肝细胞癌患者血浆SPINK1水平及其与患者预后的关系分析

2018-07-17 03:51王伟王惠芳翟景明封冰
实用肝脏病杂志 2018年4期
关键词:正常人高水平标志物

王伟,王惠芳,翟景明,封冰

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)为原发性肝癌分类中最常见的组织类型,约占70%~85%。因HCC起病隐匿,早期症状不明显,导致大多数患者在就诊时已处于疾病晚期[1,2]。血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)为原发性肝癌患者典型的血清肿瘤标志物,但其用于HCC诊断仍有一定的局限性[3]。丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型(serine peptidase inhibitor Kazal type 1,SPINK1)又称分泌性胰蛋白酶抑制剂(PSTI)或肿瘤相关胰蛋白酶抑制剂(TATI),位于第5号染色体上,具有类似表皮生长因子作用,可通过表皮生长因子受体通路而使肿瘤细胞发生侵袭。近年来,有研究显示SPINK1在结直肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌中均有表达[4-6]。有研究显示SPINK1水平高低可反映肝硬化进展为肝癌的风险大小[7]。本文检测了HCC患者血清SPINK1水平,并分析了其与患者预后的关系,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年5月~2015年9月我院收治的HCC患者80例(男48例,女32例;年龄43~66岁,平均年龄54.42±5.61岁;肝功能Child-Pugh A级58例,B级22例);乙型肝炎肝硬化患者40例(男24例,女16例;年龄45~65岁,平均年龄51.44±5.34岁;肝功能Child-Pugh A级29例,B级11例)。分别符合《原发性肝癌规范化诊断指南(2015年版)》[8]和慢性乙型肝炎防治指南的诊断标准;另选正常人30例(18例,女12例;年龄40~55岁,平均年龄50.40±5.65岁)。本研究获得本院医学伦理委员会审核同意,纳入对象签署知情同意书。

1.2 治疗方法 所有HCC患者均接受肝癌根治术,术前未进行TACE或放射治疗。

1.3 血浆SPINK1和AFP水平检测 采用ELISA法检测血浆SPINK1水平(台湾ABNOVA公司),血浆SPINK水平参考范围为0~2 μg/L;采用ELISA法检测血浆AFP(美国NOVATEINBIO公司),参考范围为 0~20 μg/L。

1.4 预后判断 术后随访2年,随访内容包括一般情况、术后生存时间、肝脏功能、AFP、B超及胸部X线片,以ROC曲线下SPINK1的最佳诊断截断点将患者分为血清SPINK1高水平组和SPINK1低水平组,分析SPINK1与预后的关系。预后指标包括总生存时间(OS)、无瘤生存时间(DFS)和复发率。OS指自随机化分组开始,至因任何原因引起死亡的时间;DFS指根治术后体内无肿瘤病灶,直至肿瘤复发的时间;复发:依据实验室化验和影像学检查结果,综合判定。

1.5 统计学方法 应用SPSS 19.0软件处理数据,复发率等计数资料以%表示,采用x2检验,血浆SPINK1和AFP水平等计量资料以(±s)表示,采用t检验;以1-特异度为横坐标,以灵敏度为纵坐标绘制ROC曲线,评价血浆SPINK1和AFP水平诊断HCC的效能,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组人群血浆SPINK1和AFP水平比较 HCC患者SPINK1水平显著高于肝硬化患者或正常人(t=7.62、t=19.63,P<0.05);肝硬化患者血浆 SPINK1水平显著高于正常人(t=17.57,P<0.05);HCC患者血浆AFP水平显著高于肝硬化患者或正常人(t=38.40、t=34.108,P<0.05),肝硬化患者AFP水平与正常人比较差异无统计学意义(P>0.05,表1)。

表1 三组人群血浆SPINK1和AFP水平(±s)比较

表1 三组人群血浆SPINK1和AFP水平(±s)比较

与正常人比,①P<0.05;与肝硬化比,②P<0.05

例数 SPINK1(μg/L) AFP(μg/L)HCC 80 2.4±0.3①② 125.7±14.5①②肝硬化 40 2.0±0.2① 35.4±4.2正常人 30 1.3±0.1 3.6±0.5

2.2 血浆SPINK1和AFP诊断HCC的效能情况经ROC曲线分析,发现术前血浆SPINK1诊断HCC的曲线下面积为0.768,95%置信区间为0.702~0.837,最佳截断点为 1.70 μg/L,即当 SPINK1=1.70 μg/L时,其诊断HCC的灵敏度和特异度分别为77.2%和67.6%;ROC曲线分析显示术前血浆AFP诊断HCC的曲线下面积为0.735,95%置信区间为0.649~0.824,最佳截断点为 124.8 μg/L,其诊断HCC的灵敏度为63.4%,特异度为62.5%(图1)。

图1 血浆SPINK1和AFP诊断HCC的ROC曲线分析

2.3 术前不同血清SPINK1水平的HCC患者生存情况比较 以上述SPINK1最佳诊断截断点1.70μg/L为界,将患者分为SPINK1高水平组(术前SPINK1>1.7 0μg/L)和SPINK1低水平组(术前SPINK1<1.70μg/L)。与术前 SPINK1<1.70μg/L患者比较,术前SPINK1>1.7 0μg/L患者OS和DFS均明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05,表2)。

表2 术前不同血清SPINK1水平的HCC患者生存情况(±s)比较

表2 术前不同血清SPINK1水平的HCC患者生存情况(±s)比较

与术前 SPINK1<1.7 μg/L 比,①P<0.05

血清SPINK1 例数 OS(m) DFS(m)>1.7 μg/L 4 12.2±1.3① 11.2±1.2①<1.7μg/L 38 20.5±2.1 15.7±1.9

2.4 两组复发率比较 术前SPINK1>1.7 0 μg/L患者术后复发率为38.1%(16/42),显著高于术前SPINK1<1.70 μg/L 患者的 18.4%(7/38,x2=5.18,P<0.05)。

3 讨论

我国HCC发病率较高,全球每年新发HCC患者中50%以上来自中国,HCC多由肝硬化发展所致,肝硬化可经再生结节、低度不典型增生结节、高度不典型增生结节、增生结节癌变等“多步骤癌变”途径转变为HCC。因此,早期对肝硬化患者进行定期检查,寻找有效的指标准确诊断HCC并采取合理治疗措施有重要现实意义[9]。现阶段血清肿瘤标志物的检测因具有特异性高、敏感性高、痛苦少、费用相对较低等优点而成为研究的热点,其中经典生物标志物AFP诊断HCC的灵敏度、特异度不高。肿瘤的发生是一个渐进的过程,其中抑癌基因失活为导致肿瘤细胞增殖、浸润及远处转移的基础,丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpins)为最新发现的肿瘤抑制基因,serpins与丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族具有高度同源性[10,11]。SPINK1 作为 serpins家族一员,最早从牛的胰腺中分离出来,因此被称为PSTI,后在卵巢癌患者尿液中也被发现,因此又称为TATI。SPINK1由位于人体第5号染色体的四个外显子组成的基因编码,SPINK1由56个氨基酸组成,经3个二硫键连接,是激活胰蛋白酶原的第一道防线,主要功能为抑制胰蛋白酶活性,同时这种作用是可逆的。研究显示SPINK1常以高水平出现在胰腺及胰液中,主要作用为可逆性阻止丝氨酸蛋白酶依赖的细胞凋亡。当持续保温时,胰蛋白酶会裂解SPINK1的肽键而导致SPINK1蛋白复合物迅速解离,如此循环,有利于防御胰蛋白酶过早激活[12-14]。Jobst J et al[15]采用逆转录PCR(RT-PCR)检测确定肝细胞癌与非肝细胞癌组织特异性基因表达谱及表达水平,结果显示SPINK1/TATI在肝癌组织呈最稳定的表达,阳性率为90%,因此认为SPINK1/TATI可作为丙型肝炎病毒引起肝癌的肿瘤标志物,有助于早期地诊断肝癌。Marshall A et al[16]的研究结果显示遗传性血色病并发肝癌组织SPINK1 mRNA呈高水平,在肝硬化结节、混合病因肝癌中其阳性率分别为0%或79%,因此认为SPINK1作为分泌型胰蛋白酶抑制剂,是诊断肝癌潜在的标志物,但国内关于SPINK1在HCC患者的临床意义还少有报道。

有人[17]采用RT-PCR、免疫印迹法和ELISA法检测了乙型肝炎病毒(HBV)感染对SPINK1的影响及其调节机制,他们发现SPINK1在慢性乙型肝炎患者血清中水平显著升高,肝硬化和肝细胞癌患者血浆SPINK1水平显著高于慢性乙型肝炎患者。本研究结果显示HCC患者、肝炎肝硬化患者、正常人血浆SPINK1水平依次减少,且三组血浆SPINK1水平两两比较差异均有统计学意义,与上述报道结果基本一致,因而在HCC患者,血浆SPINK1水平升高,同时HCC患者血浆SPINK1水平显著高于肝炎肝硬化患者,体现了SPINK1作为HCC标志物的可能性。国外学者Hass HG et al[18]的研究结果发现在肝癌组织AFP阳性率仅为30%,而64%~82%肝癌组织 OPN、SPINK1、GPC3、HSP90 和 knpa2 阳性,因此认为 OPN、SPINK1、GPC3、knpa2在肝癌组织有较高水平的表达,这些基因有助于未来发现肝癌生物标记物并制定新的诊断肝癌策略。本研究结果显示HCC患者血浆AFP较肝硬化患者和正常人高,肝炎肝硬化患者血清AFP水平高于正常人。ROC曲线分析结果显示血浆SPINK1水平诊断HCC的灵敏度为77.2%,特异度为67.6%,而血浆AFP分别为63.4%和62.5%,与有关研究[19-22]结果相近,表明血浆AFP在肝硬化阶段也有升高,血浆SPINK1水平在肝硬化阶段也已开始上升,当发展至HCC时,其水平更高。因此,SPINK1诊断HCC的效能可能较AFP好,具有更高的灵敏度和特异度,有成为HCC标志物的潜能。在SPINK1与预后关系方面,另有研究结果[23,24]显示,在随访58.6 m期间,SPINK1高水平组中位生存时间为12.3 m,较SPINK1低水平组的29.2 m缩短,SPINK1高水平组术后无瘤生存时间也明显短于SPINK1低水平组,而复发率高于SPINK1低水平组,进一步分析结果显示SPINK1高水平是肝癌术后总体生存和无瘤生存的独立危险因素,而本研究结果显示SPINK1高水平组总生存时间和无瘤生存时间均较SPINK1低水平组短,前者术后2年内复发率高于后者,与上述研究结果相近,因此HCC患者血浆SPINK1水平高低与其预后关系密切,术前检测血浆SPINK1水平对于预测预后有重要的参考价值。

综上所述,HCC患者血浆SPINK1水平显著高于肝硬化患者,与AFP相比,有类似的诊断HCC效能。但如何提高其诊断的灵敏性、特异性和正确率,将是未来研究的热点。

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