玉龙雪山一乳菇属(红菇科，担子菌门)新种

罗 侠

1 引言

乳菇属(LactariusPers.)属于红菇科(Russulaceae)担子菌门(Basidiomycota)，世界上该属已描述的种约500种[1,2]。 乳菇属真菌主要具有淀粉质纹饰的孢子、具乳汁的子实体及子实层假囊体[3,4]. 乳菇属目前包括三个亚属，分别为：Lactarius、Plinthogalus(Burl.) Hesler & A.H. Sm. 和Russularia(Fr. ex Burl.) Kauffman[2,5,6]。Russularia亚属的识别特征为菌盖干燥，橙棕色、棕色或红棕色，质脆[7]。

根据已有文献报道，中国有乳菇属真菌130种，包括12个变种和1个变型[8,9]。但由于种种原因，中国乳菇属分类还存在很多混乱，且实际存在的物种多样性可能远比这个要高，本研究通过野外调查，采用分子和形态鉴定的方法得到玉龙雪山乳菇属一新种。

2 研究材料和方法

2.1 研究区域概况

研究区位于云南玉龙雪山(N26°59′-27°17′, E100°04′-100°15′)，海拔高度在2,400至5,596 m[10]。日平均温度从1月份的6.1 °C 到7月份的18 °C ，年总降雨量大约958 mm[11]。森林植被类型为亚高山植被类型，以云杉和冷杉为优势树种。

2.2 形态学研究

大型真菌子实体在野外拍照，并详细记录其外部形态特征，具体根据Wang 等的研究方法[9]。颜色描述根据Kornerup & Wanscher指导进行[12]，并记录子实体乳汁颜色及其空气中的颜色改变。

干燥样品保存在昆明植物研究所标本馆(HKAS)和泰国皇太后真菌标本馆(herb. MFLU)。显微结构观察和描述根据根据Heilmann-Clausen 等的方法[13]。盖表皮和菌丝结构在1% 刚果红(Congo Red L4)溶液中观察[14]。孢子在梅试剂中观察(Melzer’s reagent)。孢子的大小和测量方法根据Wang 等的方法[9]。孢子的电子扫描照片(SEM)使用LEO/1450VP 显微观察拍照。

2.3 DNA提取和PCR 扩增

真菌子实体样品核DNA提取按照试剂盒中的步骤进行(Biospin Fungus Genomic DNA Extraction Kit (BSC14S1)，以ITS1-F/ITS4为引物扩增内转录区(ITS)片段[15,16]。 PCR反应条件为 5 min 94 °C热变性，接着94 °C 30 secs 35个循环，55 °C 30 secs，然后70 °C 45 secs，70 °C 7 mins延伸。PCR反应产物于4 °C冰箱保存。

2.4 DNA 序列和系统发育分析

PCR扩增产物送北京测序公司进行正反方向测序(IOMARRY)，所得正反序列在SeqMan Pro (DNASTAR, Madison, WI)中合并和修剪。然后在MAFFTversion 7中进行多重比对[15]，并在BioEdit v. 7.0.4中对序列进行手动修剪[16]，然后在Gblocks 0.91 b中对齐并剪切掉部分质量差的位点[17]，ITS1、5.8S 和ITS2用于系统发育树分析，所有序列信息见表1。选择L.hirtipesJ.Z. Ying, (Fr.) Fr.,L.gracilisHongo和L.glabrigracilisWisitr. & Nuytinck 三个种为外类群。最大相似性分析(Maximum likelihood (ML))在网站CIPRES中RAxML-HPC2 XSEDE (8.2.10)系统中进行[18-20]，采用GTRGAMMA 模型，1000次重复。贝叶斯分析(Bayesian analysis)在MrBayes 3.2中运行[21,22]，在MrModeltest 2.3 中通过hLRT的得到GTR+I+G 模型[23]。贝叶斯分析 (BI) 运行50,000,000代，最终得到最优系统发育树形，结果见图1。

表1 分子系统发育分析采用的乳菇属分类信息和GenBank数据

支持率左边的数值表示最大相似性超过70%的值，右边的数值表示贝叶斯分析超过0.85的数值，比例尺代表每个位点核苷酸变化的期望值。图1 以ITS rDNA序列数据建立的乳菇属真菌最大相似性系统发育树

3 结果

LactariusserilactiferX. Luo sp. nov. — Index Fungorum number IF552922 — Facesoffungi number FoF 03172; 图2、图3。

a. 担子 b. 假囊体 c. 侧生大囊体 d. 盖表皮。— 比例尺：a-c = 10 μm，d = 20 μm。图2 Lactarius serilactifer结构图

比例尺： a-b = 20 mm，c-e = 1 μm。图3 Lactarius serilactifer子实体(a-b)照片和孢子扫描电镜照片

语源—‘serilactifer’指的是乳液状乳汁。

正模式标本 — 中国，云南，丽江，玉龙雪山，海拔3,490 m，云杉和冷杉混交林，N 27° 00.145, E 100° 10.230, 采集时间2015年8月18，采集人罗侠(Holotype，HKAS 94673)。

识别特征 — 子实体中型，暗棕至暖红棕色，菌盖表面有皱纹，水乳状至乳白色，球形或近球形担孢子，孢子具不完整网状结构，囊体稀少，盖表皮球囊型。

菌盖直径50-70 mm，幼时轻微下陷，边缘内卷，成熟时呈下陷状，边缘延伸；菌盖表面皱褶，干燥，中部黑棕色(9F6-9F4)，边缘红棕色(9E5-9E4)，有黑点。菌褶3-5 mm宽，具1-2 系列菌褶，延生，乳白色。菌柄65-78 × 12-16 mm，质脆，圆柱形或向下渐粗，表面光滑，髓中空，湿润，暗棕色(9F6-9F5)。菌肉2-4 mm厚，白色至浅橙色(5A2)，乳汁丰富，水状至乳状，空气中不变色。

孢子 (6.0) 6.1-7.5 (7.7) × (5.4) 5.5-6.8 (7.0) μm, av. 6.6 × 6.2 μm, 球形至近球形，Q = 1.0-1.2 (n=35), SD =1.1 ± 0.1；纹饰高0.6至1.0 μm，疣状凸起形成不完全网状结构；脐部非淀粉质。担子(31) 34-43 (44) × (8) 9-11 (12) μm，棒状至近棒状。侧生大囊体少，40-50 × 6-7 μm，近纺锤形，顶端念珠状或有短尖头。褶缘可育，褶缘囊体少，22-51 × 4-11 μm, 近纺锤形，顶端念珠状或尖。假囊体丰富，10-43 × 2-11 μm， 棒状或近棒状，有时顶端稍宽。盖表皮球囊型，43-136 μm厚；菌丝2-7 μm宽。

生长环境— 生长在云杉和冷杉的混交林中，生长季在7月至10月。

样品其它信息 —中国，云南，丽江，玉龙雪山，海拔3,490 m，云杉和冷杉混交林，N 27° 00.145, E 100° 10.230, 采集时间2015年8月18，采集人罗侠(Isotype, MFLU 16-2751)。

4 讨论

Lactariusserilactifer属于Russularia亚属，这个种的主要识别特征为黑棕至红棕色菌盖，菌盖表面褶皱，乳白色乳汁，孢子具不完整纹饰，囊体少，盖表皮球囊型。分子系统发育树结果得出，该新种明显区别于其它种，且具有很高的支持率(99/1)。该种从形态上与L.hepaticusPlowr.相似，但是该欧洲种区别于L.serilactifer的主要特征有乳汁逐渐变为黄色，盖表皮栅栏型[13]。该新种也与L.sphagneti(Fr.) Neuhoff相似，但后者菌盖浅白色且边缘具锯齿，孢子具完整网状纹饰，盖表皮粘栅栏球囊型[13]。

[参 考 文 献]

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