配方乳粉中低聚果糖的含量测定方法比较

◎ 邓伟恒，黎 韵，吴国辉，王柳玲，吴俊发

（广州检验检测认证集团有限公司，广东 广州 511440）

低聚果糖作为一种功能性低聚糖，正广泛使用于食品工业中，其具有促进钙铁镁等的吸收的作用，也能改善肠道功能、增强免疫力。在婴幼儿配方乳粉中，通常当作膳食纤维而添加到其中。现行国家标准GB 5009.255-2016《食品安全国家标准 食品中果聚糖的测定》[1]中有具体的方法对食品中果聚糖进行测定。该方法将样品中蔗糖经蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖，再经硼氢化钠还原成糖醇，多余硼氢化钠用乙酸中和；再加入果聚糖酶将果聚糖水解成果糖和葡萄糖，利用离子色谱测定其果糖含量，经过换算可得样品低聚糖的含量。该方法经过验证，能准确测定配方乳粉中低聚果糖的含量，但同时也有前处理复杂、耗时较长等的缺点。针对这几点，建立了液相色谱法测定配方乳粉中低聚果糖的含量。

1 实验部分

本方法以GB/T 23528-2009《低聚果糖》[2]为基础，通过前处理脱去配方乳粉中脂肪蛋白质等的物质，获得澄清溶液至液相色谱仪通过示差检测器进行测定。

1.1 仪器与试剂

2695/2414 WATERS高效液相色谱仪配备示差检测器，Millipore Milli-Q去离子水发生器。

蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）和蔗果五糖（GF4）低聚果糖标准品，购自WOKO公司；乙腈（HPLC级），购自CNW公司；亚铁氰化钾、乙酸锌和冰乙酸（分析纯）；配方乳粉购自本地超市。

1.2 样品处理

配制亚铁氰化钾溶液（亚铁氰化钾10.6 g用水溶解定容至100 mL容量瓶）、乙酸锌溶液（乙酸锌21.9 g和3 mL冰乙酸，用水溶解定容至100 mL容量瓶）。称取5 g配方乳粉，60 ℃温水溶解，加入5 mL亚铁氰化钾溶液和5 mL乙酸锌溶液，定容至100 mL容量瓶，摇匀，过滤获得澄清溶液。

1.3 标准曲线

称取低聚果糖（GF2、GF3和GF4）标准品各0.25 g（精确至0.1 mg），加水溶解并定容至25 mL容量瓶中，保存在4 ℃冰箱中。使用时，用水稀释配成需要浓度的标准曲线。

1.4 色谱条件

色谱柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm i.d., 5.0 µm，安普）；流动相：乙腈+水=75+25（V/V），等度洗脱；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；采集时间：40 min。检测器：示差折光检测器。

1.5 实验结果

以分析物的峰面积（y）和对应的质量浓度（x，mg/mL）进行线性回归计算，得到线性方程和相关系数。在线性范围0.15～10.0 mg/mL，有良好的线性关系。回归系数均大于0.999。标准图谱见图1。3个标准峰依次为GF2、GF3、GF4。

图1 低聚果糖标准图谱图

样品图谱见图2。样品在GF2和GF3相对应的出峰时间有响应，得到理想峰形的色谱峰，通过计算，结果与其产品质量明示指标相符。

图2 样品图谱图

1.6 数据比较

用液相色谱法与国家标准法同时测定8个添加低聚果糖的配方奶粉，结果见表1。

表1 不同方法测定结果比较表

2 结果与分析

根据实验结果，可见液相色谱法在含量1 g/100 g以上时，检测得出的数据结果与国家标准法和明示值均接近，相对偏差在10%以内。而测定含量在1 g/100 g以下的样品时，往往偏差较大。这可能是由于含量过低时，GF2峰受其前面的乳糖峰影响较大，导致GF2的测定数据结果偏小。因为前处理方法没有对乳糖的处理，而配方乳粉中普遍有很高含量的乳糖，因此会对结果产生较大的影响。经比较可知，液相色谱法和国家标准法均有其自己的优缺点，见表2。

表2 两种方法优缺点表

3 结语

液相色谱法作为一个低聚果糖国家标准方法的改良，能测出具体GF2、GF3、GF4的数值，方法操作简单、快速，定量准确，重现性好，适用于大部分配方乳粉的低聚果糖检测。