3种不同产地蜂胶的成分差异

于梦娇 韩苏苏 高蓬勃 孙丽萍

（1 中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093；2 广西大学，南宁 530004；3 山东五莲食品药品监督管理局，日照 262300）

蜂胶是蜜蜂从植物的嫩芽与树干上采集的树胶与其上颚腺分泌物和蜂蜡等混合加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物[1]，是一种传统的用于治疗多种疾病的民间药材，含有多种化学成分。具有抑菌[2]、抗病毒[3,4]、消炎[5]、止龋、抗癌[6,7]、抗氧化[8]、增强免疫力[9]、降血糖[10]等保护身体健康、抵御疾病入侵的作用，作为一种保健食品，应用于医药、保健品、化妆品等行业，流行于世界各地。蜂胶的成分主要依赖于蜜蜂所采集树脂的植物，受季节、气候、蜜蜂种类、采集方法等因素的影响[11-14]。由于世界各地的胶源植物不同，植物种类存在明显差异，所产生树脂的化学成分相差很大[12-14]，因此世界各地的蜂胶成分也不相同，其化学成分具有十分明显的地域性[15]，对某一产地蜂胶的研究结论往往不适用于其他产地的蜂胶，要实现对蜂胶品质的监控，必须对不同产地的蜂胶成分进行研究[15]。

目前国内外已有不少对蜂胶中有效成分提取及含量分析的报道文献[16-18]，有文献报道[19]了对于中国蜂胶的总酚、黄酮含量的测定，但对于马来西亚无刺蜂蜂胶和巴西绿蜂胶文献的报道仅仅是分离得到总酚、黄酮和萜类成分[20-22]，未见3类成分含量测定的报道，更未见3地蜂胶3类成分差异的报道。

因此，本文通过紫外分光光度法对马来西亚、巴西、中国3种不同产地的蜂胶进行成分含量分析，用紫外分光光度法对这3种不同产地的33个蜂胶样品的总酚类、黄酮类和萜类含量进行测定分析，并且通过聚类分析对测定的含量差异进行分析，以期为研究不同地域蜂胶的特征组分分类、不同地域蜂胶成分和不同地域蜂胶的质量控制提供科学数据。

1 材料与仪器

1.1 实验材料

马来西亚无刺蜂蜂胶10个（编号M1-M10），采自马来西亚Sarawak州Sibu的常青蜂场，地处Nanga Dap森林，Kanowit，东经2°，北纬112°；巴西绿蜂胶6个（编号B1-B6），由江苏江大源健康科技股份有限公司提供；中国蜂胶16个，包括东北蜂胶7个（编号D1-D7）和华北蜂胶9个（编号H1-H9），由各定地蜂场采集。

熊果酸标准品：源叶生物B21403，HPLC≥98%；香草醛：Solarbio北京索莱宝科技有限公司，SV8230；福林酚；碳酸钠；三氯化铝；高氯酸、冰醋酸、无水乙醇等均为分析纯。

1.2 实验仪器

UV-2550紫外分光光度计（日本岛津），MS 304/S电子天平（梅特勒-托利多）；恒温水浴锅（苏州金坛市中大仪器厂）；RE-2000B旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ-500DB超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

2 实验方法

2.1 蜂胶醇提液制备

33个蜂胶样品经-70℃冷冻后粉碎，精密称量1.6g（精确至0.0001g），加入50ml无水乙醇，超声提取10min，放置2h再超声提取10min，总共超声提取3次，过滤定容至50ml，备用。

2.2 萜类含量测定标线[23-25]

用无水乙醇将熊果酸配成0.10mg/ml的标准溶液，精密量取0.70、0.90、1.10、1.30、1.50、1.70ml，水浴蒸干后，加5%香草醛-冰醋酸0.40ml（现配现用），加高氯酸1.00ml，混匀，密闭条件下在60℃水浴中反应10min，即刻冰浴冷却3min，加冰醋酸定容至10ml，摇匀。用分光光度计在544nm波长下测定吸光度值，以熊果酸浓度（C，μg/ml）为横坐标，吸光度的差值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品测定：取一定体积的蜂胶醇提液代替标准溶液进行检测，每个样品做3个平行，结果用平均值±SD表示。

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2.3 总酚含量测定标线[26]

精准称取一定量的碳酸钠，加入去离子水，配制得到20%的碳酸钠溶液备用。准确称量一定量的没食子酸，用95%的乙醇定容至10ml，制成0.10mg/ml的溶液。吸取该溶液0.15、0.20、0.25、0.30、0.35ml分别置于5ml容量瓶内，各加入3ml去离子水，0.25ml Folin phenol试剂，摇匀，静置5min，再各加入0.75ml 20%的碳酸钠溶液，用去离子水定容至5ml，混合均匀，常温下避光静置30min。在763nm波长下测定吸光值，以没食子酸浓度（C，μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

样品测定：取一定体积的蜂胶醇提液代替标准溶液进行检测，每个样品做3个平行，结果用平均值±SD表示。

2.4 黄酮含量测定标线[26]

精密称量三氯化铝配制成1%的三氯化铝乙醇溶液。精密称取芦丁对照品1mg，用95%的乙醇定容至10ml，制成100μg/ml的标准溶液，分别吸取该溶液0.80、1.00、1.20、1.40、1.60、1.80、2.00ml各加入1.00ml 1%三氯化铝乙醇溶液，用95%乙醇溶液定容至10ml，混合均匀，静置10min。在405nm波长下测定吸光值，以芦丁浓度（C，μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准回归曲线。

样品测定：取一定体积的蜂胶醇提液代替标准溶液进行检测，每个样品做3个平行，结果用平均值±SD表示。

2.5 数据处理

采用SAS 9.1统计分析软件聚类分析中的最短距离法进行聚类分析。

3 结果与分析

3.1 3种不同产地蜂胶总酚、黄酮和萜类含量分析

采用紫外分光光度法测定3种不同产地的33个蜂胶样品的总酚、黄酮和萜类含量，结果见表1。

如表1所示，3种不同产地蜂胶的总酚含量相差很大，中国蜂胶总酚含量最高，高达143.565mg/g；马来西亚蜂胶的总酚含量最低，仅为11.624mg/g，不到中国蜂胶总酚含量的1/10；巴西绿蜂胶总酚含量介于中国蜂胶与马来西亚蜂胶之间，为81.299mg/g。

表1 3种不同产地蜂胶样品总酚、黄酮和萜类含量（mg/g）

与上述两指标相同，3种不同产地蜂胶的萜类含量相差也很大，马来西亚蜂胶萜类含量高达335.022mg/g，位列第一；中国蜂胶的萜类含量最低，仅为76.636mg/g，不到马来西亚蜂胶萜类含量的1/4；巴西绿蜂胶萜类含量介于马来西亚蜂胶与中国蜂胶之间，均值为168.795mg/g，约为中国蜂胶的2倍多，略多于马来西亚蜂胶的一半。

通过对3种不同产地的33个蜂胶样品的总酚、黄酮、萜类含量的测定分析发现，马来西亚无刺蜂蜂胶、巴西绿蜂胶和中国蜂胶三者成分明显不同，中国蜂胶以高含量的总酚和黄酮为特征，这与Gardana C等[27,28]人报道的中国蜂胶以多酚和类黄酮为主要成分相吻合；马来西亚无刺蜂蜂胶以高含量的萜类为特征，这与Nurhamizah Ibrahim等[21]人的报道一致，究其原因可能是马来西亚无刺蜂蜂胶主要来源于热带植物，其中萜烯类化合物是这种蜂胶中主要的活性成分[21]；而巴西绿蜂胶中这3类成分含量比较均匀，与中国蜂胶、马来西亚蜂胶相比没有明显特征。本实验结果及相关文献[29,30]均表明来自不同国家和地区的蜂胶的化学成分确实存在差异，成分的差异会带来活性的差异，在研制不同产地蜂胶产品时需加以注意。

3.2 3种不同产地蜂胶总酚、黄酮和萜类含量的聚类分析

3.2.1 总酚类含量的聚类分析

为了更加清晰的比较这3种不同产地蜂胶样品总酚类含量之间的关系，对测定结果做了聚类分析，结果见图1。

如图1所示，马来西亚10个蜂胶样品（M系列）总酚含量的聚合度非常高；巴西绿蜂胶中4个样品（B1、B2、B3、B6）总酚含量的聚合度也非常高，另2个样品（B4、B5）总酚含量与中国蜂胶样品总酚含量具有较高的聚合度，而3种不同产地蜂胶样品总酚含量之间的聚合度却很低，具有明显的差异，其中马来西亚蜂胶样品与另外2种蜂胶样品的总酚含量聚合度非常低，说明相同产地蜂胶样品的总酚含量差异不大，而不同产地蜂胶样品的总酚含量差异比较大。因此，可以用总酚这个指标将马来西亚蜂胶与巴西绿蜂胶、中国蜂胶加以区分，而巴西蜂胶样品的总酚含量与中国蜂胶相近，聚合度较高，不能用总酚这一指标加以区分，需要接下来进一步研究，较为全面地了解蜂胶更多的有用信息，以期通过其他方法将两者区分开。

图1 3种不同产地蜂胶样品总酚含量的聚类分析图

图2 3种不同产地蜂胶样品黄酮含量的聚类分析图

3.2.2 黄酮类含量的聚类分析

为了更加清晰的比较这3种不同产地蜂胶样品黄酮类含量之间的关系，对测定结果做了聚类分析，结果见图2。

如图2所示，马来西亚（M系列）的10个蜂胶样品与巴西、中国这2个产地的蜂胶黄酮含量的聚合度很差。相比其他2种蜂胶黄酮含量，马来西亚的10个蜂胶样品（M系列）黄酮含量比较少，可以通过黄酮含量将马来西亚蜂胶与巴西绿蜂胶、中国蜂胶加以区分，而巴西蜂胶的黄酮含量与中国蜂胶的聚合度较高，通过聚类分析结果看差异不明显，不能用黄酮这一指标进行区分，这就需要接下来进一步研究，较为全面地了解蜂胶更多的有用信息。

3.2.3 萜类含量的聚类分析

为了更加清晰的比较这3种不同产地蜂胶样品萜类含量之间的关系，对测定结果做了聚类分析，结果见图3。

图3 3种不同产地蜂胶样品萜类含量的聚类分析图

如图3所示，17个中国蜂胶样品萜类含量的聚合度很高，具有高度一致性。与此同时，马来西亚的10个蜂胶样品（M系列）萜类含量的聚合度非常高，巴西绿蜂胶的6个蜂胶样品（B系列）萜类含量的聚合度也非常高，说明来自同一个产地的蜂胶样品萜类含量比较相近，从而可以根据萜类含量对不同产地的蜂胶样品进行分类，为不同产地蜂胶样品的分类提供了依据。另外，巴西绿蜂胶（B1-B4）的萜类含量与中国蜂胶萜类含量的聚合度较高，巴西绿蜂胶（B5、B6）的萜类含量与马来西亚（M系列）蜂胶的聚合度较高，说明通过萜类含量可以将马来西亚蜂胶与巴西绿蜂胶、中国蜂胶这三者区分开。

通过对上述总酚、黄酮、萜类这3个指标含量的聚类分析发现，这3类成分在不同种的蜂胶样品中相对含量差异较大，可以通过这3种成分的含量对这3个地域的蜂胶加以区分。蜂胶的总酚类、黄酮类、萜类成分与地域来源具有关联性，从而可以推测根据蜂胶的这3类成分的差异来判定其来源。

4 小结

实验结果分析可知，中国、巴西和马来西亚3地蜂胶的萜类、总酚、黄酮含量差异很大；其中马来西亚蜂胶萜类含量最高，平均每g蜂胶可达335.022mg，总酚和黄酮含量为三者最低；中国蜂胶含有高含量的总酚和黄酮类成分，萜类含量最低；巴西绿蜂胶的萜类、总酚、黄酮含量在3地样品中表现均衡，既没有马来西亚蜂胶的高萜类特征，也没有中国蜂胶的高酚类及黄酮特征。通过聚类分析可知用萜类指标可以明确将马来西亚蜂胶、巴西绿蜂胶和中国蜂胶相互区分开。本实验为进一步研究不同地域蜂胶的特征组分分类、不同地域蜂胶成分和不同地域蜂胶的质量控制提供了实验数据。