手足口病肠道病毒核酸与血清学检测的临床诊断价值分析

吴双双 陈东 周俊 赵仕勇 吴亦栋⋆

手足口病是由肠道病毒引起的传染疾病，好发于儿童，尤其＜3岁年龄发病率最高。临床主要表现为发热、口腔和四肢末端的斑丘疹、疱疹，重者可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎和循环障碍等。手足口病由多种肠道病毒引起，经粪口途径和呼吸道飞沫传播。手足口病感染的主要病原体为肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）［1］。作者收集本院手足口病患者的标本，目的在于对手足口病进行病原学检测并对主要病原体进行分型，以便更好地了解本病的病原学特征，有助于本病的预防，诊断和治疗。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2016年6月至2017年5月本院手足口病患者1127例，其中男688例，女439例。手足口病诊断标准参照我国卫生部颁发的《手足口病诊断指南》［2］。

1.2 方法 （1）试剂与仪器：手足口肠道病毒核酸检测试剂来源于江苏硕世生物科技有限公司；手足口肠道病毒抗体检测试剂来源于北京万泰生物药业股份有限公司。所使用的仪器为ABI-7500 FastDX全自动荧光实时定量PCR仪。（2）检验方法：①手足口病毒核酸检测：采用实时荧光定量PCR法检测核酸中的肠道病毒通用型，EV71和CA16。②手足口病毒抗体检测：采用捕获法酶联免疫吸附实验原理对EV71和CA16 IgM抗体进行检测。

1.3 统计学分析 采用SPSS21.0统计软件。计数资料用χ2检验，病毒核酸检测结果与血清学检测结果进行Kappa一致性检测。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 核酸和抗体检测结果 男女性患者肠道病毒核酸检测构成比差异无统计学意义（χ2=0.408，P=0.816）。男女性患者肠道病毒抗体检测的构成比无显著性差别（χ2=0.155，P=0.694）。见表 1、2。

表1 患者肠道病毒核酸检测结果［n（%）］

表2 患者肠道病毒抗体检测结果［n（%）］

2.2 手足口肠道病毒核酸与手足口肠道病毒血清学检测结果一致性的分析 对手足口肠道病毒EV71与手足口肠道病毒EV71血清学检测结果进行Kappa一致性检验，发现两者有较好的一致性，Kappa=0.704，见表3。对手足口肠道病毒CA16与手足口肠道病毒CA16血清学检测结果进行Kappa一致性检验，发现两者一致性较差，Kappa=0.241，见表4。

表3 EV71肠道病毒核酸与肠道病毒血清学检测结果比较（n）

表4 CA16肠道病毒核酸与肠道病毒血清学检测结果比较（n）

3 讨论

引起手足口病的病毒有20多种，其中以EV71和CA16为主，但肠道病毒型别比例在不断变化，宁波检测结果EV71为63.7%，CA16为24.0%，其他肠道病毒为12.3%。上海检测结果EV71为30.6%，CA16为8.8%，CA6为31.9%。重庆检测结果EV71为4.7%，CA16为1.5%，CA6为67.2%，其他肠道病毒为26.6%［3］。本资料1127例手足口病肠道病毒阳性结果核酸检测显示EV71为25.8%，CA16为8.4%，其他肠道病毒为57.5%；抗体检测显示EV71为32.7%，CA16为7.1%。所以需要进行长期全面的检测，以达到对疾病的预防和控制。

本资料EV71核酸与抗体检测结果进行比较，发现两者一致性较好，且血清学检测的敏感性高于EV71核酸的检测，将两者联合检测能提高EV71的检出率，而CA16核酸与抗体检测结果比较发现两者的一致性较差，可能与通常EV71在发病1d便可检测到抗体，3d后检测率可＞90%；而CA16在发病4d后可检测到，并在发病7d后检测率可达100%［4］。本资料还发现在EV71抗体和核酸检测双阳性的222份标本中，CA16交叉反应阳性率为7.2%。EV71-IgM抗体交叉反应阳性率与文献报道数值接近［5］。样本中检测出现EV71－IgM和CA16－IgM双抗体阳性结果，这是由于EV71与CA16基因水平同源性为77%，而氨基酸同源性为86%［6］。机体产生一种能识别这两种病毒共同肽段的抗体，从而产生抗体，部分EV71与CA16存在的交叉反应可以通过测量两者在450nm处的吸光度的比值来判断，另一部分通过与核酸检测相结合可以成功判定是EV71还是CA16感染。 张欣等研究显示［7］低年龄组感染其他EV的风险较大，本资料中患者以＜5岁为主，尤其以＜3岁患者占79.5%，故应加强对婴幼儿的监管。

手足口病是严重影响儿童健康及生命的传染病，较多报道，目前我国已有EV71疫苗，可保护90%由EV71引起的手足口病和80%由EV71引起的其他疾病如疱疹性咽峡炎或相关神经症状［8］，但仍有较多问题亟待解决。EV71在各地流行的病毒株不同，抗原性和免疫原性存在一定差异，且不能排除存在流行毒株变异的可能性。因此联合检测以提高检测率，并对非EV71、CA16的其他肠道病毒进行全面检测，对临床诊断具有重大意义，最终达到预防感染和控制疾病流行的目的。