慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清TLR4、TGF-β1和IL-17水平及其临床意义*

赵秀娟，金大鹏，张小云，刘泽林，孙向华

全国乙型肝炎流行病学调查表明，2006年国内有慢性HBV感染者约9300万人，其中CHB患者约2000万人[1-4]。在慢性乙型肝炎发病过程中，长期持续性的炎症刺激会导致肝脏实质反复炎症和坏死，从而使细胞外基质（ECM）在肝内过度沉积而形成纤维化，在此基础上肝脏再生结节形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。本研究检测了CHB和肝硬化患者血清IL-17、Toll样受体4（TLR4）和转化生长因子-β1（TGF-β1）水平变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2015年6月～2017年4月我院收治的CHB患者112例，男性89例，女性23例，平均年龄为（26.41±8.15）岁，其中慢性乙型肝炎轻度52例，中度49例，重度11例；乙型肝炎肝硬化52例【男性31例，女性21例；平均年龄为（37.51±12.31）岁；肝功能Child-Pugh A级17例，B级19例，C级16例】。诊断符合中华医学会修订的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]，血清HBsAg阳性超过6个月，谷丙转氨酶(ALT)超过正常值上限2倍以上，肝硬化患者经腹部超声/CT检查证实，经胃镜检查无食管-胃底静脉曲张或破裂出血等严重并发症。排除标准：（1）妊娠或哺乳期妇女；（2）精神障碍者；（3）其他类型病毒性肝炎、自身免疫性疾病、酒精性肝病等其他因素导致的肝损害；（4）近4周内有服用过抗病毒药、抗生素及其他损肝药物；（5）存在糖尿病、高血压及心肺等重要器官严重器质性病变。另选择健康人33例，男性17例，女性16例；平均年龄为（25.71±8.64）岁。无心脏、肺、肝等重要器官疾病。患者及其家属签署知情同意书，本研究经我院医学伦理委员会审核通过。

1.2 血清检测 采用ELISA法检测IL-17、TLR4、TGF-β1（试剂盒来自于宁波美康生物科技股份有限公司）；采用荧光定量PCR法检测HBV DNA（试剂盒来自上海之江生物科技股份有限公司）；使用7600型全自动生化分析仪检测肝功能指标（日立高新技术公司）。

1.3 肝活检 常规进行。

2 结果

2.1 各组血清 IL-17、TLR4和TGF-β1水平的比较 慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平明显高于健康人，差异有统计学意义（P＜0.05）；慢性乙型肝炎患者血清TLR4和TGF-β1水平明显低于肝硬化组，差异有统计学意义（P＜0.05，表 1）。

表1 各组血清IL-17、TLR4和TGF-β1水平（±s）比较

表1 各组血清IL-17、TLR4和TGF-β1水平（±s）比较

与健康组比，①P＜0.05，与肝硬化组比，②P＜0.05

例数 IL-17（pg/ml） TLR4（pg/ml） TGF-β1（ng/ml）乙型肝炎 112 264.42±32.53① 5.81±0.83①② 3.67±0.42①②肝硬化 52 271.54±33.71① 37.41±6.05① 7.82±1.07①健康人 33 64.18±5.52 1.07±0.13 1.61±0.07

2.2 不同肝功能分级肝硬化患者血清IL-17、TLR4和TGF-β1水平比较 Child-Pugh B级和C级患者血清 IL-17、TLR4和 TGF-β1水平明显高于Child-Pugh A级患者（P＜0.05）；Child-Pugh C 级患者血清 IL-17、TLR4和 TGF-β1水平明显高于Child-Pugh B 级患者（P＜0.05，表 2）。

2.3 不同肝组织纤维化分期患者血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平比较 各组肝纤维化分期患者血清IL-17、TLR4、TGF-β1 水平差异均有统计学意义（P＜0.05），且随着肝组织纤维化分期的严重，血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平逐步升高（表3）。

表2 不同肝功能分级肝硬化患者血清IL-17、TLR4和TGF-β1水平（±s）比较

表2 不同肝功能分级肝硬化患者血清IL-17、TLR4和TGF-β1水平（±s）比较

与Child-Pugh B级比，①P＜0.05；与Child-Pugh C级比，②P＜0.05

Child-Pugh 分级 例数 IL-17（pg/ml） TLR4（pg/ml） TGF-β1（ng/ml）A级 17 204.53±26.57①② 4.72±0.71①② 3.18±0.34①②B级 19 231.38±28.67① 18.61±2.87① 5.76±0.52①C级 16 301.72±32.72① 39.47±6.82① 9.42±1.27①

表3 不同肝组织纤维化分期患者血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平（±s）比较

表3 不同肝组织纤维化分期患者血清IL-17、TLR4、TGF-β1水平（±s）比较

与S0期比，①P＜0.05。

分期 例数 IL-17（pg/ml） TLR4（pg/ml） TGF-β1（ng/ml）S0 8 161.28±17.41 4.67±0.96 0.86±0.07 S1 42 193.42±23.72① 8.57±1.34① 2.07±0.29①S2 43 223.41±29.41① 15.48±2.69① 3.58±0.57①S3 19 258.71±32.41① 23.82±3.16① 5.83±0.77①S4 52 283.62±38.40① 36.54±5.17① 7.61±1.06①

3 讨论

肝脏作为人体最大的消化器官，可以分泌胆汁、贮存肝糖原并参与激素、药物和毒素的代谢及免疫调节[6-9]。机体在感染HBV后，大部分人能清除病毒而不被感染，而其中会有一部分患者会进一步发展为急慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌等不同的临床转归，严重威胁着人类的生命健康[10-14]。有研究报道称，肝纤维化不是一个单独存在的疾病，是各种急慢性因素刺激引起的组织愈合反应，其主要特点是肝脏实质的炎症、损伤及修复[15，16]。慢性肝病由纤维化发展到肝硬化是一个连续的过程，到目前为止，对于其中具体的发病机制仍未完全明确。因此，研究能够针对病因治疗的有效方法，是纤维化在早期得到逆转，对肝病治疗有着重要意义的方法[17]。

长期以来，肝脏细胞外基质的合成和降解之间的不平衡一直被认为是肝纤维化的重要原因之一，CHB以肝炎活动为主，而肝硬化同时存在炎症活动及纤维化[18]。TGF-β1是调节控制肝纤维化发生发展的核心物质，通过研究证实，TGF-β1是肝纤维化启动的主要因子之一，在CHB患者，病毒虽然不会对肝细胞造成直接损伤，而炎症组织中浸润大量的Kupffer细胞，并激活和合成TGF-β1，而TGF-β1进一步激活肝星状细胞（HSC）、血小板及单核细胞的旁分泌，并使TGF-β1持续增高[19]。TGF-β1可促进基质基因的表达，可上调HSC对I、Ⅲ、Ⅳ型胶原及 HA、层黏连蛋白(laminin，LN)的表达。本次研究结果显示：血清TGF-β1在肝脏纤维化的各个阶段中，差异均有显著性意义，其在S1、S2期既已开始升高，与S0期比较有显著意义，且随着病理肝纤维化分期和肝组织纤维含量的增加，血清TGF-β1水平也逐渐增高，由此，从病理学角度证明血清TGF-β1水平与肝组织纤维化发展的阶段性及肝纤维化程度一致。研究发现PCⅢ、HA水平随着肝纤维化病理分期的增加而增高[20]，说明TGF-β1在判断肝纤维化过程有着重要的临床意义。

近些年来，有大量相关研究发现，天然免疫在病毒性肝炎的发生发展过程中发挥着重要作用，其与获得性免疫相互作用，对病毒感染的临床结局及预后可能存在着决定作用。到目前为止，TLRs家族成员已经被发现有10余种，其中TLR1-10已被证实在人类机体表达中发挥功能作用[21]。有研究表明，TLR3-5存在特异性配体，相互结合后会导致小鼠肝脏中的HBV DNA无法复制[22]。也有研究证实，TLRs可以在人体的各个组织中均有表达，但在肝脏中是表达最低的，同时TLRs家族成员中的TLR4对机体清除HBV有促进作用[22]。目前最新的研究发现，肿瘤细胞也可表达TLR4，同时TLR4也可介导肿瘤细胞避免CTL和NK细胞的免疫杀伤作用，但其中具体机制尚未清晰[23]。本次研究结果显示：TLR4在健康组中几乎不表达，在CHB组及肝硬化组均有明显表达，但在CHB组中表达较微弱，在肝硬化组中表达水平最高。与上述文献报道结果相似，说明TLR4参与了CHB及与其相关的肝硬化的发生、发展。

IL-17是近年来发现的一种促炎症细胞因子，主要由活化的记忆性CD4+T淋巴细胞分泌，通过与其受体特异性结合，在机体中发挥着促进炎症发展、免疫应答、造血等多种功能。IL-17家族包括6个成员，其中IL-17A、IL-17F与Th1类细胞因子介导的炎性疾病有关，IL-17E与Th2类细胞因子介导的炎性疾病有关，目前对IL-17B-D的具体功能尚不清楚[24-29]。有研究表明，IL-17家族成员在CHB及肝硬化中均明显升高，参与了慢性乙型肝炎及肝硬化的发病[30-35]。本次研究结果显示：IL-17在健康组中几乎不表达，在CHB组及肝硬化组均有明显表达，在肝硬化组中表达水平最高。IL-17等细胞因子参与了CHB及其相关的肝硬化的发病过程，探讨它们水平的变化在疾病演变过程中的意义是非常必要的。