天然乳胶橡胶避孕套微生物限度方法适用性检查的研究

张明君 朱毅忠 任艳艳 新疆维吾尔自治区食品药品检验所 （新疆 乌鲁木齐 830004）

天然胶乳橡胶避孕套以其使用方法简单、副作用小等特点，在世界各国得到广泛应用，是公认为最有效的避孕、阻隔某些性病和艾滋病传播的医用器具[1]。这也表示天然胶乳橡胶避孕套在发挥其避孕作用的同时，还要起到阻隔病毒、预防传播性疾病作用[2]。随着生活品质的提高，人民对避孕套质量的要求也随之提高，同时，作为医用器具，其安全性也是必要前提。目前国家标准对避孕套具体的卫生技术要求尚未作明确的规定，因此有必要对避孕套的微生物限度进行考查。本实验按照《中国药典》2015版四部和GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的相关规定，对其进行微生物限度方法适用性检查的研究。

1.资料与方法

1.1 一般资料

仪器：LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），EL500S电子天平（常州市天之平设备有限公司），WDP-9272电热恒温培养箱（上海安亭科学仪器有限公司），QS-PY150智能型生化培养箱（上海奇珊电子科技有限公司），移液管等。

样品：天然乳胶橡胶避孕套，生产厂家A（批号：20160617231），B（批号：1606532），C（批号：1606182），D（批号：16051），E（批号：1000050375），F（批号：160703），G（批号：15128），H（批号：201512093）。

菌株：大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44 102]，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63 501]、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10 104]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)98 001]和黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98 003]。以上菌株均由中国药品生物制品检定所提供。

培养基与稀释液：胰酪大豆胨琼脂（批号:20170811）、胰酪大豆胨液体（批号:20160719）、沙氏葡萄糖液体（批号:20160722）、乳糖胆盐发酵（批号:20161218）、SCDLP液体（批号:20150812）、伊红美兰琼脂（批号:20160722）、十六烷三甲基溴化铵琼脂（批号:20160520）、葡萄糖肉汤（批号:20170615）、血琼脂平板（批号:20171205）等均由青岛高科园海博生物技术有限公司生产。0.9%氯化钠自制。上述培养基经121˚C高压蒸汽灭菌后，冷却至45˚C左右，备用。

1.2 方法

1.2.1 菌液的制备

取经33˚C培养18～24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数不大于10000cfu/mL的菌悬液；取经25˚C培养2～3d的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数不大于10000cfu/mL的菌悬液；取经25˚C培养5～7d的黑曲霉斜面培养物，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成含孢子数不大于10000cfu/mL的孢子悬液。

1.2.2 供试液制备

取供试品10g，剪碎，加入0.9%无菌氯化钠溶液至100mL，混匀制成1:10供试液，备用。另取供试品10g，剪碎，加入含2%聚山梨酯-80的0.9%无菌氯化钠溶液至200mL，混匀制成1:20供试液，备用。

1.2.3 需氧菌总数方法适用性检查

平皿法：分别取1:10供试液和1:20供试液各10mL，加入0.1mL制备好的菌液，混匀。取含菌供试液1mL，置直径90mm的无菌平皿中，注入相应的琼脂培养基，置规定温度培养48～72h观察结果。见表1和表2。

从表1结果可以看出，采用平皿法1:10供试液检验避孕套，人工污染5株代表菌株，该供试品对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收比值均在0.5～2，而枯草芽孢杆菌的回收比值均低于0.5，因此采用平皿法1:10供试液方法不可取。

表1.需氧菌总数采用1:10供试液的回收比值

表2.需氧菌总数采用1:20(含2%聚山梨酯-80)供试液的回收比值

从表2结果可以看出，采用平皿法1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液检验避孕套，人工污染5株代表菌株，该供试品对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收比值均在0.5～2，因此需氧菌总数采用平皿法1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液进行试验。

1.2.4 控制菌检查方法的验证

大肠菌群检查：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液5mL，接种50mL乳糖胆盐发酵管，置33˚C培养24h；铜绿假单胞菌检查：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液5mL，接种50mL SCDLP培养液中，置33˚C培养24h；金黄色葡萄球菌检查：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液5mL，接种50mL SCDLP培养液中，置33˚C培养24h；溶血性链球菌：取1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液5mL，接种50mL葡萄糖肉汤中，置33˚C培养24h；符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的相关要求，大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均为阳性。

2.结果

天然乳胶橡胶避孕套微生物限度检查方法：取供试品10g，剪碎，加入含2%聚山梨酯-80的0.9%无菌氯化钠溶液至200mL，混匀制成1:20供试液，需氧菌总数采用1:20（含2%聚山梨酯-80）供试液平皿法检验，大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌控制菌检查采用常规方法检验。

3.讨论

本实验对8个厂家的天然胶乳橡胶避孕套进行了微生物限度的方法适用性检查，结果发现有8个厂家的枯草芽孢杆菌回收比值均低于0.5，在增加稀释液体积和加入适量的中和剂后，而枯草芽孢杆菌回收比值达到0.5～2，符合《中国药典》2015年版四部的相关要求。由于避孕套的表面包裹着一层润滑剂，而各个厂家的润滑剂的种类和用量又各不相同，虽然有效的增加了其使用的方便和安全，但是对微生物的检查存在着很大的障碍[3]。本实验初步考查了天然胶乳橡胶避孕套的微生物限度检查，为今后制定避孕套的微生物限度检测提供参考。

[1]宁丽峰,原思渊,郭颖志,等.天然乳胶橡胶避孕套安全性研究进展[J].中国计划生育学杂志,2013,21(8):557-560.

[2]肖忆梅.对GB7544《天然胶乳橡胶避孕套技术要求和试验方法》的几点商榷和建议[J].中国医疗器械杂志,2010,34(6):448-449.

[3]邓一志.天然胶乳橡胶避孕套卫生技术要求探讨[J].中国石油和化工标准与质量,2009,29(5):25-28.