升降散对脓毒症大鼠凝血功能的影响*

沙媛媛 赵 雷 钱风华 钱义明

上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 上海 200437

升降散由僵蚕、蝉蜕、姜黄、大黄组成，前期研究中我们已经发现升降散对炎症介质有调控作用[1,2]，随着对脓毒症的认识逐渐深入，由炎症介质引发的弥散性血管内凝血(DIC)被认为是主要致死因素，因此预防DIC的发生成为新的研究重点，但目前没有关于升降散对脓毒症凝血功能影响的实验研究，本实验通过观察升降散对脓毒症大鼠凝血功能的影响，为升降散治疗脓毒症中的凝血功能障碍寻找证据。

1 材料与方法

1.1 实验动物：SPF级SD雄性大鼠30只，体质量（270±50）g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物合格证号SCXK(沪2013-0016)。

1.2 实验药物：升降散由僵蚕6g，蝉蜕、姜黄各3g，大黄12g组成，加水煎浓缩至每毫升含生药1g，由岳阳中西医结合医院中药制剂室提供。全自动血凝仪（贝克曼ACLTOP7000）。

1.3 模型制备：按照Rittirsch D方法行大鼠盲肠结扎穿孔术（cecal ligation puncture，CLP）制备大鼠脓毒症模型[3]。即大鼠适应性饲养2周后，造模前24h禁食，自由饮水；以1%戊巴比妥（每20g体质量0.1ml，皮下注射）腹腔麻醉大鼠后固定，剃除动物中下腹皮毛，常规消毒铺巾，于中下腹正中作1cm左右切口，打开腹腔，寻找到盲肠后游离盲肠根部，小心分离其远端与大肠的系膜。用4#线在距回盲瓣约0.5cm处结扎盲肠，避免结扎回肠及盲肠系膜血管，在结扎远端用12号针头反复贯穿盲肠2次并略加挤压，见少量粪便溢出后将盲肠回纳腹腔，还纳盲肠并逐层缝合腹壁切口；术后于腹腔皮下注射生理盐水（每20g体质量1ml）以行液体复苏；术后注意保暖，禁食、水；造模后大鼠出现竖毛、精神萎靡、腹泻等表现。

1.4 分组与给药：取10只正常大鼠作为对照组，20只造模后大鼠随机分为脓毒症模型组(n=10)和升降散治疗组(n=10)。升降散治疗组小鼠于手术前72h开始灌胃（2次/d），根据文献换算实验大鼠和人临床用药剂量[3]，即每只每次11μl/g。对照组和模型组大鼠给予同等剂量0.9%NaCl溶液灌胃，灌胃3天。

1.5 检测方法：术后24h将大鼠脱脊椎处死，取腹主动脉血5ml，离心后取血清低温保存，采用全自动血凝仪检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血时间(TT)，D-二聚体（D-Di）水平。

1.6 统计学方法：采用SPSS20.0进行数据统计。计量资料以±s表示，比较采用t检验。P＜0.05表示差异存在统计学意义。

2 结果

与对照组比较，模型组和治疗组PT、APTT、TT水平均明显升高(P＜0.01)。治疗组APTT、TT均明显低于模型组(P＜0.01)。而各组间FIB和D-Di无明显差别。见表1。

3 讨论

随着对脓毒症研究的深入，除了早期的大量的炎症介质产生，人们逐渐意识到凝血功能障碍也是脓毒症死亡的独立危险因素[4]，炎症介质通过各种途径激活凝血和纤溶系统，引起凝血功能紊乱，进一步导致DIC的发生。DIC被认为是脓毒血症患者多器官功能衰竭的重要因素之一。因此有学者认为应该把抗凝作为脓毒症的常规治疗方案[5]。也相继推出了丝氨酸蛋白酶抑制剂和血栓调节蛋白等，但因为出血风险及疗效等问题都没有投入临床[6,7]。

表1 各组大鼠凝血功能水平比较（±s）

表1 各组大鼠凝血功能水平比较（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.01。

对照组模型组治疗组0.18±0.02 0.19±0.02 0.21±0.01 10 10 10 18.5±1.02 22.37±1.87*20.33±2.02*26.63±2.77 40.72±3.02*33.4±3.03*#27.98±2.66 37.54±3.62*33.62±3.22*#2.73±0.33 3.08±0.52 2.98±0.32

中医学界也一直在寻求更加有效的方法治疗脓毒症，但之前的研究更倾向于免疫方面，也取得了不错的效果[1,2,8]，其实中医对于脓毒症的认识从王金达的“三证三法”到刘清泉的“正虚邪实”血瘀证都是重要的环节，活血化瘀法也是重要的治疗方法之一。目前随着国际上对脓毒症合并凝血功能障碍的重视，中医学研究的重点也逐渐偏向于活血化瘀[9]。升降散[10]方中僵蚕辛苦，气薄轻浮而升，为阳中之阳，能祛风除湿、清热解郁、除痰散结；蝉蜕甘寒，开宣肺窍，祛风除湿，凉散风热，涤热解毒；姜黄辛苦温，行气散郁，祛邪辟疫；大黄苦寒，上下通行，抑制亢盛之阳。本方具有辛凉宣透、寒温并用、升清降浊、调畅气机、解毒透秽、活血化瘀的功效，目前主要适用于脓毒症初期。因为脓毒症的发病原因在于免疫失衡，因此前期的研究主要集中在升降散对免疫系统的影响。现代药理研究已经证明僵蚕、蝉蜕、姜黄、大黄均具有对凝血功能有调节作用[11-13]。而且运用一些活血化瘀的中药方剂在治疗脓毒症血瘀证时也取得了较好的效果[14]。所以我们有理由认为升降散会对凝血功能产生调节作用。

通过实验我们观察到升降散对于脓毒症凝血系统确实有一定的作用，主要表现在内源性凝血因子等方面，因为本次造模并没有局限在脓毒症的血瘀证，所以可以认为升降散可广泛作用于脓毒症的各种证型，而且本次实验造模时间较短，应该认为升降散还是作用于脓毒症早期，纤溶系统并没有启动，这也是本次各组间FIB、D-Di没有显著性差异的可能原因。

综上，本次实验发现升降散能改善脓毒症的凝血功能，为今后进一步研究升降散的治疗机理提供了新的方向。

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