凤仙花和马齿苋水提取物对常见皮肤癣菌的体外抑菌试验

张伊娜　刘英超

【摘要】 目的：观察凤仙花和马齿苋水提取液对红色毛癣菌、须癣毛癣菌两种皮肤癣菌的体外抑菌作用。方法：采用琼脂打孔法观察凤仙花和马齿苋水提取液抗真菌的药效，通过微量液体稀释法测定其对两种皮肤癣菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。结果：凤仙花和马齿苋水提取液对两种皮肤癣菌均有抑制作用，凤仙花水提取液对红色毛癣菌的MIC、MBC值分别为31.25、62.5 mg/ml，对须癣毛癣菌的MIC、MBC值分别为62.5、125.0 mg/ml，马齿苋水提取液对红色毛癣菌的MIC、MBC值分别为62.5、62.5 mg/ml，对须癣毛癣菌的MIC、MBC值分别为62.5、125 mg/ml。

结论：凤仙花和马齿苋水提取液中含有抑皮肤癣菌活性成分。

【关键词】 凤仙花； 马齿苋； 水提取物； 皮肤癣菌； 抑菌试验

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.9.004 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2018）09-0008-02

Experiment of Antifungal Activities in Vitro in Water Extraction of Impatiens Balsamina L. and Portulacaoleracea L./ZHANG Yina，LIU Yingchao.//Chinese and Foreign Medical Research，2018，16（9）：8-9

【Abstract】 Objective：To observe the effects of Impatiens balsamina L. and Portulacaoleracea L. water extraction against Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes in vitro.Method：The agar hole diffusion test was used to observe the effects of the antifungal activitiesin water extraction of Impatiens balsamina L. and Portulacaoleracea L..The minimum inhibitory concentration （MIC） and minimum bactericidal concentration（MBC）were determined by the microdilution method.Result：The in vitro assay showed that both water extraction of Impatiens balsamina L. and Portulacaoleracea L. exhibited inhibitory effects on Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes.The MIC and MBC of Impatiens balsamina L. water extraction against Trichophyton rubrum were 31.25 mg/ml and 62.5 mg/ml，the MIC and MBC of Impatiens balsamina L. water extraction against Trichophyton mentagrophytes were 62.5 mg/ml and 125 mg/ml.The MIC and MBC of Portulacaoleracea L. water extraction against Trichophyton rubrum were 62.5 mg/ml and 62.5 mg/ml，the MIC and MBC of Portulacaoleracea L. water extraction against Trichophyton mentagrophytes were 62.5 mg/ml and 125 mg/ml.Conclusion：Impatiens balsamina L. and Portulacaoleracea L. water extraction contains antifungal ingredients against dermatophytes.

【Key words】 Impatiens balsamina L.； Portulacaoleracea L.； Water extraction； Dermatophytes； Antifungal experiment

First-authors address：Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，China

皮肤癣菌引起的浅部真菌感染是皮肤科最常见的皮肤病[1]，近年来临床常用的抗真菌藥物虽然发挥较大作用，但其肝肾毒性、耐药性等也有一些临床报道[2]。由于中草药具有副作用小、价格低廉、耐药性产生少等特点，使得人们对抗真菌中草药越来越重视。本试验主要研究凤仙花（Impatiens balsamina L.）和马齿苋（Portulacaoleracea L.）水提取物对浅部真菌感染中较常见的皮肤癣菌的抑菌效果，以评价凤仙花和马齿苋水提取物抗真菌的药效。

1 材料与方法

1.1 一般材料

1.1.1 试验菌株 红色毛癣菌（Trichophyton rubrum，ATCC28188）

1株、须癣毛癣菌（T. m entagrophytes，ATCC9533）1株，均由上海瑞楚生物科技有限公司菌种保藏中心提供。

1.1.2 试验药品 凤仙花、马齿苋购自浙江中医药大学门诊部。凤仙花和马齿苋水提取物的制备：称取干燥的凤仙花和马齿苋分别粉碎成粗粉，各取粗粉100 g，加入适量蒸馏水浸泡0.5 h，然后加热至沸腾，继续煮沸1 h后过滤。取药渣再加入适量蒸馏水，同样加热至沸腾，煮沸1 h后过滤，合并两次滤液，用文火加热浓缩，药液浓度均为1 g/ml，作为储备药液。测定MIC和MBC值前将凤仙花和马齿苋儲备药液用无菌的蒸馏水溶解，并稀释成10个浓度梯度，2种中药水提取物的最终浓度均分别为1 000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、3.906、1.953 mg/ml。

1.1.3 培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）：取蛋白胨10 g、葡萄糖40 g、氯霉素0.2 g、琼脂20 g，加蒸馏水1 000 ml，加热溶解后，分装，经121 ℃灭菌15 min，备用（若是沙氏液体培养基则不加琼脂）[3]。

1.2 方法

1.2.1 活化菌株 真菌用SDA培养，温度为28 ℃，活化2次。

1.2.2 制作菌悬液 挑取约芝麻粒大小的菌落，溶于1 ml经灭菌的蒸馏水后充分混合均匀，调节菌悬液的浊度为（0.5～1）麦氏浊度，相当于5×106～10×106 CFU/ml[4]。

1.2.3 琼脂打孔法 用直径9 cm培养皿，加入熔化培养液20 ml，制作成SDA平板，用无菌的玻璃涂布棒将各菌悬液100 μl均匀涂布于各培养基平板表面，盖好培养皿后在室温条件下放置于超净工作台。每株菌3个培养皿。待平板表面稍干，用直径7 mm的打孔器在涂菌后的培养基上各打孔2个，将孔内琼脂挑去后分别用微量取样器吸取浓度为1 g/ml的凤仙花、马齿苋水提取液加入孔内，药液与孔的边缘平齐并充分接触，勿使药液沾染孔外的琼脂平面[5]。每种水提取液3个培养皿，一共6个培养皿，置于28 ℃中培养，7 d后观察并测量各孔周围抑菌圈大小，记录其直径，每孔的抑菌圈直径取其最大径和最小径的均数。

1.2.4 最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）测定 参照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）提出的对丝状真菌的药物敏感方案[6]，采用微量液体稀释法测定2种药液对不同菌株的MIC值；采用SDA平板涂布法测定2种药液对不同菌株的MBC值[7]。取无菌96孔平底微量培养板，于每排第1～12孔加入100 μl沙氏液体培养液，再于每排第1～10孔分别加入倍比稀释的药液（100 μl/孔），然后于每排第1～11孔加入上述菌悬液100 μl，其中每排第11孔只加培养液100 μl和菌悬液100 μl作为阳性对照，第12孔只加培养液100 μl和药液100 μl作为阴性对照，然后将培养板振荡5 min，使液体充分混匀，置于28 ℃中培养，7 d后观察结果，并测定其MIC值。确定MIC值后，在上述药敏板所有清晰无菌生长的孔中用涂布棒蘸取药液，涂布于SDA平板，经28 ℃培养7 d，以平板上菌落数不超过5个的最低药物浓度作为该药物对该菌株的MBC值。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

凤仙花和马齿苋水提取液对两种皮肤癣菌的抑菌圈直径大小、MIC和MBC测定结果可知凤仙花和马齿苋水提取液对红色毛癣菌和须癣毛癣菌均有较强的抑制作用。比较两种皮肤癣菌抑菌圈直径大小，发现无论是凤仙花水提取液还是马齿苋水提取液，差异均无统计学意义（P>0.05）；且凤仙花和马齿苋水提取液对同一种皮肤癣菌的抑菌圈直径的比较差异均无统计学意义（P>0.05）。凤仙花水提取液对红色毛癣菌的MIC和MBC分别为31.25 mg/ml和62.5 mg/ml，对须癣毛癣菌的MIC和MBC分别为62.5 mg/ml和125 mg/ml；马齿苋水提取液对红色毛癣菌的MIC和MBC分别为62.5 mg/ml和62.5 mg/ml，对须癣毛癣菌的MIC和MBC分别为62.5 mg/ml和125 mg/ml，见表1。

3 讨论

凤仙花为凤仙花科凤仙花属一年生草本植物，性温味甘，具有祛风除湿、活血止痛、解毒等功效，常用于治疗关节风湿痛、腰痛、妇女闭经腹痛、产后瘀血未尽、跌打损伤、白带、灰指甲等。马齿苋为马齿苋科马齿苋属一年生草本植物，性寒味酸，具有清热解毒、凉血止血之功效，常用于治疗热痢脓血、带下色黄、湿疹、丹毒等[8-9]。近年来国内对凤仙花和马齿苋的研究主要集中在其化学成分及药理活性方面，而有关其抗皮肤癣菌作用的报道较少。本研究选取了浅部真菌感染中较常见的红色毛癣菌和须癣毛癣菌，来探究凤仙花、马齿苋水提物对这两种皮肤癣菌的抑制作用，为将其开发为临床制剂提供试验依据。从试验结果来看，凤仙花和马齿苋水提取液对红色毛癣菌和须癣毛癣菌均具有较强的抑制作用，抑菌作用随浓度增高而增强。研究表明，凤仙花和马齿苋均含有丰富的化学成分，如凤仙花含有黄酮类、萘醌类、香豆素类及甾醇类等成分[10]，马齿苋含有萜类、生物碱类、多糖类、香豆素类、有机酸类、黄酮类、甾体类等成分[11]，这两种中草药的抗真菌作用可能与其某一或多种化学成分有关，但有关具体的抑菌成分，还需要进一步研究。

参考文献

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（收稿日期：2017-10-23）