高效液相色谱法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷含量

王 丽

(天津市南开区中医医院，天津 300102)

玉屏风颗粒由黄芪、防风、白术3味中药组成，黄芪为处方中的君药，测定黄芪甲苷的含量将有助于有效控制玉屏风颗粒的质量[1]。本研究拟建立高效液相色谱-蒸发光散射法检测玉屏风颗粒中主要成分黄芪甲苷的含量，以便控制玉屏风颗粒的质量。

1 仪器与试药

1.1仪器 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)，M-400型蒸发光散射检测器(美国SOFTA 公司)，分析天平(型号：AUW-120D，日本岛津公司)。

1.2试药 黄芪甲苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号1110781-201506)；玉屏风颗粒(广东环球制药有限公司，批号为201611005，201612011，201612015)。乙腈(色谱纯，西陇化工股份有限公司)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：迪马C18(ODS2，150 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(30∶70)为流动相，流速为1 ml/min，以蒸发光散射检测器作为检测器进行检测，漂移管的温度110 ℃，载气的流量2.0 L/min，进样量为10 μl。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4 000[2]。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.158 mg的溶液，作为对照品储备液。

2.2.2供试品溶液的制备 取玉屏风颗粒适量，研细，取约2.0 g，精密称定，置于100 ml锥形瓶中，加甲醇50 ml，超声提取60 min，取出，放冷，摇匀，滤过至50 ml量瓶中，用甲醇定容，精密量取续滤液25 ml，置于蒸发皿中，蒸干，残渣加15 ml正丁醇(水饱和)溶解，转移至分液漏斗中，加15 ml氨试液洗涤3次，分取正丁醇层，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至10 ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备 按处方量，分别称取除黄芪外的药材，制成玉屏风颗粒阴性样品，再按照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3系统适应性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl，依“2.1”项下色谱条件测定。此色谱条件下，黄芪甲苷与其他成分无干扰，保留时间为13.5 min，结果见图1。

1.黄芪甲苷

2.4标准曲线 分别精密量取对照品储备液5、7.5、10、15和20 ml置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成浓度分别为31.6、47.4、63.2、94.8和126.4 μg/ml的对照品溶液[3]。分别精密吸取上述5种浓度的黄芪甲苷对照品溶液与储备液各10 μl，依“2.1”项下色谱条件进行测定。以黄芪甲苷浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，可得回归方程为：Y=16 152X-4 729(r=0.999 8)。结果显示黄芪甲苷在31.6～158 μg/ml的浓度范围内，线性关系良好。

2.5精密度试验 取玉屏风颗粒(批号201611005)，依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样6次，测得黄芪甲苷峰面积的RSD为1.77%，结果显示精密度较好。

2.6稳定性试验 取玉屏风颗粒(批号201611005)的供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12和24 h时，精密吸取10 μl，依“2.1”项下色谱条件进行测定，黄芪甲苷峰面积的RSD为1.92%，结果显示玉屏风颗粒供试品溶液在24 h内较稳定。

2.7重复性试验 取玉屏风颗粒(批号201611005)，依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，分别精密吸取10 μl，依“2.1”项下色谱条件进行测定，黄芪甲苷峰面积的RSD为1.56%，结果显示该方法重复性较好。

2.8加样回收率试验 取同一批玉屏风颗粒(批号201611005)样品共6份，每份1.0 g，精密称定，分别加入1.622 mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液各0.5 ml，依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液10 μl，将其注入高效液相色谱仪，依“2.1”项下的色谱条件进行测定，计算样品的加样回收率，结果平均加样回收率为99.58%，RSD为0.75%。见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收率试验结果(n=6)

2.9样品中黄芪甲苷的含量测定 取供试品3批，依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样，计算样品中黄芪甲苷的平均含量，见表2。

表2 3批样品含量测定结果

3 讨论

3.1检测波长的确定 黄芪甲苷的结构比较特殊，位于紫外吸收的末端，采用紫外检测器时，干扰会比较大，影响黄芪甲苷的含量测定，蒸发光散射检测器能够克服紫外检测器的不足，且不会出现基线漂移[4]，故而本研究采用了蒸发光散射检测器对玉屏风颗粒中黄芪甲苷的含量进行测定。

3.2流动相的确定 本试验选用多数文献报道中的乙腈-水作为流动相，但对流动相的比例进行了适当的调整，即乙腈-水为(30∶70)，结果显示，该比例的流动相可有效分离黄芪甲苷，无其他成分干扰，且出峰时间比较适中。

本研究所建立的高效液相-蒸发光散射检测法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷含量，具有操作简便、重现性好、灵敏度高等特点，可用于玉屏风颗粒中黄芪甲苷的含量测定。

1 朱燕,黄义纯,蓝献泉,等.HPLC-ELSD法测定复方天麻蜜环糖肽片中黄芪甲苷含量[J].解放军药学学报,2017,33(3):252-254

2 王振涛,常红波,黄海英,等.抗纤益心浓缩丸中黄芪甲苷、丹参酮ⅡA的含量测定[J].中医学报,2016,31(11):1750-1753

3 林帅军,崔燕兵,邢志霞,等.HPLC-ELSD法测定乙肝益气解郁颗粒中黄芪甲苷的含量[J].中医药导报,2017,23(5):47-49

4 周颖仪,刘潇潇.反相高效液相色谱法测定消渴平片中黄芪甲苷的含量[J].中国医院用药评价与分析,2016,16(7):886-889