宫颈鳞癌组织中MACC1和E-cadherin的表达相关性及与盆腔淋巴结转移的关系

赖丽梨 刘晓丽

近年来随着人乳头瘤病毒感染率的上升和社会生活的变化,宫颈鳞癌的发病率有上升趋势,且其病因尚未完全阐明。结肠癌转移相关因子 -1(metastasis-associated in colon cancer -1,MACC1)是近年来报道的调控肿瘤生长和转移的重要基因,后续研究证实了MACC1在多种癌组织中高表达,对妇科恶性肿瘤细胞的生物学行也有明显的影响［1］。上皮性钙粘附蛋白E(E-cadherin)是一个单-跨跨膜糖蛋白,是公认的与细胞-细胞黏附相关的关键分子,其表达减弱或缺失被认为是肿瘤发生上皮 - 间质转化 (epithelial-mesenchymal transition,EMT)最显著的特征之一［2］。肿瘤EMT是指癌细胞失去上皮表型、获得间质表型的转化过程,大量的研究显示EMT与肿瘤侵袭转移密切相关。本文采用免疫组化检测MACC1和E-cadherin在宫颈鳞癌组织、正常宫颈组织中的表达情况,探讨两者在宫颈鳞癌中的临床意义及与淋巴结转移的关系。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2013年10月～2016年12月广州市增城区人民医院病理存档的子宫颈鳞癌手术切除石蜡标本66例(其中盆腔淋巴结转移灶25例)和因子宫平滑肌瘤行全子宫切除的正常宫颈石蜡组织30例为研究对象。宫颈癌手术病理分期采用国际妇产科联盟(FIGO)2009年修订的标准进行评估,高分化鳞癌10例、中分化鳞癌45例、低分化鳞癌11例。所有石蜡组织标本均来自手术患者并经病理诊断,术前均未进行放、化疗。

1.2 方法 免疫组化采用EnvisionTM法,按说明书进行操作,浓缩型一抗MACC1抗体购自美国Abcan公司,E-cadherin即用型抗体及免疫组化检测试剂盒、柠檬酸盐抗原修复液、PBS粉剂、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。石蜡组织3 μm厚切片,脱蜡至水,于柠檬酸盐抗原修复液高压锅加热修复 3 min,自然冷却后 PBS 洗 5 min 3 次 ,3% 过氧化氢 (H2O2)室温孵育 10 min,PBS 洗 3 min 3 次 ,一抗 (MACC1 稀释度 1∶100)37℃孵育 1 h,PBS 洗 3 min 3 次 ,加入快捷型酶标羊抗鼠/兔免疫球蛋白(IgG)聚合物20 min,PBS 洗 3 min 3 次 ,DAB 显色 ,显微镜下控色 ,苏木素复染核 ,常规中性树胶封片。

1.3 判定标准 细胞阳性着色显示为棕黄色至棕褐色,结果评判由2名高年资病理医师进行双盲读片确定,判定标准参照文献［3］。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验；相关因素分析采用Pearson相关分析影响因素采用Logistic回归分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MACC1与E-cadherin在宫颈鳞癌组织中的表达及相关性分析 MACC1阳性表达于细胞浆,在宫颈鳞癌组织中55例阳性表达(见图1),阳性率83.3%,在正常宫颈阳性表达率为10.0%(3/30),比较差异具有统计学意义(χ2=46.38,P＜0.05)。E-cadherin在正常宫颈组织中全部阳性表达,阳性率100.0%；在宫颈鳞癌组织中,E-cadherin出现表达减弱或缺失(见图2),阳性率48.5%(32/66)；比较差异具有统计学 意 义 (χ2=23.9,P＜0.05)。Pearson 相 关 分 析 显 示 ,MACC1与E-cadherin表达在宫颈鳞癌组织中呈负相关(r=-0.593,P＜0.05)。

2.2 宫颈鳞癌与盆腔淋巴结转移的单因素分析 经单因素分析,不同MACC1、E-cadherin表达、肌层浸润深度、分化程度、脉管侵犯的盆腔淋巴结转移阳性率比较差异具有统计学意义(P＜0.05)；不同FIGO分期、年龄、肿瘤最大径的盆腔淋巴结转移阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

图1 MACC1在宫颈鳞癌组织中阳性表达

图2 E-cadherin在宫颈鳞癌组织中表达减弱

表1 宫颈鳞癌与盆腔淋巴结转移的单因素分析［n(%)］

2.3 影响因素的多因素Logistic回归分析 将MACC1、E-cadherin、分化程度、肌层浸润深度和脉管侵犯等可能是影响淋巴结转移的因素纳入多因素的Logistic回归分析,结果显示,MACC1、E-cadherin和肌层浸润深度是盆腔淋巴结转移的影响因素 (OR=6.231、5.068、4.112,P＜0.05)。

3 讨论

MACC1是Stein等在2009年发现的一个与结肠癌发生、发展、转移相关的基因,位于人染色体7p21.1。在MACC1被发现与结肠癌的侵袭和转移密切相关以来,越来越多的研究表明MACC1 在不同的肿瘤组织中均有表达,如,胰腺癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等［4］。已有研究表明宫颈感染人乳头瘤病毒(HPV)可能是MACC1的激活条件之一,MACC1在宫颈鳞癌组织中高表达,其高表达与宫颈癌的侵袭转移密切相关,参与了宫颈癌的盆腔淋巴结转移［5,6］。在宫颈癌细胞中干扰MACC1表达的水平后,癌细胞的增殖、侵袭能力等生物学行为受到抑制［7］。本研究发现,MACC1高表达与宫颈鳞癌组织相关,并且多因素Logistic回归分析显示MACC1是影响盆腔淋巴结转移的因素。这些结果与文献报道相符合［5,6］。

MACC1与肿瘤侵袭、转移密切相关,而肿瘤发生EMT后,将更加侵袭、转移能力。有研究表明MACC1 基因促进了结肠癌的EMT过程,从而增强了肿瘤细胞的侵袭转移能力［8］。在宫颈癌中,MACC1影响癌细胞侵袭转移的机制是否涉及EMT,目前报道极少。E-cadherin表达减弱或缺失被认为是肿瘤发生EMT的重要分子标记物［2］。本研究结果显示,宫颈鳞癌中E-cadherin表达减弱或缺失,Logistic回归分析显示E-cadherin表达减弱或缺失是宫颈癌盆腔淋巴结转移的影响因素。这些结果提示宫颈癌中存在EMT,并且发生EMT的病例容易发生盆腔淋巴结转移,这些结果符合肿瘤EMT理论。

Pearson相关分析,MACC1与E-cadherin表达在宫颈鳞癌组织中呈负相关(P＜0.05)。MACC1调控EMT的机制目前尚未阐明。根据现有研究报道,MACC1可以调控HGF/c-Met信号通路［9］,HGF/c-Met信号通路可通过激活下游 PI3K-AKT、Ras-MAK等信号通路,上调Twist、Slug、Snail等E-cadherin蛋白转录抑制因子的表达,从而使E-cadherin表达水平降低［10］。因此,作者推测宫颈癌中MACC1高表达可能会抑制E-cadherin的表达水平,从而使肿瘤发生EMT而促进侵袭、转移。

综上所述,宫颈鳞癌组织中MACC1表达增加而E-cadherin表达减弱或缺失,两者均能作为评估宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移的高危因素,MACC1可能通过调控宫颈鳞癌的EMT而促进侵袭、转移,但这些尚待进一步研究证实。探讨宫颈癌中MACC1与EMT之间的相关性及其在宫颈癌发生发展、侵袭和转移过程中的可能机制,阻断这一机制的发生,阻抑浸润转移发生,可为宫颈癌患者的个体化诊疗,尤其是预后判断、综合治疗及基因治疗提供新的方向和指导思路。

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