Capn4和Ki-67在宫颈癌中的表达及意义

杨 帆，李东豫，袁 艺

(河南省第二人民医院 1.妇产科；2.病理科， 河南 新郑451191)

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，占据女性恶性肿瘤死亡率第二位，而肿瘤细胞的浸润是其致死的主要因素，早诊断、早治疗是提高宫颈癌远期生存率的重要方法[1]。已有研究证实Capn4和Ki-67与结肠癌等恶性肿瘤的侵袭、发展密切相关[2]。本研究通过检测Capn4和Ki-67在宫颈癌中的表达及其临床意义，进一步探讨宫颈癌的发生、发展、浸润、转移等过程的具体机制[3]。

1 资料与方法

1.1一般资料

于2015年6月-2016年12月，选择我院择期行宫颈癌根治术患者的癌组织病理蜡块70例作为实验组，选取因子宫脱垂等其它良性病变行子宫切除术的正常宫颈组织病理蜡块35例作为对照组，所有蜡块均经术后病理确诊。纳入标准：患者临床资料完整；TNM分期Ⅰ-Ⅳ期；术前未接受过任何针对宫颈癌的治疗。实验组年龄在28-85岁之间，中位数是60岁；淋巴结转移者40例，未转移者30例；分化级别高分化31例，中分化28例，低分化11例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期29例；Ⅲ期和Ⅳ期41例。TNM分期遵循国际妇产科协会(FIGO)及国际妇产肿瘤协会(IGCS)制定的最新《妇科恶性肿瘤分期及临床实践指南》。

1.2方法

实验组所有病理蜡块均采用免疫组织化学S-P法，蜡块切片水化后，使用蒸馏水和PBS分别冲洗，甩掉多余的血清后分别滴加一抗：浓度为1∶300的兔抗人Capn4多克隆抗体(大连微生物库存所)、浓度为1∶100的鼠抗人Ki-67单克隆抗体(大连市金宇生物技术有限公司，)孵育过夜，PBS冲洗后滴加二抗，苏木素染色后显微镜下观察。对照组使用PBS代替所有其他试剂。

1.3观察指标

Capn4蛋白主要在细胞质中表达，Ki-67蛋白主要在细胞核中表达。细胞质阳性表达标准是：5个400倍视野中阳性细胞的数目所占百分率≤5%记0分，6%-25%记1分，26%-50%记2分，51%-75%记3分，>75%记4分；显色强度中未着色者记0分，淡黄色记1分，深黄色记2分，深褐色记3分。数目+显色记分≥3即为阳性。细胞核阳性表达标准是：5个高倍镜视野阳性细胞占百分率≥10%。

1.4统计学分析

应用 SPSS20.0 软件进行数据统计分析。计数资料采用卡方检验及秩和检验；数据间相关性采用Spearman分析，P<0.05即有统计学差异。

2 结果

2.12组患者Capn4和Ki-67的表达

宫颈癌组织中Capn4和Ki-67的表达率分别是72.9%(51/70)、85.7%(60/70)显著高于正常宫颈组织(P<0.05)，见表1。

表1 2组患者Capn4蛋白和Ki-67蛋白的表达

注：*P<0.05与对照组比较，差异有统计学意义

2.2宫颈癌组织中Capn4和Ki-67蛋白的表达水平与其临床病理特点的相关性

浸润范围方面，侵及浆膜层组宫颈癌组织中Capn4和Ki-67蛋白的表达阳性率分别为85.2%和96.3%，显著高于未侵及浆膜层组(P<0.05)；TNM分期方面，Ⅲ-Ⅳ期宫颈癌组织中Capn4和Ki-67蛋白的表达阳性率分别为95.1%和97.6%，显著高于Ⅰ-Ⅱ期组(P<0.05)；淋巴结转移方面，淋巴结转移的宫颈癌组织中Capn4和Ki-67蛋白的表达阳性率分别为95.0%和90.7%，显著高于淋巴结未转移组(P<0.05)，而两者的表达水平在患者的年龄及肿瘤分化程度分级中无明显差异(P>0.05)，见表2。

表2 Capn4蛋白、Ki-67蛋白表达与宫颈癌临床特点的相关性

3 讨论

Capn4是Calpains家族中的一个小亚基，目前研究证实，Capn4在维持细胞的正常功能中起到重要作用[4]，对细胞的凋亡起到促进和抑制的双向作用，近几年研究证实Capn4在肝癌、肾透明细胞癌、鼻咽癌、直肠癌等恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移等过程中发挥重要作用[5]。本研究经免疫组化检测结果提示宫颈癌组织中Capn4的表达率高达72.9%显著高于正常宫颈组织(P<0.05)，且其表达水平与宫颈癌的浸润深度(侵及浆膜层者85.2%)、TNM分期(Ⅲ-Ⅳ期95.1%)、有无淋巴结转移(淋巴结转移者95.0%)密切相关。细胞核增殖指数(Ki-67)是细胞的分裂及增殖活性的标志物，其表达水平越高，提示细胞的分裂及增殖活性越高[6]，目前已有研究证实Ki-67在胃癌、结肠癌、直肠癌中表达明显升高且其表达水平与恶性肿瘤的浸润范围、TNM分期及淋巴结是否转移密切相关。本研究中，宫颈癌组织中Ki-67的表达率高达85.7%显著高于正常宫颈组织(P<0.05)，且其表达水平与宫颈癌的浸润深度(侵及浆膜层者96.3%)、TNM分期(Ⅲ-Ⅳ期97.6%)、有无淋巴结转移(淋巴结转移者90.7%)密切相关，验证了以往研究的结果，也进一步证明了Ki-67在预测宫颈癌中的重要价值。

综上所述，宫颈癌组织中Capn4和Ki-67的阳性表达率较正常宫颈组织显著升高且与宫颈癌组织的浸润范围、TNM分期及淋巴结转移有关，分期越晚、浸润范围越广、淋巴结转移阳性者其表达水平越高，提示两者可能成为预测宫颈癌的敏感指标且能起到评估宫颈癌恶性程度的作用，为宫颈癌的早期诊断及治疗提供了新的临床思路。

作者简介：杨帆(1982-),女,河南新郑人，本科学历，河南省第二人民医院妇产科主治医师。