利福平胶囊（II）有关物质的测定

罗嫄 董瑞（成都市食品药品检验研究院 四川 成都 610045）

结核病是青年人容易发生的一种慢性和缓发的传染病，而利福平胶囊（Ⅱ）即适用于结核病、脑膜炎、军团菌病、结核性脑膜炎、麻风病等人群使用。虽然现在环境卫生条件提高，医疗技术发达，本制剂的使用范围和受众都有缩小，但其治疗意义依然存在。利福平胶囊（Ⅱ）目前没有被各国药典收载，现行标准也没有有关物质测定项，故本文结合《中国药典》2010版附录药品质量标准分析方法验证指导原则以及《中国药典》2010版利福平项下相关资料，对利福平胶囊（Ⅱ）的有关物质进行了方法学研究。

1.仪器与试药

Waters 2695-2489高效液相色谱仪：四元泵，在线脱气，柱温箱，自动进样器，紫外检测器；Millipore超纯水发生器；梅特勒电子天平。

醌式利福平对照品（中国药品生物制品检定所），N-氧化利福平对照品（中国药品生物制品检定所），3-甲酰利福霉素SV对照品（中国药品生物制品检定所），利福平对照品（中国药品生物制品检定所）。利福平胶囊（Ⅱ）（A药厂，编号：1、2、3；B药厂，编号4、5、6）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2.色谱条件及系统适用性试验

2.1 色谱条件

色谱柱：安捷伦C8（4.6×250mm，5µm）；流动相：甲醇-乙腈-0.075 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-1.0 mol·L-1枸橼酸溶液；流速：1.0ml·min-1；检测波长：254nm；柱温：35℃；进样量：10µl。

2.2 系统适用性试验

取3.3项下系统适用性溶液进样，各峰的分离度符合要求。

3.溶液的制备

3.1 供试品溶液的制备

精密称取供试品约250mg，置50ml量瓶中，加乙腈约25ml，温水浴中振摇使溶解，放冷后用乙腈稀释至刻度，摇匀，静置；精密吸取上清液用乙腈稀释并定量制成1mg·ml-1的溶液，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取利福平对照品适量，加乙腈溶解并稀释成10µg·ml-1的溶液作为对照品溶液（1）；分别精密称取醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解并稀释成10µg·ml-1的各杂质对照品溶液。

3.3 系统适用性溶液的制备

称取利福平对照品、醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解制成0.04mg·ml-1的溶液，即得。

4.方法与结果

4.1 专属性试验

对供试品进行了酸、碱、热、氧化和光照等破坏试验，结果证明该色谱条件对上述破坏后产生的降解产物能有效分离，色谱条件能满足利福平胶囊（Ⅱ）有关物质的测定。

4.2 线性和范围

分别取醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解并稀释成1、2.5、5、10、20、30µg·ml-1的各杂质对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定峰面积并进行计算，r均为0.9999，可见这三种特殊杂质在1～30µg·ml-1浓度范围内线性关系良好。

4.3 精密度

取3.2项下各杂质对照品溶液连续进样，计算精密度，结果表明各杂质的精密度均良好。

4.4 回收率试验

分别称取醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解并制成1mg·ml-1的各杂质对照品溶液。另每个特殊杂质回收试验称取供试品9份，置100ml量瓶中，分为三组，每组依次加入各杂质对照品溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率，各杂质回收率均在96%以上。

4.5 耐用性试验

换用不同的色谱柱：资生堂C8（4.6×250mm，5µm）进行有关物质检测，与原检测结果比较。实验结果表明，杂质峰分离度良好，杂质含量相差较小，本法耐用性良好。

4.6 样品测定

将两厂家样品进行测定，测定结果见表1。结果表明，两个厂家不同批号制剂中醌式利福平含量相近，N-氧化利福平和3-甲酰利福霉素SV含量相差较大，其余各杂质总量含量较为接近。

表1 样品有关物质测定结果（%）Tab.1 The results of related substance（%）

5.讨论

5.1 溶剂筛选

利福平溶于有机溶剂，将溶剂分别换为甲醇和乙腈进样，结果比较接近，但试验中发现用甲醇溶解的样品放置后会有析出现象，故选用乙腈做为溶解介质。

5.2 前处理方法的选择

因供试品为油性基质热溶解后灌装冷却成形，胶囊内容物为凝固的固体，且较硬，称样前需将其捣碎。若称取的样品直接超声处理，碎块的溶解性并不会随超声时间有所提高（曾试验超声30分钟以上，结果仍不理想），这样会影响成分的溶出进而影响测定结果。经试验将样品加入溶剂后置温水浴中振摇能很快溶解基质，故选择微微加热的方式来处理样品。

5.3 特殊杂质的对照品溶液一定要分开配制进样，因为如果全部混合到一份对照溶液中，它们会相互反应产生新的杂质，影响定量结果。

6.结语

本文建立了液相色谱法测定利福平胶囊（Ⅱ）有关物质的方法。在该色谱条件下可以定量测定主要杂质并控制其他杂质总量，杂质和主峰分离度好，可以用于该制剂的有关物质检测。

[1]张亦宏,黄竹清,杨亚军，等.HPLC整体柱测定利福平注射液的含量及有关物质[J].沈阳药科大学学报,2009(3):201-205.

[2]朱斌,胡昌勤.测定利福平有关物质HPLC方法的建立及确证[J].中国药学英文版,2002(1):19-23.

[3]黄毅岚，张丹，段思怡.HPLC法测定滴眼用利福平片中有关物质含量[J].中国抗生素杂志,2008,33(4):214-216.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].（2010年版二部）.北京:中国医药科技出版社，2010：358-359，附录194-195.

[5]余忠，朱江，徐婷婷.《中华人民共和国药典》利福平及制剂标准中有关物质测定方法的修改建议[J].《医药导报》,2012,31(10):1356-1358.

[6]栾爽，毕秀玲，钱小平，赵迎春.HPLC法测定乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ中利福平的有关物质[J].《中国药师》,2013,16(5):677-679.