“即刻性”质控在ELISA定性试验室内质量控制中的应用和探讨

徐畅 梁爽 井元冰

ELISA试验是血站实验室的主要检测项目,确保每个检测项目每批次试验结果的有效性、稳定性、准确性,方可保证临床用血的血液质量,血站的血液质量安全与实验室检验结果的可靠性紧密相关。实验室建立科学有效的室内质量控制方法以保证血液检验结果的准确、可靠,目前ELISA试验的室内质量控制常采用Levey-Jennings质控法(L-J质控法)和“即刻性”质控法［1,2］,在常规试验条件下质控血清和检测样品同等条件下同时检测；“即刻性”质控是累计3次质控检验结果值计算即可开展质量控制故称之“即刻性”质控。“即刻性”室内质控因它的快速、简便、科学和实用而被广泛应用。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 Microlab STAR 全自动加样仪、HAMILTON FAME(24/20)全自动酶免分析仪、唐山血液信息管理系统。

1.1.2 试剂 ELISA法检测试剂盒HBsAg为北京万泰生物药业有限公司,试剂在有效期内；弱阳性质控血清为北京康彻思坦生物技术有限公司,在有效期内。

1.2 方法 在ELISA常规试验中应用弱阳性质控品建立室内质控制图,以HBsAg项目为例第1～20次试验采用“即刻性”室内质控方法,第21次起采用Levey-Jennings室内质控方法,通过两种方法进行室内质量控制,分析“即刻性”室内质控方法的应用。严格依据ELISA试剂盒内说明书操作,设置阴、阳性对照,质控品对照,Cut-off临界值计算方法按说明书,S/CO为室内质控值,弱阳性质控品在低温冰冻保存,使用前放置于室温溶化,待其与试剂在室温平衡后和献血者标本同时检测,剩余标准品在2～8℃中冷藏保存续用。

HBsAg检测项目按照SOP应用全自动检测设备检测,HBsAg检测项目每一个检测微板为1个批次,每批次微板上设置1个质控孔位并以其S/CO值作为质控值,微板的检验结果通过酶标仪读取,用于室内质控的弱阳性质控品浓度S/CO值为2～5,弱阳性质控品正式使用前应确认,包括质控品批内和批间检测S/CO值结果的精密度等；质控值从第3次开始用“即刻性”进行质控。计算方法如下：①计算出质控值(至少3次)的平均值()和标准差(SD)。②计算SI上限值和SI下限值：SI上限=(X最大值-)/s；SI下限=(-X最小值)/s。③查SI值表,将SI上限和SI下限与SI值表中的数值进行比较。

当SI上限和SI下限值＜n2s时,表示处于控制范围之内,可以继续进行测定,并重复以上计算；当SI上限和SI限有一值处于n2s和n3s值之间时,说明该值在2s～3s范围,处于“警告”状态；当SI上限和SI下限有一值＞n3s时,说明该值已在3s范围之外,属“失控”。数字处于“失控”状态应舍去,重新测定质控品和标本。舍去的只是失控的这次数值,其他次测定值仍可继续使用。当检测的数字＞20次以后,可转入使用常规的质控方法进行质控。根据参考文献探讨“即刻性”存在剔除末次测定值和剔除最大偏离值两种方法。

2 结果

第 5 次室内质控 S/CO 值 =2.21,SDI 上限和 SDI 下限值分别为1.06、1.49,室内质控值不失控。当第9 次室内质控S/CO 值 =3.26,SDI 上限和 SDI 下限值分别为 1.14、2.14,室内质控值处于“警告”状态。提示室内质控测定值中发现明显偏离群体的极值 ,在 n=5 时 ,室内质控 S/CO 值 =2.21,为最小偏离值,导致n=9时才能发现出质控值失控,剔除最小偏离值后,其他质控值计算均在控,这一现象称之为“回顾性失控检出”。见表1。

表1 HBsAg 室内质控数据分析 (0.2 IU/ml)

3 讨论

ELISA试剂有效期较短,因试剂批号、厂家更换或质控品批号、厂家与浓度更换时如应用L-J法进行室内质量控制,需连续做20次实验,求出质控值得平均值(X)和标准差(SD),试剂浪费较多,而且前20次质控值出现明显偏离群体的极值对L-J法室内质控图建立影响较大；而“即刻性”质控法从试验的第3次就可以对以后的质控数据进行在控与失控的判断,操作快速、简便,因此在ELISA试验质量控制中对于一些检测频次少或试剂更换频繁的检验项目,初始阶段可采用“即刻性”质控,但“即刻性”质控只能判断当天质控值是否在控,随着数据的增多,会出现之前在控的质控值出现“警告”或“失控”,这也是即刻性 “回顾性失控检出” 的一个缺陷［3］。L-J质控法是根据试验的20组质控数据值,计算出均值和标准差,绘制出质控图,能够明确的了解每个质控数据值的是否在控情况,使得质控点的判断更加科学、直观,并随着质控数据的增多,当质控值出现上升或下降趋势,便于发现,及时分析原因进行预防性消除,实验结果准确可靠［4-7］。因此质控数据较多时L-J质控法优于“即刻性”质控。故室内质控前20次可采用“即刻性”质控,第20 次后采用L-J质控图法。通过上述分析,实验室应建立相应的质量管理体系并持续改进,对实验室人员应不断加强业务培训,提高实验室人员的质量意识,保证室内质量控制方法正确实施。

当“即刻性”质控应用于试验中出现极值时,剔除明显偏离群体的极值；“即刻性”质控在室内质控数据值较少时即可以达到开展室内质控的目的［8-10］。建议在室内质控数据达到20次建立L-J质控图后,应及时进行室内质控数据回顾性分析。“即刻性”质控法在ELISA试验的室内质控值前20次期间,L-J质控图未做出之前,第3次即可判定室内质控值是否在控,即时进行实验监控,较L-J法更快速、简便,因此“即刻性”质控和L-J质控法作为ELISA试验的室内质控方法更适宜,更能满足实验室ELISA试验开展室内质量控制的要求。

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