青柏溃结汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜SOD及MDA影响的研究*

张 林 张 伟 解岚岚 张锋利 史 英 吴洁琼

（1.陕西中医药大学，陕西 咸阳 712000；2.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳712000）

溃疡性结肠炎（UC）是一种病因尚未明确的发生在结肠、直肠的慢性非特异性疾病，目前大多学者认为UC的炎症反应与氧自由基密切关系，UC炎症反应的重要因素很有可能是氧自由基。笔者所在医院院内中药方青柏溃结汤（原溃结Ⅰ号方）通过灌肠方式作用于UC患者取得了不错的疗效。本实验拟在造模成功的基础上，通过治疗UC大鼠检测各组结肠组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，观察青柏溃结汤治疗UC大鼠的治疗效果，并探讨其可能的机制，为进一步推广应用青柏溃结汤提供一定的实验基础。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠55只，体质量（200±20） g，生产许可证号：SCXK（陕） 2012-003。购于西安交通大学医学部实验动物中心。

1.2 实验药物 青柏溃结汤（药物组成：黄柏9 g，苦参 20 g，大青叶 12 g，板兰根 20 g，乌贼骨 25 g，炒薏苡仁30 g。所得水煎液每毫升含1 g生药，由陕西中医药大学第二附属医院药剂科熬制完成），康复新液（湖南科伦制药有限公司，批号：M160918），柳氮磺吡啶（上海信谊天平药业有限公司）。

1.3 试剂与仪器 水合氯醛（上海山浦化工有限公司产品），溶于0.9%氯化钠注射液配成10%的混合液；冰乙酸（天津市天力化学试剂有限公司产品），溶于0.9%氯化钠注射液配成8%的混合液；MDA试剂盒（北京邦定生物公司产品）；SOD试剂盒（南京聚力生物医学工程研究所产品）。UV-1601分光光度仪（日本岛津公司产品）。

1.4 模型制备 大鼠禁食不禁水24 h后用10%水合氯醛根据3 mL/kg腹腔注射麻醉，8%乙酸1 mL注入距肛门7 cm的结肠腔，灌注30 s，随后用0.9%氯化钠注射液5mL冲洗1次，之后常规饲养。

1.5 分组与给药 将健康雄性SD大鼠适应性喂养1周后，按体质量随机分为5组，即空白组（等体积0.9%氯化钠注射液）、模型组（等体积0.9%氯化钠注射液）、青柏溃结汤组（1 mg/L）、柳氮磺吡啶组（0.5 g/kg）、康复新液组（5 mL/kg），除空白组以外，其余各组按上述方法制备UC模型，造模后第3日每组（除外空白组）随机取2只做病理学检查以确定造模成功，而后开始灌肠给药，每日1次，连续7 d。

1.6 标本采集与检测 1）病理学检查。取出距肛门2 cm以上8 cm处的结肠段，纵向剪开肠腔，预冷0.9%氯化钠注射液反复冲洗直至干净，取约0.5 cm病变严重处固定于4%甲醛中，行HE染色，显微镜下观察结肠组织；另取湿重约200mg结肠组织，制成10%的组织匀浆，4000 r/min离心10min，取上清液待检。2）结肠组织SOD与MDA检测。取上述已制备的上清液分别按照SOD与MDA试剂盒说明书检测。

1.7 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，采用单因素方差分析。P＜0.05时为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组一般情况 见图1。空白组大鼠食欲、精神可，大便成形，无便血及大便带血，毛发光泽，活动自如。模型组大鼠喜蜷缩，食欲、精神欠佳，可见肉眼血便，肛周不洁，毛发粗糙。各治疗组介于两组之间，以青柏溃结汤组情况最好，康复新液组最差，柳氮磺吡啶组居中。

图1 两组一般情况

2.2 病理观察结果 见图2。空白组肠黏膜完整，腺体排列齐整，无明显炎性细胞浸润；模型组肠黏膜不完整，腺体缺如或者排列不齐，溃疡形成，局部水肿及充血甚至坏死、脱落，炎性细胞浸润明显；各治疗组介于上述两组之间，以青柏溃结汤组效果最好，康复新液组不明显，柳氮磺吡啶组居中，可见愈合迹象，以青柏溃结汤组愈合最好，康复新液组不明显，柳氮磺吡啶组居中。

图2 各组大鼠治疗后结肠病理学结果（HE染色）

2.3 各组大鼠结肠组织中SOD、MDA含量比较 见表1。与空白组比较，模型组SOD含量下降（P＜0.01），MDA含量上升（P＜0.01）；与柳氮磺吡啶组比较，青柏溃结汤组MDA含量含量下降（P＜0.01）；与康复新液组比较，SOD 含量上升（P＜0.05），MDA 含量下降（P＜0.05）。

表1 各组大鼠治疗后结肠黏膜SOD、MDA含量比较（±s）

表1 各组大鼠治疗后结肠黏膜SOD、MDA含量比较（±s）

与空白组比较，▽P＜0.05，▽▽P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与柳氮磺吡啶组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与康复新液组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

组 别 n SOD（U/g） MDA（nmol/g）空白组 11 98.13±30.50 6.27±4.59模型组 9 66.38±13.94▽▽△△ 42.24±5.15▽▽青柏溃结汤组 9 96.09±22.25**## 10.88±1.10**△△##柳氮磺吡啶组 9 96.73±27.41*# 26.73±4.79**康复新液组 9 70.41±18.30▽△△ 40.79±6.92△△##

3 讨 论

用乙酸法诱导大鼠UC，是研究UC致炎机理的常用模型之一，其机制与激活炎症介质（激肽等）、增强血管通透性有关，近年来关于UC发病机理，氧自由基已成为重要课题，氧自由基（OFR）主要包括羟自由基（OH-）和超氧阴离子自由基（O2-）等，是一类含有不配对电子的含氧基团，具有促进水肿和炎性渗出等作用，但是其对作用的靶细胞不具有选择特异性，因此氧自由基也能导致细胞和组织的损伤。为了防止其损伤细胞和组织，体内存在着一整套完善的可清除氧自由基的防御系统，如超氧化物歧化酶（SOD）等。

Simmonds等发现UC（活动期）肠黏膜中有大量OFR［1]。由于OFR在临床上直接测定十分困难，目前多采用检测呼气乙烷的浓度及MDA来间接反映UC肠黏膜OFR的水平。研究显示，机体清除氧自由基能力的下降同时也是导致溃疡形成和自身组织损伤的重要因素，氧自由基水平升高，会加强激活炎症介质，从而促进炎症反应［2]。

SOD是广泛存在于生物体内且重要的抗氧化酶，能有效清除氧自由基，能抑制结肠组织中的脂质过氧化反应，SOD含量的高低可间接反应机体清除氧自由基的能力，张丽华等发现模型组大鼠SOD活性明显低于空白对照组［3]，目前SOD已被证明是治疗UC的有效药物之一［4]。MDA可由脂质过氧化物分解产生等，可进一步加重机体组织损害［5]。测定组织MDA的含量，可反映组织生物膜脂质过氧化的程度和氧自由基的生成量［6]。MDA是氧自由基是脂质过氧化反应的产物［7]，MDA水平、氧自由基水平与机体组织损伤正相关。有研究表明在排除其他器官病变的情况下［8]，健康对照组血清MDA水平明显低于UC患者。

临床上治疗UC一般予以西药对症治疗，病情容易反复，且不良反应多［9]，中药在其治疗上既避免了西药的不足，又有较好疗效，近年来，自拟方治疗UC显现出不错的疗效，何继刚等用自拟中药方灌肠治疗本病，有效率91.67%［10]；秦书香等用青热涩肠、活血生肌中药灌肠治疗本病可降低复发率［11]；李琪等采用灌肠方灌肠治愈率为95.83%［12]。UC是一种主要表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便伴或者不伴有里急后重的一种慢性非特异性疾病［13]，中医认为湿热蕴肠、气滞络瘀是基本病机［14]。本院自拟青柏溃结汤（原名溃结Ⅰ号方）灌肠治疗UC患者临床效果确切，组方中的大青叶、板蓝根清除疫毒之邪；黄柏、苦参清除内蕴脏腑湿热；炒薏苡仁清除肠道腐败脓血；乌贼骨制酸止痛止血［15]。

通过本研究结果可看出，UC大鼠与空白组比较，结肠黏膜中的SOD含量下降、MDA含量上升，SOD含量降低说明机体清除氧自由基的能力下降，MDA含量升高说明自由基产生增加或有氧代谢增强，表明在UC发病时氧化代谢存在着失衡。各治疗组经过对应药物治疗后，SOD含量上升，MDA含量降低，说明已恢复清除能力，同时说明UC局部炎症反应和异常的氧自由基代谢密切相关，提示青柏溃结汤治疗UC很有可能是通过调节氧自由基水平来实现的。

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