Gli1在乳腺癌侵袭转移过程中的作用及与病理特征的关系

孟尚文，郑建云

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，近年其发病率呈上升趋势，严重影响女性健康。上皮细胞间质细胞转化与乳腺癌侵袭转移密切相关[1]，而异常增殖激活的Hedgehog-Gli信号通路对于上皮细胞间质细胞转化非常重要，能够导致肿瘤的发生、发展。该通路由配体蛋白、跨膜蛋白、下游转录因子Gli组成[2]。脊椎动物存在3种Gli，其中Gli1是一种活性很强的转录激活因子，其表达能够直接反映通路的活性状态[3]。本研究旨在探讨Gli1在乳腺癌侵袭转移过程中的作用及病理学意义，为研究乳腺癌提供依据。

1 资料与方法

1.1 病例资料 西安医学院第一附属医院2010年1月～2016年1月采取根治性腋窝淋巴结切除术的女性乳腺癌患者共566例，随机选取其中191例的病例资料进行回顾性分析，年龄25～75（55.3±6.5）岁。均完整实施肿瘤切除和腋窝淋巴结清扫，术后切除的淋巴结组织标本送病理学检查。

1.2 Gli1蛋白免疫组织化学染色 送检病理标本通过固定-包埋-切片-脱蜡-水化-修复-阻酶-封闭-富裕-显色-复染-脱水-透明-封片等步骤，进行Gli1蛋白免疫组织化学染色。免疫组织化学染色结果通过双盲评分法进行评分。在高倍视野（×400）下，随机选取5个视野，分别统计阳性染色细胞所占百分比和着色强度。着色强度评分标准：由浅至深无色、浅黄色、黄色、棕黄色分别记 0、1、2、3 分；阳性染色细胞所占百分比评分标准：由少到多0、0%～10%、11%～50%、51%～80%、＞80%分别记 0、1、2、3、4分。总分=着色强度评分×百分比评分。总分＜6分为Gli1蛋白染色阴性，≥6分为阳性。

1.3 方法 统计Gli1蛋白免疫组化染色结果，分析肿瘤病理特征与Gli1表达的关系，以及淋巴结跳跃式转移与病理特征的相关性。

1.4 统计学方法 应用SAS 9.0软件分析数据，计量资料以±s表示，采用t检验；计数资料用例和百分率表示，采用χ2检验；采用Logistic回归分析进行多因素分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Gli1蛋白免疫组化染色结果 191例中，淋巴结组织中Gli1阳性表达率为21.47%（41/191）。阳性染色呈棕黄色颗粒，染色部位位于细胞核、细胞质。

2.2 Gli1阳性表达与病理特征的关系 Gli1阳性表达与患者年龄、是否绝经、原发肿瘤分期、肿瘤位置、区域淋巴结分期、淋巴结转移、TNM分期、分子分型等无关，但Gli1表达阳性组的ER、BRCA1、E-cadherin蛋白表达阳性率均显著低于Gli1阴性组（P ＜ 0.01）。 见表 1。

2.3 淋巴结跳跃式转移与病理特征的相关性 肿瘤大小、区域淋巴结分期、TNM分期、Gli1表达、乳腺癌分子分型均与淋巴结转移方式有一定相关性。跳跃式转移组肿瘤明显小于正常顺序转移组，区域淋巴结分期N0-1、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者比率明显高于正常顺序转移组，Gli1表达阳性比率明显高于正常顺序转移组，乳腺癌分子分型Luminal A型比率均明显低于正常顺序转移组（P＜0.05～P＜0.01）。见表2。

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多因素Logistic回归分析结果显示，Gli1阳性表达（OR=20.122，95%CI=4.712，P ＜ 0.01）及区域淋巴结分期（OR=0.312，95%CI=0.148，P ＜ 0.05）是影响乳腺癌腋窝淋巴结跳跃式转移的独立危险因素。

3 讨论

乳腺癌侵袭转移与上皮细胞间质细胞转化（EMT）密切相关，E-cadherin表达下调是EMT最重要的标志[4]。本研究发现，乳腺癌组织中Gli1的表达与E-cadherin有明显相关性，Gli1表达阳性组 E-cadherin蛋白表达阳性率明显低于Gli1阴性组。提示Gli1表达阳性可导致E-cadherin的表达下调，这可能是Gli1导致乳腺癌侵袭转移能力得到增强的一个重要机制。本研究发现，Gli1表达阳性组ER蛋白阳性表达率明显低于Gli1阴性组，提示Gli1的高表达与ER阴性表达密切相关，这可能也是Gli1调控乳腺癌侵袭转移的一个重要机制，与Boelens等[5]的研究结果一致。本研究还发现，Gli1表达阳性组BRCA1蛋白（抑癌基因）表达阳性率明显低于Gli1阴性组，进一步证实了Gli1促进乳腺癌发生的病理生理作用。

乳腺癌腋窝淋巴结跳跃式转移现象的原因目前尚不完全清楚，本研究结果显示，肿瘤大小、区域淋巴结分期、TNM分期、Gli1表达、乳腺癌分子分型均与淋巴结转移方式有一定相关性。多因素分析结果显示，区域淋巴结分期和Gli1的阳性表达是影响乳腺癌腋窝淋巴结跳跃式转移的独立危险因素。这将为临床评估乳腺癌患者腋窝淋巴结状态提供新的检测目标。

综上所述，Gli1表达阳性可增强乳腺癌细胞侵袭转移能力，且Gli1是影响乳腺癌腋窝淋巴结跳跃式转移的独立危险因素。因此，Gli1可能作为预测腋窝淋巴结转移的指标，为降低乳腺癌患者淋巴转移提供治疗靶点。