-6-4（3.5 g）经 PHPLC 分离制备[MeOH-H2O（85∶15，V/V），5C18-MS-II柱]，得到 10个组分（Fr.E8-2-6-4-1～Fr.E8-2-6-4-10）。Fraction E8-2-6-4-6（50.1 mg）与 E8-2-6-4-7（66.7 mg）分别经 PHPLC 分离制备 [MeOH-H2O（90∶10，V/V），5C18-MS-II 柱]，得到 1-O-linoleoyl-glycerol（2，33.5 mg）和 α-棕榈酸单甘油酯（5，29.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色油状固体。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z 279.2324[M-H]-（calcd for C18H31O2，279.2330），确定其分子式为 C18H32O2。1H NMR（CDCl3，500 MHz）谱数据：δ 2.33（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.63（2H，m，H2-3），1.32（10H，m，H2-4～7 and 15），2.05（4H，m，H2-8 and 14），5.37（2H，m，H-9 and 13），5.34（1H，m，overlapped，H-10），2.77（2H，t，J=7.0 Hz，H2-11），5.34（1H，m，overlapped，H-12），1.28（2H，m，H2-16），1.27（2H，m，H2-17），0.89 （3H，t，J=6.5 Hz，H3-18）。13C NMR（CDCl3，125 MHz）谱数据：δ 180.0（C-1），34.2（C-2），24.8（C-3），29.1～29.6（C-4～7 and 15），27.2（C-8 and 14），130.2（C-9 and 13），128.1（C-10），25.7（C-11），127.9（C-12），31.6（C-16），22.6（C-17），14.1（C-18）。C-8和C-14的化学位移为27.2，确定其构型为9Z，12Z[5-6]。其1H、13C NMR谱数据与文献[14]中报道的亚油酸基本一致，故鉴定化合物1为亚油酸（linoleic acid）。

化合物2：黄色油状固体。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z 433.1956[M+Br]-（calcd for C21H38O4Br，433.1959），确定其分子式为C21H38O4。1H NMR（C5D5N，500 MHz）谱数据：δ 2.34（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.63 （2H，m，H2-3），1.14～1.28（6H，m，H2-4～6），1.34（2H，m，H2-7），2.08（2H，m，H2-8），5.47（2H，m，H-9 and 13），5.48（2H，m，H-10 and 12），2.91（2H，t，J=5.5 Hz，H2-11），2.11（2H，m，H2-14），1.36（2H，m，H2-15），1.26（2H，m，overlapped，H-16 and 17），0.86（3H，t，J=7.5 Hz，H3-18），[4.63 （1H，dd，J=6.5、11.0 Hz），4.70（1H，dd，J=4.5、11.0 Hz），H2-1']，4.44（1H，m，H-2'），4.11（2H，d，J=5.5 Hz，H2-3'）。13C NMR（C5D5N，125 MHz）谱数据：δ 173.7（C-1），34.4（C-2），25.3（C-3），29.4（C-4 and 6），29.5（C-5），29.9（C-7），27.5（C-8 and 14），130.4（C-9 and 13），128.4（C-10 and 12），26.0（C-11），29.6（C-15），31.7（C-16），22.8（C-17），14.2（C-18），66.8（C-1'），70.9（C-2'），64.3（C-3'）。C-8和C-14的化学位移为27.5，确定其构型为9Z，12Z[12-13]。其1H、13C NMR 谱数据与文献[17]相对照，鉴定该化合物为1-O-linoleoyl-glycerol。

化合物3：黄色油状固体。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z 281.2475[M-H]-（calcd for C18H33O2，281.2486），确定其分子式为 C18H34O2。1H NMR（C5D5N，500 MHz）谱数据：δ 2.51（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.79 （2H，m，H2-3），1.24～1.40（16H，m，H2-4～7 and 12～15），2.09（4H，m，H2-8 and 11），5.47（2H，m，H-9 and 10），1.24（2H，m，overlapped，H2-16），1.24（2H，m，overlapped，H2-17），0.87（3H，t，J=6.5 Hz，H3-18）。13C NMR（C5D5N，125 MHz）谱数据：δ 176.1（C-1），34.9（C-2），25.7（C-3），29.5～30.1（C-4～7 and 12～15），27.5（C-8 and 11），130.2（C-9 and 10），32.1（C-16），22.9（C-17），14.3（C-18）。C-8和C-11的化学位移为27.5，确定其构型为9Z[5-6]。其1H、13C NMR谱数据与文献[6]相对照，鉴定该化合物为油酸（oleic acid）。

化合物4：白色固体。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 255.2325[M-H]-（calcd for C16H31O2，255.2330），确定其分子式为 C16H32O2。1H NMR（C5D5N，500 MHz）谱数据：δ 2.51（2H，t，J=7.0 Hz，H2-2），1.79（2H，m，H2-3），1.20～1.41（20H，m，overlapped，H2-4～13），1.25 （2H，m，H2-14），1.24（2H，m，H2-15），0.87 （3H，t，J=7.0 Hz，H3-16）。13C NMR（C5D3N，125 MHz）谱数据：δ 176.0（C-1），34.9（C-2），25.7（C-3），29.6～30.0（C-4～13），32.2（C-14），23.0（C-15），14.3（C-16）。该化合物的结构经1D NMR及包括1H1H COSY、HSQC及HMBC在内的2D NMR谱的解析，鉴定为棕榈酸（palmitic acid）[9]。

化合物5：白色固体。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 365.2474[M+Cl]-calcd for C19H38O4Cl，365.2464），确定其分子式为 C19H38O4。1H NMR（C5D5N，500 MHz）谱数据：δ 2.37（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.66（2H，m，H2-3），1.21～1.26（24H，m，overlapped，H2-4～H2-15），0.89（3H，t，J=7.0 Hz，H3-16），[4.66 （1H，dd，J=5.5、11.0 Hz），4.73（1H，dd，J=4.5、11.0 Hz），H2-1']，4.47（1H，m，H-2'），4.13 （2H，d，J=5.5 Hz，H2-3'）。13C NMR（C5D5N，125 MHz）谱数据：δ 173.7（C-1），34.4（C-2），25.3（C-3），29.4～30.0（C-4～C-13），32.2（C-14），22.9（C-15），14.3（C-16），66.8（C-1'），70.9（C-2'），64.3（C-3'）。其1H、13C NMR谱数据与文献[10]相对照，并结合2D NMR的解析，鉴定该化合物为α-棕榈酸单甘油酯（glyceryl α-mono-palmitate）。

4 总结与讨论

由于传统中药多采取水煎的服药方法，脂肪酸的药理作用长期以来未得到足够的重视。近年来，随着对脂肪酸成分研究的不断深入，其抑菌、抗炎、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗氧化以及调节中枢神经系统的活性陆续被挖掘出来。本课题以白鲜皮为例，对其中的脂肪酸类化合物进行了初步化学成分研究，以期为后续药理学研究奠定了物质基础。