分光光度法在食品大肠菌群数快速检测中的应用

□ 王 斌 郎 平 新疆维吾尔自治区喀什地区食品药品检验所

随着人们生活水平的提升，食品安全问题逐渐成为了各国公众关注和政府关注的热点问题[1]。大肠菌群是一种广泛分布在自然界和温血动物粪便中的细菌群体，是引起食品被污染的主要病原微生物，为此，加强对大肠菌群的快速检测，成为了当前食品药品监督管理的重要任务[2]。结合大肠菌群的特性，人们在对其检测时，主要采用分光光度法，现对其实施方法及效果总结如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料

大肠杆菌菌种（新疆维吾尔自治区喀什大学）；伊红美兰培养基、去氧胆酸盐琼脂、乳糖胆盐培养基（广东环凯）；分析纯（上海生物科技）。

1.1.2 仪器

分光光度计（上海元析仪器，UV-8000ST）；温度气压真空工作台（成都星华冠机电）；手提式压力蒸汽消毒器（莱富医疗，LF-23L-E）；电子天平（上海精天电子仪器）等。

1.2 方法

1.2.1 培养基制备

①乳糖胆盐培养基：精密量取乳酸胆盐培养基粉末45 g，将其溶解到1 000 mL蒸馏水中，充分煮沸，高压灭菌后备用。②LB液体培养基：精密量取LB培养基粉末1.25 g，将其溶解到50 mL蒸馏水中，充分加热溶解，高温灭菌后备用。③伊红美兰混合液：精密量取美兰水溶液13 mL与伊红水溶液20 mL充分混合，制作成伊红美兰混合液，高温灭菌后备用。

1.2.2 浓缩菌液制备

为保障分光光度法灵敏度得到有效提升，均在菌液浓缩之后再实施检测。本研究主要运用0.45 μm混合酯滤膜来对待检样品进行过滤处理。

1.2.3 不同浓度菌液制备

在净化工作台内，在50 mL LB液体培养基中接种大肠菌群菌种，密封，放置在37 ℃摇床中，以190 r/min持续培养18 h，即可获得大肠菌群饱和菌悬液，浓度为108个/mL。取饱和菌悬液10 mL将其置于1号试管，注入无菌生理盐水9 mL，完成1∶10稀释液的制备；另取1∶10稀释后饱和菌悬液1 mL置于2号试管，注入9 mL，完成1∶100稀释液的制备。按照上述相同的方法完成不同浓度菌液的制备，分别为：1∶103、1∶104、1 ∶ 105、1 ∶ 106、1 ∶ 107、1 ∶ 108。

2 结果与分析

2.1 吸收曲线

根据实验方法进行培养，显色逐渐稳定之后，将波长设定在400～700 nm范围内扫描，选取入射光波长。根据结果来看，波长在500 nm时，达到最大吸收度。故本研究以500 nm作为测定波长。

2.2 标准曲线的绘制

本研究将大肠菌群含量作为纵坐标，将分光光度计测得的吸光度值设定为横坐标，构建起标准曲线。通过对该工作曲线即可进行菌液的测定，且能够在2.5 h完成对菌液的检测，根据测定结果，直线回归方程为y=-16.029x+6.4005，r2=0.9911，具有较好的线形关系。

2.3 精密度实验

向6号培养基中加入5 μL待测浓缩菌液，根据实验方法在实施操作之后，在500 nm波长部位连续进行5次吸光度测定，并基于此实施精密度实验。根据连续5次的测定结果来看，其相对标准偏差（RSD）=2.550%，表明其精密度较高。

2.4 样品误差分析

自市面上购入大葱、白菜和黄瓜，采用分光光度法对其进行重复3次的检测，取检测结果平均值，大葱平均误差为2%、白菜平均误差为10.6%和黄瓜平均误差为0.45%。见表1。

表1 样品误差分析

2.5 相关性分析

根据上述样品检测结果，另从市面上选取75个不同的样品再次实施检测。根据检测结果来看，其相关系数r=0.9954，具有较好相关性。

3 结论

在食品大肠菌群数检测中，分光光度法是一种具有较高精密度和相关性的方法，其能够在较短施加内完成对食品大肠菌群数的检测，在保障食品安全上具有重要作用。