人细小病毒B19抗体及抗心磷脂抗体(aCL)在流产人群中的检测价值

高 阳,宋 阳，陈 陆，李 英，翟燕红

(首都医科大学附属北京妇产医院 检验科，北京100026)

非人为自然状态下出现的提前终止妊娠被称为自然流产，世界卫生组织(WHO)一项报告指出，在全部确认的妊娠中，发生自然流产的比例超过15%。目前认为孕周<12周的流产为早期流产，孕周12-28周的流产为晚期流产。超过80%的流产发生于12周之前，随后随孕周增加流产率迅速降低[1]。虽然至今尚未完全明确自然流产的确切病理、生理机制，但多数学者认为其与染色体异常、母体内分泌失调、母体生殖道的异常、生殖道感染等众多因素均有一定联系。随着医学检验、诊断技术的提高，自然流产分子领域的研究取得一定进展[2]。有报道称约40%的胎内死胎、自然流产妇血清能检测到高滴度的B19IgM以及B19IgG，而这一比例在正常孕产妇中仅为3%-15%[3]。抗磷脂综合征已被证实与稽留流产具有明显的关系，而抗磷脂综合征的发生与血清aCL水平具有直接的关系。aCL是一组异质自身抗体，通过对血浆蛋白-磷脂免疫复合物的直接拮抗作用以及单纯对血浆蛋白起作用参与到流产过程[4]。当前国内对B19与aCL与流产人群的关系报道较为缺乏，现进一步研究人细小病毒B19抗体及抗心磷脂抗体(aCL)在流产人群中的检测价值，为流产的预防提供理论依据，报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

本研究观察对象为2015年1月-2017年1月于我院妇产科就诊的386例自然流产患者以及年龄配对的200例自愿终止妊娠的孕产妇，分别设为观察组与对照组。观察组最低年龄21岁，最高43岁，平均(30.23±3.43)岁；有流产史176例，无流产史210例；有分娩史75例，无分娩史311例；自然流产孕周最短3周，最长22周，平均(10.34±1.21)周；对照组最低年龄20岁，最高39岁，平均(29.43±3.65)岁；有流产史86例，无流产史114例；有分娩史35例，无分娩史165例；要求流产孕周最短4周，最长15周，平均(7.34±1.03)周；本研究取得我院伦理委员会许可。纳入标准：年龄>20岁；无停经史；血清HCG检测阳性；B超检查子宫内有孕囊；观察组均于孕周28周发生自然流产；对照组自愿终止妊娠；孕产妇对研究知情并签署知情同意书；单胎妊娠；排除标准:跌倒、碰撞等其他物理因素导致的流产；合并肝病、高血压、肾病等全身性疾病。比较两组孕产妇年龄、流产史、分娩史差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

抽取空腹肘静脉血4 ml，采用离心机以3 000 r/min转速离心15 min，分吸上层血清后保存于-30℃恒温冰箱。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组孕产妇血清aCLIgG、aCLIgM水平，提取待检血清，室温下解冻，采用酶联免疫吸附试验ELISA检测试剂盒(德国 AESKU公司)检测aCLIgG、aCLIgM水平，根据配套的试剂及底物严格按照试剂盒说明书操作。根据试剂盒厂家阳性样本单克隆抗体校验结果进行阳性评价，aCLIgG>3 U/mL、aCLIgM>20 U/mL判定为阳性。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测B19IgG、B19IgM水平，ELISA试剂盒由德国赛润公司提供，试剂盒包括样本孔、标准品孔以及空白孔，标准品孔按照持续滴加浓度不同的标准品50 μl；样本孔先加待测样本10 μl，再加样本稀释液40 μl，空白孔不加，空白孔除外，样本孔、标准品孔分别滴加100 μl已由辣根过氧化物酶(HRP)标记后的检测抗体，反应孔采用配套封板膜做密封处理，恒温箱温育(37℃，60 min)后丢弃液体并用专用吸水纸吸干，每孔加满洗涤液，洗涤液为按1∶19比例的洗涤缓冲液与蒸馏水混合物，静置1 min后将洗涤液甩干并采用吸水纸吸干，重复此步骤5次；每孔各加入50 μl A、B底物，避光孵育(37℃，15 min)。每孔添加终止液50 μl后15 min内于450 nm波长处进行各孔的光密度值的测定，根据试剂盒说明书得出浓度。所有操作均由我院检验科经验丰富的医师完成。

1.3统计学分析

2 结果

2.1两组B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM阳性率比较

观察组B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM阳性率分别为5.08%、41.71%、52.33%、55.44%，对照组分别为6.00%、11.00%、7.00%、7.00%，观察组均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM阳性率比较[n(%)]

2.2两组血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平比较

观察组血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平分别为(1.65±0.23)U/mL、(1.76±0.27)U/mL、(4.54±0.23)U/mL、(22.43±3.32)U/mL，对照组分别为(0.67±0.12)U/mL、(0.54±0.15)U/mL、(2.34±0.15)U/mL、(6.51±1.02)U/mL，观察组均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平比较(U/mL)

3 讨论

所有妊娠中自然流产比例占到15%-30%，目前大量的流行病学调查以及影响因素报道均显示引起女性自然流产的原因较多，有报道显示母婴血型不合、胎盘发育不良、外伤、生殖器官疾病、内分泌功能失调、孕妇全身性疾病等均可能导致。近年来报道显示50%-60%的自然流产与免疫因素有关，而其中约30%与抗磷脂抗体等自身免疫性抗体有关[5]。抗磷脂抗体(aPL)包括aCL、抗磷脂酰丝氨酸抗、抗磷脂酸抗体、狼疮抗凝物(LA)等，又以LA与 aCL与流产关系最为紧密，已成成为当前关于自然流产分子领域的研究热点[6]。有研究证实表面而抗磷脂综合征的发生与血清aCL水平具有直接的关系，aCL可能通过对前列环素(PGI 2)合成的阻止作用导致血栓素A2 (TXA 2)/ PGI2平衡失常，而TXA 2相对增多可造成孕产妇全身以及胎盘血管痉挛缺血而引起流产[7]。

近年对 B19结构研究显示B 19是已知的结构最简单、体积最小的DNA病毒，属于一类微小病毒科微小病毒属病毒，编码B19，能感染各年龄段人群并于人体细胞内自主复制而出现相关疾病[8]。自首次报道B19感染可引起流产以来，研究人员逐步开展了B19与妊娠的相关研究,报道显示B19感染能够引起血管相关病症、造血功能障碍、中枢神经系统感染等，孕妇感染B19是造成胎儿死亡、流产、胎儿畸形、非免疫性胎儿水肿的常见原因[9]。孕妇感染B19 后30%出现母胎垂直感染，但部分孕产妇能分娩正常婴儿，但流产、胎儿水肿、胎儿死亡等均会发生[10]。研究发现胎儿细胞处于快速分裂阶段，而B19对快速分裂的细胞亲嗜力较强，在感染B19后细胞内可见特征性染色质着边现象以及核内包涵体， 电镜下观察细胞质、细胞核明显变性，包涵体内发现病毒颗粒[11]。观察组孕产妇血清B19IgG、B19IgM水平明显高于对照组，提示B19含量增加，由于胎儿细胞受病毒的作用而变性死亡，引发一系列的功能障碍，胎儿发生缺氧、贫血，形成水肿，最终诱发流产[12]。

国内外相关报道均认为aPL属于一组自身免疫抗体，而aPL阳性率在患者妊娠并发症等高危妊娠群体中明显较高[13]。国内报道aCL在所有人群中检出阳性率为3%-7%，国内有关报道显示育龄妇女aCL阳性率约5%-11%[14]。本研究结果显示对照组血清aCLIgG、aCLIgM阳性率均为7.00%，观察组这一比例分别为41.71%与52.33%，与其研究结果相符。上文提到aCL可造成胎盘血管痉挛缺血，aCL还对争夺胎盘血管内的磷脂受体,磷脂受体缺乏引起胎盘栓塞及蜕膜血管病变。此外,有研究称aCL 还能促进合成血小板活性因子，蛋白C 活性降低，加速血小板聚积，促进血栓形成[15]。血栓形成导致胎盘发生一系列病理改变,胎儿-胎盘单位功能受到损害,引起胎儿缺氧、缺血、死亡，最终诱发流产[16]。

综上所述，自然流产孕产妇B19抗体、aCL抗体水平均显著高于正常孕产妇，提示其可能参与孕产妇流产的发生，动态监测B19抗体、aCL抗体水平对自然流产的预防具有十分重要的意义。

作者简介：高阳(1977-),女,蒙古族,主管技师,大学本科,从事检验工作。