奥氮平中有关物质的HPLC法测定

张琦

摘 要：建立了高效液相色谱法测定奥氮平中有关物质，使用C8色谱柱梯度洗脱；检测波长为220nm，结果显示奥氮平精密度良好，专属性良好，与有关物质分离完全，奥氮平及各杂质在范围内线性良好，回归线的相关系数R均大于0.9990，但奥氮平溶液在室温下放置有不稳定现象，需立即进样。结论：该方法重复性好，结果准确，能更好地控制奥氮平中有关物质的含量。

关键词：奥氮平 有关物质 高效液相色谱仪

中图分类号：TQ460 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）01（c）-0080-02

奥氮平化学名为2-甲基-4-（4-甲基-1-哌嗪基-）-10H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮杂卓，是一种新型非典型抗精神病药，可有效改善精神分裂症状，安全性高，耐受性好，EPS发生率低[1-3]，已广泛用于治疗多种精神疾病。美国药典35版增补1[4]中收录了“奥氮平”质量标准，其有关物质检查项下考察了奥氮平杂质A及奥氮平杂质B两个已知杂质（结构见图1），但考虑企业在奥氮平片合成的实际工艺过程中[5]，可能同时引入起始物：4-氨基-2-甲基-10H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮杂盐酸盐。笔者拟采用美国药典方法对三种已知杂质进行控制，建立HPLC梯度洗脱方法，测定奥氮平片中有关物质。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，LC-Solution色谱工作站。

1.2 试样

奥氮平对照品（100948-200801，中国药品生物制品检定所）；奥氮平（110302，江苏某某制药）；奥氮平起始物（20110102，台州市某某化工）；杂质A（20110201，台州市某某化工）；杂质B：110315，自制；乙腈，色谱纯，购自×××COMPANY INC，双蒸水，自制，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用C8色谱柱；以缓冲液（称取十二烷基硫酸钠13g至1500mL水中使溶解，加磷酸5mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调pH至2.5）-乙腈（52∶48）为流动相A，以缓冲液-乙腈（30∶70）为流动相B，按表1程序进行梯度洗脱；检测波长为220nm；柱温：35℃，流速为每分钟1.5mL。

2.2 溶液的制备

溶剂∶乙二胺四乙酸二钠缓冲液（称取乙二胺四乙酸二钠55mg溶解于1500mL缓冲液中）-乙腈（60∶40）。

供试品：取本品适量，精密称定，加溶剂稀释制成每1mL约含400μg的溶液。

对照品溶液：取奥氮平对照品适量，加溶剂稀释制成每1mL约含2μg的溶液。

2.3 系统适用性

取奥氮平、杂质A、杂质B及起始物各适量，以溶剂溶解并稀释制成每1mL中含奥氮平20μg，杂质A、杂质B及起始物各2μg的溶液，作为系统适用性溶液。精密量取系统适用性溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。

此方法下系统适用性溶液中奥氮平及各杂质分离良好，各杂质峰峰面积的相对标准差均小于2.0%，保留时间的相对标准差均小于1.0%；理论塔板数按奥氮平峰计算均大于3000，各杂质峰的拖尾因子均小于1.5，奥氮平与杂质A的分离度均大于3.0；该色谱系统适用性良好。

2.4 专属性

取奥氮平样品100mg，置25mL量瓶中，加溶剂定容至刻度，摇匀作为专属性实验储备液。未破坏样品：取奥氮平储备液1mL置10mL容量瓶中加溶剂稀释定容；光照样品：取储备液1ml于10mL容量瓶中，加溶剂定容至刻度于光照强度为4500Lx±500Lx条件下放置10d后，加溶剂定容至刻度；高温样品：取储备液1mL置于10mL量瓶中，于60℃高温条件下放置于10d后，加溶剂定容至刻度；酸破坏样品：取储备液1mL置于10mL量瓶中，加1mol/L盐酸溶液1mL，摇匀，于80℃水浴中放置3h后，加1mol/L氢氧化钠溶液调pH至中性，加溶剂定容至刻度；碱破坏样品：取储备液1mL置10mL量瓶中，加1moL/L氢氧化钠溶液1mL，摇匀，于80℃水浴中放置4h后，加1mol/L盐酸溶液调pH至中性，加溶剂定容至刻度；氧化破坏样品：取储备液1mL，置10mL量瓶中，加10%过氧化氢溶液1mL，摇匀，室温放置2h后，加溶剂定容至刻度。精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。破坏试验结果显示，在光照、高温、碱性条件下，样品稳定；在酸性、氧化条件下，主峰破坏较严重，但破坏产生的杂质与奥氮平及杂质A、杂质B能够完全分离；此方法专属性良好。

2.5 线性

精密称取奥氮平，起始物，杂质A和杂质B适量，配置成奥氮平浓度为3.0μg/mL起始物及杂质A浓度为3.0μg/mL，杂质B浓度为3.0μg/mL的儲备液，逐级稀释精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析（结果见表2）。

2.6 溶液稳定性实验

将供试品溶液在进样盘室温条件下放置，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h精密量供试品溶液20μL注入液相色谱仪，10h奥氮平、起始物、杂质A峰面积百分比的RSD值为均小于2.0%；杂质B峰面积百分比略有增长，但RSD值小于10.0%；一未知杂质随放置时间增长，有明显增长的趋势，说明溶液在室温下放置10h内不稳定，需现配现用。

2.7 精密度实验

取奥氮平对照品和供试品溶液20uL，注入液相色谱仪中，并同法配制5份测得4种混合物溶液的主峰及杂质峰峰面积的RSD均在0.79～0.99之间，满足系统适用性要求，表明该方法的精密度良好。

2.8 样品测定

取三批奥氮平20mg，精密称定，置50mL容量瓶中加溶剂稀释制成每1mL约含400μg的溶液，作为供试品溶液；另取奥氮平对照品适量，加溶剂稀释制成每1mL约含2μg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算各杂质的量及杂质总和（结果见表3）。试验结果表明：三批奥氮平有关物质结果均小于1.0%

参考文献

[1] 雷春艳，于彩霞，冀德才.奥氮平对精神分裂症患者生活质量的影响[J].中国实用医药，2014（26）：159-160.

[2] 王勇，陈祖金，杨勇.奥氮平治疗老年精神分裂症的效果及其安全性分析[J].中国健康心理学杂志，2017（10）：1465-1468.

[3] 陈光.奥氮平治疗老年精神分裂症80例临床分析[J].临床心身疾病杂志，2008，14（6）：519-521.

[4] 崔道平.奥氮平制备工艺及质量控制研究[D].大连理工大学，2011.