ProExc在HPV相关宫颈鳞状上皮内病变中的表达及意义

闵建芳　杨安强

[摘要] 目的 检测ProEXC在宫颈鳞状上皮内病变（SIL）中的表达及高危型HPV DNA检测，探讨其在临床病理诊断中的意义。 方法 方便选取2013年2月—2015年2月采用免疫组化的方法检测100例宫颈低级别鳞状上皮内病变（LSIL）、200例宫颈高级别鳞状上皮内病变（HSIL）样本中ProEXC的表达， 采用HC-2法检测HPV DNA。结果 ProEXC阳性染色定位于细胞核，HPV DNA 1.0 pg/mL为阳性；其中在宫颈LSIL中阳性率为41.0%、62.0%，在宫颈HSIL中的阳性率为69.0%、78.5%，二者相比差异有统计学意义（P<0.01）；在对照组中阳性率为8.3%、10.0%，与宫颈LSIL组和宫颈HSIL组相比，差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 宫颈HSIL中ProEXC的高表达，再结合高危型HPV检测，可能作为辅助诊断宫颈SIL的指标，并能有可能區分宫颈HSIL与宫颈LSIL。

[关键词] 鳞状上皮内病变；ProEXC；HPV

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）02（c）-0001-03

Expression and Significance of and ProEXC in HPV Associated Cervical Squamous Intraepithelial Lesion

MIN Jian-fang1， YANG An-qiang2

1.Department of Pathology， the First Affiliated Hospital of Shihezi University， Shihezi， Xinjiang， 832000 China； 2.Department of Pathology， Wuxi Maternal and Child Health Hospital， Wuxi， Jiangsu Province， 214000 China

[Abstract] Objective This paper tries to investigate the significance of the pathological diagnosis by detect the expression of ProEXC and HR-HPV DNA in cervical squamous intraepithelial lesion（SIL）. Methods From February 2013 to February 2015，100 cases of LSIL， 200 cases of HSIL were convenient collected ProEXC was detected by immunohistochemistry. HR-HPV DNA was detected by HC-2. Results ProEXC positive staining was localized in the nucleus and HPV DNA 1.0 pg/ml for the positive. The positive rate of the LSIL was 41.0%， 62.0% and HSIL was 69.0%， 78.5%， compared to the difference between the two was significant（P<0.01）. The positive rate of control group was 8.3%， 10.0%，LSILand HSIL compared， the difference was significant（P<0.01）. Conclusion The high expression of ProEXC in HSIL， combined with HR- HPV detection， can be used as a index of auxiliary diagnostic SIL， and can distinguish between HSIL and LSIL.

[Key words] SIL； ProEXC； HPV

宫颈癌是女性生殖系统较常见的恶性肿瘤。我国宫颈癌的患病率也呈逐渐升高的趋势。而对于宫颈癌的防治，早预防、早诊断与早治疗是关键，因此，我们只有对宫颈鳞状上皮内病变（SIL）做出正确的诊断，临床医生也才能根据该诊断做出相应的治疗，最终达到彻底治愈。那么，宫颈SIL的准确诊断及潜在意义在宫颈癌防治中就起到了关键作用。ProEXC是拓扑异构酶Ⅱα（TOP2A）和微小染色体修复蛋白2（MCM2）鸡尾酒抗体。研究表明[1-2]在宫颈SIL病变中，ProEXC的表达随着宫颈SIL的级别升高而增高，且与高危HPV（HR-HPV）感染密切相关。2013年2月—2015年2月该研究通过检测ProEXC在宫颈SIL中的表达，探讨ProEXC表达与HR-HPV感染在宫颈SIL诊断中的价值，提高宫颈SIL的诊断正确率，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院手术的宫颈标本共360例。其中宫颈低级别鳞状上皮内病变（LSIL）100例，宫颈高级别鳞状上皮内病变（HSIL）200例，正常宫颈对照60例。

1.2 检测方法

①标本采用10% 中性甲醛固定，制成蜡块，通过石蜡切片后进行HE染色，最后在光镜下确定病理诊断及分组。ProEXC检测采用免疫组化SP法，用已知阳性片做ProEXC阳性对照。通过提前稀释后，把MCM2与TOP2A混合为鸡尾酒抗体，即ProEXC[3]。②采用杂交捕获Ⅱ代（HC-2）法检测HPV DNA。

1.3 结果判断

ProEXC阳性为细胞核染成棕黄色，结果判定依据阳性细胞数及着色强度两项指标，进行判读；分为阴性（-）、弱阳性（+）、中度阳性（++）、强阳性（+++）。HC-2判定标准：阴性< 1.0 pg/mL；阳性≥1.0 pg/mL。

1.4 统计方法

应用SPSS 14.0统计学软件进行处理，计数资料采用百分率表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ProEXC在宫颈SIL中的表达

宫颈SIL组及对照组中ProEXC表达阳性率（见表1），宫颈对照组中ProEXC表达率低于SIL组，差异有统计学意义（χ2=73.65，P<0.01）；ProEXC在宫颈HSIL与LSIL中的表达，差异有统计学意义（χ2=21.72，P<0.01）。ProEXC在对照组中，阳性细胞数很少超过10% ，而且主要分布在近基底层（见图1），而在宫颈HSIL中，阳性细胞散在分布于上皮1/3以上至上皮全层，阳性细胞数量多少不等，<10%或>90%均可见到（见图2）。

2.2 HPV DNA在宫颈SIL中的表达

宫颈SIL组及对照组中HPV DNA阳性率（见表2），宫颈对照组中HPV DNA阳性表达低于正常SIL组，差异有统计学意义（χ2 =158，P<0.01）；HPV DNA在宫颈LSIL组的阳性低于宫颈HSIL组，差异有统计学意义（χ2 =9.21，P<0.01）。

3 讨论

宫颈癌是女性生殖系统较常见的恶性肿瘤。由于宫颈癌的发生存在着一个较长、可逆的癌前病变区，即宫颈SIL。宫颈细胞学检查在女性宫颈癌的防治中一直发挥作用，但由于临床医生的取样水平及经验不同，导致取样细胞多少不均，进而致其敏感性低及假阴性率高，最后影响到诊断的准确性。通过妇科阴道镜下取宫颈活检组织送病理检查是诊断宫颈SIL的金标准。但国内不同病理医生对宫颈SIL诊断标准有不同的理解，最后做出的病理诊断出入也很大。因此，希望通过检测一些特异性标志来帮助病理医生正确诊断宫颈SIL。

ProEXC是MCM2和TOP2A的鸡尾酒抗体[1，3-5]，通过改变DNA空间结构，在DNA生命活动中具有重要作用。TOP2A的表达有赖于细胞周期，在正常细胞中仅见于S期和G2/M期，但在肿瘤细胞中，TOP2A表达率增高且不再依赖细胞增殖周期，其在G0、G1 期即可出现表达[6]，使得在恶性增殖细胞中的表达比良性增生细胞更高。屈王蕾等[2]认为随着宫颈癌前病变程度的升高，Topo II a蛋白表达随之上调，且与细胞中高危型HPV的拷贝量呈正相关。MCM 2是MCM复合体的一个组分，它在休眠细胞中低表达，在增生活跃的细胞中高表达，在细胞从G0 进入G1 期之前表达即开始升高，G1末期和S早期达到峰值[7]。研究表明，在高危型HPV感染和宫颈SIL病变时MCM 2过表达[8]，ProEx C将TOP2A和MCM 2联合使用，可发挥两个抗体的协同作用，防止单独应用MCM 2和TOP2A时可能存在的漏标情况，使鸡尾酒抗体得到认同[1，3]。研究表明，ProEXC是宫颈HSIL的标志物之一，对宫颈HSIL具有较高的特异性和敏感性，并有助于识别容易进展到宫颈癌的病变[1，3-6]，Pinto等[4]研究显示，对宫颈HSIL，ProEXC具有较高的敏感性和特异性，对于宫颈非SIL，ProEXC的假阳性率也较低，有利于鉴别反应性上皮改变与宫颈SIL病变。该研究中ProEXC在宫颈HSIL与LSIL中的表达差异均有显著性，且病变越严重阳性表达率越高，进一步证实了ProEXC在宫颈HSIL与LSIL中的诊断意义。

综上所述，对宫颈鳞状上皮内病变客观、正确的分级和病理诊断，对临床医生下一步治疗以及评价预后是非常重要的。本文结果探讨显示，在宫颈鳞状上皮内病变中联合检测ProEx C和HR-HPV，可能作為辅助诊断宫颈鳞状上皮内病变的指标，并能有可能区分宫颈HSIL与宫颈LSIL，帮助病理医生正确诊断宫颈SIL。

[参考文献]

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[2] 屈王蕾，高宝辉，董剑达，等.Topo lIa在宫颈癌前病变中的表达及其与高危型人乳头瘤病毒感染的关系[J].医学研究杂志，2012，41：25-28.

[3] Shi J，Liu H，Wilkerson M ，et a1.Evaluation of pl6INK4a，minichromosome maintenance protein 2，DNA topoisomerase II alpha，ProEX C，and p16INK4a/ProEX C in cervical squamous intraepithelial lesions[J].Hum Pathol，2007，38：1335-1344.

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[5] David O，Cabay RJ，Pasha S，et a1.The role of deeper levels and ancillary studies （p16（Ink4a） and ProExC） in reducing the discordance rate of Papanicolaou findings of high-grade squamous intraepithelial lesion and follow-up cervical biopsies[J].Cancer，2009，117（3）：157-166.

[6] Villman K，Stahl E，Liljegren G，et a1.Topoisomerase II-alpha expression in different cell cycle phases in fresh human breast carcinomas[J].Mod Pathol，2002，15：486-491.

[7] Bailis JM，Forsburg SL.MCM proteins：DNA damage，mutagenesis and repair[J].Curr Opin Genet Dev，2004，14：17-21.

[8] Ishimi Y，Okayasu I，Kato C，et a1.Enhanced expression of Mcm proteins in cancer cells derived from uterine cervix[J].Eur J Biochem，2003，270：1089-1101.

（收稿日期：2017-11-21）