花生壳提取物对蛋鸡抗氧化功能及产蛋性能的影响

杨 慧, 吴俊穗, 俞秀红, 徐 磊, 林君瑾(.福建农业职业技术学院科研处，福建 福州 50007；.福州市畜牧站，福建 福州 50007；. 福建省高新技术创业服务中心，福建 福州 5000)

蛋鸡后期产蛋率的下降与其高峰期高产后体内自由基的增多引起的快速衰老有关，而在饲料中增加抗氧化剂能减少或清除自由基，减轻自由基氧化应激对动物体的有害作用[1].初期在畜禽生产上通过添加人工合成的抗氧化剂来减少或清除活性氧自由基和有毒代谢物质,可提高畜禽的生产性能[2].但随着有关研究的深入，人们发现一些人工合成的抗氧化剂具有明显的毒性，如高水平的丁基羟基茴香醚(BHT)、二丁基羟基甲苯(BHA)和叔丁基对苯二酚(TBHQ)会使肝肿大[3]；尤其是BHT会增高肝微粒体酶系的活性，因而有的国家(如美国)早已禁止使用BHT了.

近年来从自然界寻求天然抗氧化剂的研究己引起各国研究者的高度重视，大量天然抗氧化剂产品深受关注[4].研究表明，花生壳富含多酚类物质木樨草素[5]，木樨草素抗氧化活性强，对抑菌、延缓机体衰老具有很好的效果[6].且动物对从花生壳中提取的木犀草素的生物利用度明显高于纯木犀草素[7].然而，目前尚未见有关花生壳提取物对蛋鸡机体抗氧化功能和产蛋性能影响的研究报道.本试验在蛋鸡产蛋后期的饲粮中添加不同剂量的花生壳提取物，探讨其对蛋鸡后期产蛋性能和抗氧化功能的影响，并研究延缓蛋鸡后期产蛋率下降的最适添加量，旨在为高产蛋鸡天然抗氧化剂的筛选和应用提供参考.

1 材料与方法

1.1 材料

选取粤油256花生(ArachishypogaeaLinn)为试材，花生壳提取物由本课题组和福建中农牧生物药业有限公司采用超高压技术自主提取[8]，提取物主要成分为多酚、纤维素、半纤维素和木质素.在乙醇体积分数70%、液固比28、超高压压力320 MPa、提取时间7.2 min的提取条件下，粗提物中的多酚得率为4.27%.粗提物经大孔吸附树脂分离纯化后，花生壳提取物中的多酚含量达16.1%，多酚主要成分为木樨草素、间苯三酚、圣草酚、槲皮素和儿茶酚,其中，木樨草素的含量为10%.

选取4 096只体重、产蛋率相近的49周龄京粉蛋鸡为试材.

1.2 试验设计及饲粮组成

将4 096只蛋鸡随机分为4组，即对照组和T400、T700、T1000组，每组1 024只.为了便于投料和捡蛋，4组蛋鸡随机分配到32个笼区，每组8个笼区，每个笼区包含4层，每层8笼，每笼4只蛋鸡.产蛋率和蛋重记录以笼为单位，即每组256个重复.预试期2周， 第1周(蛋鸡49周龄)为新笼适应期，第2周测定蛋鸡试验前的抗氧化功能和产蛋性能.试验期20周，试验期对照组蛋鸡继续饲喂基础饲粮；T400、T700和T1000组则饲喂不同的试验饲粮，即在基础饲粮中分别添加400、700和1 000 g·t-1花生壳提取物，添加方法为：花生壳提取物先与1 000 g基础饲粮混合均匀后，再与9 000 g基础饲粮混合均匀.

基础饲粮参照1994年美国全国科学研究委员会(NRC)[9]和NY/T 33—2004[10]的标准，并结合北京华都峪口京粉蛋鸡饲养管理手册(未在公开刊物上发表)配制.基础饲粮组成及营养水平见表1.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

1)预混料为每千克饲粮提供8 000 IU VA、4 200 IU VD3、15 IU VE、1. 0 mg VK3、0.004 mg VB12、0.95 mg硫胺素、2.50 mg核黄素、10.8 mg烟酸、8 mg吡哆醇、2 mg生物素、1.8 mg叶酸、50 mg Mn、50 mg Fe、5.6 mg Cu、50 mg Zn、 1.0 mg I、 0.15 mg Se.2)营养水平为计算值.

1.3 饲养管理

蛋鸡采用半开放式鸡舍4层2列立体笼养，通风方式采用自然通风结合纵向负压通风，光照采用自然光照加人工补光，每天光照时间保证16 h.采用粉料饲养，鸡自由饮水和采食，每天晚上21：00空槽，每天捡蛋2次(9：00和15：00)，统计蛋数和蛋重.每周消毒鸡舍1次，每天清粪1次.按常规方法进行防疫和免疫.饲养管理方法参考北京华都峪口京粉蛋鸡饲养管理手册，各组蛋鸡饲养管理条件保持完全相同.

1.4 指标的测定

1.4.1 样品的采集与制备 分别于试验前1周，试验期的第5、10、15和20周(即蛋鸡50、55、60、65和70周龄)，以笼为单位记录一周的周投料量、产蛋数和蛋重，并统计产蛋率、蛋重、产蛋量、采食量和料蛋比.每组每周的产蛋记录有256个重复.

分别于试验前1周，试验期的第5、10、15和20周结束后，于次日早晨空腹采血.每组随机选取体重相近的12只蛋鸡，进行空腹无菌翅静脉采血，每只鸡采血5 mL.血液于4 ℃倾斜静置30 min后，于4 ℃、3 000 r·min-1(离心半径12 cm)离心10 min得血清.将血清分装到1 mL离心管中，置20 ℃冰箱中保存备用，用于血清抗氧化指标的测定.

1.4.2 生产性能的测定 产蛋率/%=[每周每笼产蛋数/(4×7)×100]；蛋重/g=每周每笼蛋重(g)/每周每笼蛋数；周产蛋量/g=每周每笼蛋重(g)/4；周采食量/g=每周每笼采食量(g)/4；料蛋比=采食量(g)/产蛋量(g).

1.4.3 血清抗氧化指标的测定 丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性采用还原型谷胱甘肽—二硫代二硝基苯甲酸法测定[11].上述指标的测定均采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，按试剂盒说明书进行操作.

1.5 数据处理

采用SAS统计软件的线性模型GLM对每周的数据分别进行方差分析，模型只包含处理效应(花生壳提取物添加水平)，试验全期各周数据进行合并分析.对产蛋率和蛋重的全期数据合并分析，采用SAS统计软件的线性混合模型MIXED[12]，模型包含处理效应、周次效应、处理与周次互作效应、鸡笼随机效应.对血清抗氧化指标的全期数据合并分析，采用SAS统计软件的线性模型GLM，模型包含处理效应、周次效应、处理与周次互作效应.不同处理的结果采用Tukey法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示，P<0.05为差异显著.

2 结果与分析

2.1 花生壳提取物对蛋鸡生产性能的影响

2.1.1 对蛋鸡产蛋率的影响 由表2可见，试验前各组蛋鸡的产蛋率很相似，4个组的产蛋率相差不到1%.试验第5周，各组的产蛋率出现差异，但不显著;第10和15周，T700和T1000组的产蛋率显著高于对照组;第20周，3个试验组的产蛋率都显著高于对照组.试验全期数据合并分析的结果显示，T400组的产蛋率(73.8%)显著高于对照组(72.5%)，T700和T1000组的产蛋率(75.0%和75.4%)显著高于T400组，而T700组的产蛋率与T1000组没有差异.可见，4个组的产蛋率都随着蛋鸡周龄的增长而下降，但对照组的下降速度最快，其次是T400组，T700产蛋率的下降速度与T1000组相似.

表2 不同处理不同周次蛋鸡的产蛋率1)Table 2 Laying rate in different times and different treatments %

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

2.1.2 对蛋重的影响 由表3可见：与产蛋率不同，蛋重随着蛋鸡周龄的增长略微增加；同一周次，4个组的蛋重没有差异，蛋重最大差别不到0.5 g.

表3 不同处理不同周次的蛋重Table 3 Egg weight in different times and different treatments g

2.1.3 对蛋鸡产蛋量的影响 由于在饲粮中添加花生壳提取物影响蛋鸡产蛋率但不影响蛋重，不同处理产蛋量的差别与产蛋率一致.由表4可见，4个组的产蛋量都随着蛋鸡周龄的增长而下降，但对照组的下降速度最快，其次是T400组，T700组产蛋量的下降速度与T1000组没有明显差别.试验第20周，对照组周产蛋量为312.3 g，T400组为322.4 g，T700组为332.0 g， T1000组为334.8 g.

表4 不同处理不同周次的周产蛋量1)Table 4 Egg mass (per week per bird) in different times and different treatments g

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

2.1.4 对蛋鸡料蛋比的影响 由表5可见,料蛋比随着蛋鸡周龄的增长而增加，即饲粮利用率随着周龄的增长而下降.试验前，料蛋比约为2.31，试验第20周，料蛋比上升到2.42左右；在同一周次，4个组的料蛋比非常接近，说明在饲粮中添加花生壳提取物不影响料蛋比.

表5 不同处理不同周次的料蛋比1)Table 5 Feed conversion rate (FI/egg mass) in different times and different treatments

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

2.1.5 对蛋鸡采食量的影响 由表6可见，尽管料蛋比随着蛋鸡周龄的增长而增加，采食量却随着周龄的增长而减少， 这是由于产蛋量随着周龄的增长而减少的缘故.与产蛋量的情况相似，4个组的采食量随着蛋鸡周龄的增长而下降的速度不一样，对照组的下降速度最快，其他依次为T400、T700和T1000组.采食量从试验前到试验第20周，对照组周采食量降低35.9 g，T400组下降28.3 g，T700组下降26.5 g， T1000组下降14.0 g.

表6 不同处理不同周次蛋鸡的周采食量1)Table 6 Feed intake (per week per bird) in different times and different treatments g

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

2.2 花生壳提取物对蛋鸡血清抗氧化功能的影响

2.2.1 对MDA含量的影响 由表7可见，4个组蛋鸡的MDA含量在试验前很一致，MDA含量相差最大的为0.3 nmol·mL-1.但在试验的第5周及其后，T700和T1000组的MDA含量显著低于对照组和T400组，而T700组与T1000组没有差异;T400组低于对照组，但只在第15和20周差异显著.试验全期数据合并分析显示，T400组的MDA含量(11.5 nmol·mL-1)显著低于对照组(12.3 nmol·mL-1)，T700和T1000组的MDA含量(10.7和10.5 nmol·mL-1)显著低于T400组，而T700组的MDA含量与T1000组没有差异.可见，4个组的MDA含量都随着蛋鸡周龄的增长而增加，但各组增加的速度明显不一样，对照组最快，其次是T400组，T700和T1000组增加的速度最慢.

2.2.2 对SOD活性的影响 由表8可见，4个组蛋鸡的SOD活性在试验前都很相似(345.5～353.3 U·mL-1).但在试验第5周及其后，试验组的SOD活性显著高于对照组，T700和T1000组显著高于T400组，而T700组与T1000组没有差异.试验全期，对照组、T400组、T700组和T1000组的SOD活性分别为231.4、269.9、294.0和305.2 U·mL-1.可见，4个组的SOD活性都随着蛋鸡周龄的增长而减小，但试验组SOD活性减小的速度明显低于对照组，T700和T1000组SOD活性减小的速度低于T400组，而T700组与T1000组的差异很小.4个组SOD活性减小的速度差别最明显是在试验期的前5周.

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

表8 不同处理不同周次蛋鸡的SOD活性1)Table 8 Total SOD activity in different times and different treatments U·mL-1

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

2.2.3 对GSH-Px活性的影响 由表9可见，4个组蛋鸡的GSH-Px活性在试验前差别不大，为31.0～32.5 U·mL-1.但在试验第5周，T700和T1000组的GSH-Px活性显著高于对照组和T400组，T400组高于对照组但差异不显著，而T700组与T1000组的差异很小.试验第5周后，3个试验组的GSH-Px活性都显著高于对照组，T700和T1000组显著高于T400组，而T700组与T1000组的差异很小.试验全期，对照组、T400组、T700组和T1000组的GSH-Px活性分别为23.2、25.6、28.0和28.7 U·mL-1. 4个组的GSH-Px活性都随着蛋鸡周龄的增长而减小，但3个试验组GSH-Px活性减小的速度明显低于对照组，T700和T1000组GSH-Px活性减小的速度低于T400组，而T700组与T1000组的差异很小.4个组GSH-Px活性减小的速度差别最明显是在试验期的前5周，试验第5周以后，4个组GSH-Px活性减小的速度差异较小.

表9 不同处理不同周次蛋鸡的GSH-Px活性1)Table 9 GSH-Px activity in different times and different treatments U·mL-1

1)同列数据后附不同字母者表示差异显著(P<0.05)，附相同字母者表示差异不显著(P>0.05).

3 讨论

本试验结果表明，花生壳提取物有减缓蛋鸡产蛋后期产蛋率下降的趋势，但对蛋重的影响不大，减缓蛋鸡产蛋后期产蛋率下降的适宜添加量为700～1 000 g·t-1.花生壳提取物提高蛋鸡产蛋率可能是通过增强蛋鸡体内抗氧化酶系统的活性而改善卵巢功能.

3.1 蛋鸡周龄对机体抗氧化功能和产蛋性能的影响

卵巢的健康程度是决定蛋鸡产蛋周期的关键因素.蛋鸡后期卵巢机能的衰退可能与产蛋高峰后蛋鸡体内自由基大量堆积，卵巢、肝脏和血清氧化损伤的加重有关[13].姜礼文等[14]研究表明：随着周龄增大，蛋鸡卵巢机能衰退,机体氧化损伤加剧，表现为肝脏和卵巢中的SOD、GSH-Px活性均显著降低，MDA含量显著升高.本试验结果显示：对照组蛋鸡血清的MDA含量从50周龄的8.7 nmol·mL-1升高到70周龄的12.3 nmol·mL-1，SOD活性从50周龄的346.6 U·mL-1降低到70周龄的231.4 U·mL-1，GSH-Px活性从50周龄的33.3 U·mL-1降低到70周龄的23.3 U·mL-1；相应地，产蛋率从50周龄的79.9%降低到70周龄的68.0%，3个试验组也表现出相似的变化趋势，但速度不同， 同时，产蛋量和采食量也出现与产蛋率相似的变化.

3.2 花生壳提取物对蛋鸡机体抗氧化功能和产蛋性能的影响

蛋鸡经过一段时间的高产，体内蓄积大量的自由基，自由基诱导的氧化反应损伤会使蛋鸡生殖功能下降.丁梦影等[15]研究表明：用花生壳提取液灌胃干预小鼠8周后，小鼠血清、肝组织和脑组织中的SOD活性升高，MDA含量明显降低.大量的研究亦表明[16-17],木犀草素是花生壳提取物中主要的抗氧化物质.Xin et al[18]研究表明，木犀草素能改善小鼠肾氧化状态，降低细胞凋亡的因素，进而影响凋亡相关蛋白的表达.木犀草素可提高血清抗氧化功能，降低高脂血症大鼠脂质过氧化损伤，还可以增强生物体内抗氧化酶系统的活性而达到抗氧化作用[19]. Rooban et al[20]用亚硒盐酸体外诱导大鼠晶状体病变，观察到亚硒盐酸显著降低了大鼠体内SOD和过氧化氢酶的活性， 但木犀草素给药后，恢复了SOD和过氧化氢酶的活性.Ashokkumar et al[21]研究也表明，患结肠癌的小鼠结肠组织中的SOD、GSH-Px、谷胱甘肽还原酶和过氧化氢酶活性降低，而使用木犀草素后，其活性显著上升.

本试验结果显示，与对照组相比，在蛋鸡后期的饲粮中添加富含多酚类物质木樨草素的花生壳提取物能显著提高产蛋鸡后期血清中的SOD、GSH-Px活性，显著降低产蛋鸡后期的MDA含量，改善蛋鸡后期的产蛋率.本试验结果还显示：蛋鸡抗氧化功能和产蛋率随着花生壳提取物添加量的增加而提高；但当添加量达到700 g·t-1后，增加花生壳提取物对进一步提高蛋鸡抗氧化功能和产蛋率的作用有限.花生壳提取物的适宜添加量为700～1 000 g·t-1.

4 结论

产蛋后期蛋鸡的抗氧化功能下降，产蛋性能下降.在产蛋后期的饲粮中添加花生壳提取物可增强蛋鸡抗氧化功能，减缓产蛋率的下降，提高蛋鸡的生产性能，花生壳提取物的适宜添加量为700～1 000 g·t-1.