抗猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备及临床应用研究

吕梁市临县城庄畜牧兽医站 033200

2010年以来，仔猪流行性腹泻在全国范围内爆发，给生猪养殖户造成巨大的经济损失。调查研究显示，猪流行性腹泻（PED）具有发病急、传播快、发病率与死亡率高、波及面广等特点[1]。对其的治疗也处于摸索阶段。因此，制定一种切实可行的预防治疗措施迫在眉睫。本试验主要制备一种高免卵黄抗体，并研究其在预防和治疗上的效果。现报告如下。

1 材料、仪器及试验对象

（1）试验材料。发病仔猪的肠道病料，琼脂粉，PED阳性血清。

（2）试验仪器。高速匀浆机，江苏天翎仪器有限公司；干烤箱，上海和呈仪器制造有限公司；高压锅，长沙明杰仪器有限公司；温箱，深圳市广迈仪器设备有限公司；玻璃瓶、离心机、梅花打孔器、移液器等。

（3）试验试剂。甲醛等。

（4）试验对象。昆明鼠，120日龄待开产蛋鸡，仔猪。

2 试验方法

（1）高免卵黄抗体的制备。抗猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体按照如下方法进行制备[2-3]。制备免疫抗原。选择2～3日龄感染发病的产房仔猪，无菌采集其肠道并进行处理。处理后留取一部分未灭活组织液，冷冻保存，供攻毒试验使用。制备卵黄抗体。给鸡胸肌注射制备的PEDV组织灭火苗，并按规定进行首免、二免、三免及四免，首免后每周收集鸡蛋，分离卵黄。制备治疗用卵黄抗体。取抗体效价＞64的高免蛋，无菌去除蛋清、分离蛋黄，并加入生理盐水，搅拌分装。

（2）仔猪的攻毒试验。每头猪口服0.2mL免疫抗原，观察攻毒后的腹泻情况。

（3）高免卵黄抗体临床预防试验。对吃初乳的40头仔猪进行攻毒试验，将其分成4组，分别为对照组（不采取任何措施），抗生素、干扰素治疗组，卵黄抗体治疗组及卵黄抗体提前预防后攻毒组。每组10头，观察卵黄抗体实验室攻毒保护试验结果。

（4）高免卵黄抗体临床治疗试验。对不同日龄的50头猪进行攻毒试验，奖其分成5组，分别为1日龄组、10日龄组、20日龄组、30日龄组及40日龄组，并对其进行卵黄抗体攻毒治疗试验，观察卵黄抗体实验室攻毒治疗试验结果。

3 试验结果

（1）卵黄抗体人工感染的预防和治疗试验。仔猪攻毒保护试验结果见表1。

表1 仔猪攻毒保护试验结果

由表1可以看出，4组仔猪进行攻毒保护试验后，除卵黄抗体预防组有9头未发病外，其余所有仔猪全部发病。其中，对照组10头仔猪全部发病并死亡，保治愈率为0%；抗生素、干扰素治疗组发病10头，死亡8头，保治愈率为20%；卵黄抗体治疗组仔猪发病10头，死亡7头，保治愈率为30%；卵黄抗体预防组仔猪发病1头，死亡1头，保治愈率为90%。

（2）不同日龄攻毒组卵黄抗体治疗试验。不同日龄攻毒组卵黄抗体治疗试验结果见表2。

表2 不同日龄攻毒组卵黄抗体治疗试验

由表2可以看出，5组猪进行攻毒治疗试验后，所有猪全部发病。其中，1日龄、10日龄、20日龄、30日龄、40日龄猪死亡数分别为8头、5头、3头、1头和0头，治愈率分别为20%、50%、70%、90%和100%。

3 讨论

该病发病急，流行范围广，发病率和死亡率高。各个季节均有发生，但秋冬季多发。主要通过粪便和乳汁传播。各种日龄的猪均有发生，其中哺乳仔猪发病最为严重。胃-流-轮三联弱毒疫苗均未起到保护作用，抗生素等无法控制该病。因此，对该病的预防及治疗措施需进一步研究与讨论。

本试验利用本次发病仔猪的肠道，制备抗PEDV的特异性高免卵黄抗体。结果显示，卵黄抗体对初生仔猪的预防保护率较高，达90%。但是，卵黄抗体对不同日龄猪的治愈效果相差较大，对1日龄发病仔猪的治疗效果不明显，随着日龄的增大，治愈效果不断增强，治愈率也逐渐增高。所以，对初生仔猪进行高免卵黄抗体注射可以有效地预防猪流行性腹泻的发生，对大日龄（尤其是40日龄）流行性腹泻感染猪施以高免卵黄抗体治疗，能收到较好的治疗效果。高免卵黄抗体可以在各大养猪场进行实践性应用与临床应用。

[1]张坤,何启盖.猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J].畜牧兽医学报，2010(08).

[2]刘文娟,吴健敏,陆芹章,等.抗猪病毒性腹泻卵黄抗体的研制及纯化[J].黑龙江畜牧兽医，2010(19).

[3]程志燕.抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗效果研究[J].农业与技术，2017(22).