HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宫颈上皮病变中的表达及预后相关性研究

丁 伟，曾 杰

（潍坊市妇幼保健院，山东 潍坊 261000）

宫颈癌是当前女性第二大生殖系统恶性肿瘤，也是唯一知道确切病因的肿瘤。宫颈上皮病变主要是指宫颈上皮内瘤变，是妇科常见病，也是宫颈癌的的病因，手术率是治疗高级别宫颈上皮病变的主要方法[1]。宫颈上皮病变的预后影响因素较多，不同患者的预后存在较大的差异，对于CIN患者而言，定期复查，及早诊断治疗，是阻断其向宫颈癌进展的关键。HPV16-E6、E7蛋白是两种与HPV-16相关的蛋白，HPV-16是宫颈癌高危因素之一，缺氧诱导因子-1α（HIF-α）是目前发现的缺氧条件下细胞应答最基本的调控因子，是联系恶性肿瘤缺氧和血管形成的一个主要调控因子，在许多恶性肿瘤中被检测到过表达。本次研究尝试分析HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宫颈上皮病变中的表达及预后相关性，为宫颈癌的预防提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2017年12月，本院开展TCT联合阴道镜活检诊断CINⅠ级、CINⅡ-CINⅢ宫颈上皮内瘤病变的及选择宫颈锥切患者入组。纳入标准：①临床资料完整；②获得了活检资料；③进行了随访，时间在1年及以上；④诊断为HR-HPV感染，明确了感染类型为HPV16型；⑤手术治疗的对象都获得了成功，切缘切缘无病灶累及，病灶已完全切除无残留病灶。排除标准：①复发对象；②有其他类型的宫颈病变，如尖锐湿疣；③近3个月有使用新性激素或阴道镜检查史，采样质量欠佳；④合并症妊娠。其中TCT联合阴道镜活检诊断采用超声等非切除术治疗的CINⅠ对象94例，年龄33～52岁，平均（42.5±6.2）岁。选择宫颈锥切治疗获得活检组织的对象105例，年龄32～57岁，平均（42.4±6.2）岁。其中CINⅡ级45例、Ⅲ级60例。

1.2 方法

1.2.1 不同CIN分级宫颈上皮内瘤变表达

TCT采样的对象，需要采集宫颈分泌物，阴道窥镜配合刷取脱落的宫颈上皮细胞，将刷头放置在洗脱管中，送检，进行HPV的分型检测，以及HPV-16、17蛋白以及HIF-a检测，蛋白检测采用Western Blot法检测。将CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组对象进行分组，对比三级对象的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达。

1.2.2 预后相关性分析

所有对象都根据病理诊断结果、患者的耐受等条件，选择合适的治疗方法，CINⅠ级别的对象选择聚焦超声为主的治疗方法。CINⅡ-Ⅲ级的对象选择宫颈锥切术治疗，术后联合免疫抑制剂等抗病毒治疗。所有对象禁性生活60日，3个月后检测HPV。若为阳性，则进行宫颈细胞学检查，同时为阳性，则每3个月进行HPV检测，若为阳性则进行活检，若为阴性，则每隔3个月随访HPV检测，持续阳性，则进行细胞学检查，提示异常，进行宫颈活检。若第3个月检测HPV为阴性，则每隔6个月进行宫颈细胞学检查，连续2年，出现双阳性后再进行宫颈活检。根据患者的预后进行分组，若患者HPV、TCT检查均为阴性则为有效，否则若出现任何一次检查为阳性，HPV阳性和/或TCT、活检阳性则视为无效。

1.3 观察指标

CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级对象的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达阳性率。CINⅠ非宫颈锥切手术的对象有效组、对照组的影响因素，包括HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达阳性率。CINⅡ、Ⅲ级手术对象有效组、对照组的影响因素，包括HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达水平。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 表达对比

CINⅠ的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达阳性率低于CINⅡ、CINⅢ级，CINⅡ级HIF-α阳性率低于CINⅢ级，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 因素分析

2.2.1 CINⅠ级对象预后因素

94例CINⅠ对象其中有效80例、无效14例，无效者主要为治疗后HPV复发对象。有效组年龄、HPV16-E6、HPV16-E7、HIF-a蛋白表达低于无效组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。有效组吸烟2.5%（2/80）、无效组0.0%（0/14），差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2.2 CINⅡ-Ⅲ级对象的预后

105例对象，其中有效82例、无效23例。有效组HPV16-E6、HPV16-E7、HIF-a蛋白表达低于无效组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。有效组吸烟6.1%（5/82）、无效组8.7%（2/23），差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达阳性率对比 [n（%）]

表2 CIN级对象的预后影响因素分析[（x ±s），M（P25-P75）]

表3 CINⅡ-Ⅲ级对象预后影响因素分析[（x ±s），M（P25-P75）]

3 讨 论

研究显示得出了以下的结论：①HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宫颈上皮病变中的表达阳性随着分级的上升而上升，HPV16-E6、E7蛋白在发生高级别病变后上升显著，HIF-a表达与分级关系更为密切，呈持续上升趋势。②表达还与患者的预后有关，高表达对象无效的风险更高。与绝大多数的研究结果基本相同，但不同文献报道的阳性表达率存在一定的差异，反映了CIN流行病学的差异，HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表达还受到其他因素的影响，如治疗的及时性、患者自身的免疫能力、分级的准确度等[2]。有报道显示HPV16-E6、E7变异与宫颈癌的发生关系密切，高蛋白表达提示HPV病毒复制更为活跃，发挥协调作用[3]。HIF-1α是肿瘤发生中的重要影响因子，一般而言其在正常的宫颈组织中无表达，但随着上皮内瘤病变的发生进展，其表达水平快速上升，有报道显示其在宫颈癌中的表达率可以达到100.0%，随着级别的上升HIF-1表达逐渐上升，也反映了CIN与宫颈癌确实存在密切的关系，在上皮内瘤发生时期，便已经出现了局部缺氧状态，出现细胞缺氧免疫应答[4]。

因此需要特别关注高表达对象，选择更为积极的治疗干预对策：①对于CINⅠ级的对象，若HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a高表达，则需要适当的采取积极的治疗干预对策；②若为CINⅡ级，若HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a低表达，也可以先尝试保守治疗，避免盲目的锥切，减少创伤；③对于CINⅡ-Ⅲ级的对象，HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a高表达，需要更为有效的抗病毒治疗、随访干预，如术后联合

干扰素治疗，重视提高活检的质量，及早诊断复发。

小结：HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宫颈上皮病变中的表达及预后有关，可作为CIN治疗的依据。

[1] 高 婷,李 超,梁 锌,等.中国癌症流行的国际比较[J].中国肿瘤,2016,25(6):409-411

[2] 罗丽丽,程 欣,蔡红兵.TGF-β_1的表达、HPV16 E7基因多态性与宫颈癌的相关性[J].武汉大学学报(医学版),2014,35(04):507-510

[3] 程莹星,黄 勇.HPV16-E6-DNA对宫颈癌预后价值分析[J].河北医学,2017,23(12):1944-1948

[4] 邓远征.宫颈上皮内瘤变术后复发的高危因素Meta分析[J].中国实用医药,2014,9(36):105-106