婴幼儿毛细支气管炎中人博卡病毒感染及其临床特征分析

梁譞 张蓉芳 谢志萍 高寒春 段招军 刘东海

730050 兰州，甘肃省妇幼保健院儿童哮喘中心(梁譞、张蓉芳、刘东海)；730000 兰州，甘肃中医药大学(梁譞，刘东海)；100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所(谢志萍、高寒春、段招军)

毛细支气管炎(简称毛支)是婴幼儿常见的下呼吸道感染性疾病，最常见的病因是病毒感染，呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是最常见的病原体[1]。人类博卡病毒(human bocavirus, HBoV)作为儿童呼吸道感染的重要病原与呼吸道感染相关性得到关注[2,3]。本研究应用巢式聚合酶链反应(nested-polymerase chain reaction，Nested-PCR) 和反转录-聚合酶链反应技术(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)对毛支患儿的鼻咽抽吸物进行检测HBoV、RSV及其他常见呼吸道病毒，了解HBoV在毛支中感染状况，并比较单一HBoV感染与单一RSV感染患儿的临床特征。

1 资料与方法

1.1一般资料选取甘肃省妇幼保健院儿童哮喘中心院2015年01月至2016年12月收治的396例毛支患儿，诊断均符合《诸福棠实用儿科学》毛支诊断标准[4],患儿自发病至纳入研究的时间均在3 d以内，其中男性215例,女性181例，平均年龄(8.35±1.71)月。排除标准：近1个月内有呼吸道感染史；存在先心病、先天性喉软骨发育不全、肺部畸形、中枢神经系统疾病等疾病者；存在家族哮喘史、近期接受免疫抑制剂等治疗者；中途放弃治疗或临床资料不完整者。本研究经甘肃省妇幼保健院伦理委员会批准，所有入选患儿家长均签署治疗知情同意书。

1.2标本采集采用无菌负压法抽取纳入患儿入院24 h内鼻咽抽吸物2～4 ml，分为2份，并于采样管上标注患儿信息，其中1份加入病2毒保存液后冷冻保存并尽快运送至中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，进行标本HBoV、RSV及其他6种常见呼吸道病毒的核酸检测；另1份标本于本院行细菌培养及真菌培养，同时采集对应患儿静脉血2 ml，采用酶联免疫吸附试验方法对肺炎支原体和肺炎衣原体进行特异性抗体检测。详细记录HBoV、RSV感染阳性患儿的相关临床资料。

1.3病毒检测采用Nested-PCR和RT-PCR方法检测HBoV、RSV、腺病毒(adenovirus,ADV)、流感病毒A、B型 (influenza virus A B,Flu A B)、副流感病毒1、2、3型(parainfluenza virus I～III,PIVⅠ～Ⅲ)。核酸提取使用 QIAamp病毒核酸小量提取试剂盒(Qiagen 公司)按试剂盒说明书进行。采用巢式PCR方法扩增HBoV NS1片段，第一轮引物F0∶5′-AGGTAAAACAAATATTGCAAAGGCCATAGTC-3′，R0∶5′-TGGGAGTTCTCTCCGTCCGTATC-3′，扩增片段长度732 bp；第二轮引物F1∶5′-AGGGTTTGTCTTTAACGATTGCAGACAAC-3′,R1∶5′-TATACACAGAGTCGTCAGCACTATGA-3′,扩增片段长度518 bp。反应条件为：95 ℃，5 min预变性，98 ℃ 10 s,52 ℃ 10 s，72 ℃ 1 min，扩增40个循环，最后72 ℃延伸7 min。所有第二轮扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳纯化回收后，阳性产物送北京天一辉远公司测序。其他6种常见呼吸道病毒检测所需引物序列见参考文献[5]。

2 结果

2.1呼吸道病毒检出率396例标本中病毒检测阳性者212例，阳性检出率53.54%，其中HBoV 39例(9.84%)、RSV 97例(24.49%)、PIV 34例(8.59%)、ADV21例(5.30%)、Flu 31例(7.83%)。排除常见细菌、真菌、MP、CP感染，单一HBoV感染29例，混合其他病毒感染10例 (25.64%)，混合感染的病毒为RSV 5例、PIV 3 例、ADV 2 例；单一RSV感染86例, 混合其他病毒感染11例 (11.34%)，混合感染的病毒为 HBoV 5例、 PIV 4例、ADV 1例、Flu 1例；HBoV比 RSV更易混合其他呼吸道病毒感染 (χ2=4.357，P=0.037)，以混合RSV感染多见。

2.2流行病学特点39例HBoV感染患儿中男性27例，检出率12.56%(27/215)，女性12例，检出率6.63%(12/ 181)，男性高于女性，差异有统计学意义(χ2=3.890,P=0.049)。97例RSV感染患儿中男性56例，检出率26.05%(56/215)，女性41例，检出率22.65%(41/181)，差异无统计学意义(χ2=0.612,P=0 . 0868)。

39例 HBoV 感染患儿平均月龄(8.06±2. 47)月，6 ～12月龄阳性检出率最高，占71.79%(28/39)，各年龄段 HBoV阳性检出率差异有统计学意义(χ2=7.82,P=0.049)。97例RSV感染患儿平均月龄(6.95±2. 77)月，6～12月龄阳性检出率最高，占54.64%(53/97)，各年龄段RSV阳性检出率差异无统计学意义(χ2=1.502,P=0.682)。

HBoV全年均有检出，无明显季节性分布，检出最高峰在2015年11月7例(17.4%)。RSV检出集中于冬春季，高峰集中于2015年11月至2016年03月，6～8月是流行低谷期，检出最高峰在2016年2月19例(65.2%)。

2.3单一HBoV感染与单一RSV感染毛支患儿临床资料比较HBoV组更易出现呕吐、腹泻 (P<0.05)，但气促、呼吸困难、低氧血症(SPO2<90%)的发生率以及喘息时间、住院时间均低于RSV组(P<0.05)，采用改良的Tal评分法[6]评价HBoV单一感染组和RSV单一感染组毛支疾病严重程度，结果表明HBoV组中重度患儿比例低于RSV组(6.9% vs. 10.5%;P=0.012)。两组患者在各实验室检查指标方面差异均无统计学意义 (P>0.05)。与RSV感染相比，HBoV单一感染组胸片肺气肿影多见(P=0.046)。见表1。

3 讨论

HBoV自2005 年首次在下呼吸道感染的瑞典患儿鼻咽分泌物中分离出后[2]，世界各地相继证实HBoV的存在，并确定其为儿童呼吸道感染的重要病原体，检出率在小儿急性下呼吸道感染中约2.7%～26.2 %，是诱发婴幼儿喘息最常见病因之一，HBoV致病机制尚未完全阐明。本研究在对常见呼吸道病毒的检测中，RSV检出率最高(24.49%)，其次为HBoV(9.84%)，与国内外研究相近[7-8]，表明HBoV在毛支患儿呼吸道分泌物中检出率较高，提示HBoV可能是除RSV外引起毛支又一重要病毒。

表1 单一HBoV与单一RSV 感染毛支患儿临床特征及病情严重程度比较

Tab.1Comparison of clinical characteristics of single HBoV and RSV infection in children with bronchiolitis

注:*连续性校正

Note:*continuity correction

在本研究发现HBoV感染病例存在性别差异，男性高于女性(P<0.05)。研究表明，不同年龄段患儿均会出现HBoV感染，但以2岁以下婴幼儿居多。 本资料中6～ 12月龄阳性检出率最高，而6个月以下婴儿及2岁以上儿童感染相对较少，可能原因为6个月以下婴儿体内存在母源性抗体，2岁以上儿童逐渐因外界感染而使抗体滴度升高。关于HBoV感染的季节性国内外报道不一，在欧美 HBoV感染主要集中于冬春季[9]；日本研究结果显示72%感染主要发生在春季[10]；在我国，北京[11]报道HBoV检测高峰主要集中于8～11月；广州报道[12]检出高峰在5～6月。本研究显示HBoV全年均有检出，无明显季节性分布；RSV则与 HBoV不同，检出高峰集中于冬春季，与国内外报道流行季节基本一致。两者流行季节的不同结果可能与地理差异、气候特点、标本采集量及检测方法、病毒亚型等方面有关。

HBoV阳性呼吸道标本中常有其他呼吸道病毒共同检出[13]，在本次研究中，HBoV、RSV混合感染率分别为25.64%、11.34%，表明两者均易发生混合感染，而HBoV较RSV更易混合其他呼吸道病毒感染(P<0.05)。HBoV的高混合感染原因可能 HBoV感染引起呼吸道局部免疫功能失调后促进了其他呼吸道病毒的侵入，另一方面也与共同感染病原体的高感染率有关。

本研究发现单一HBoV与单一RSV 感染毛支患儿具有相似性的主要临床表现, 比较发现HBoV感染患儿气促、呼吸困难、低氧血症(SPO2<90%)的临床症状发生率均低于RSV组(P<0.05)，喘息持续时间、住院治疗时间亦均短于RSV组(P<0.05)，两组患儿影像学改变比较中，HBoV感染患儿胸片肺部过度充气征相对多见(P<0.05)，以上提示 HBoV毛细支气管炎病情可能较 RSV 轻。HBoV DNA在腹泻患儿粪便标本中的检出率为0.8%～9.1%，但其与轮状病毒等引起婴幼儿腹泻的常见病原体共感率达21%～100%。Cheng等[14]提出HBoV或许仅为一种伴随病毒，而不是消化道疾病的致病病原体。在我们的研究中，同样发现HBoV组毛细支气管炎患儿出现呕吐、腹泻较RSV组更多见(P<0.05)。

综上所述，HBoV可能是引起婴幼儿毛支的病毒病原之一，HBoV和RSV感染所致毛细支气管炎患儿具有相似的临床特征、实验室及影像学改变，HBoV感染患儿病情可能较RSV轻。阐明HBoV在毛细支气管炎病原学机制，对指导临床上相关的预防及治疗策略有重要意义,值得进一步深入研究。

利益冲突：无

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