支气管哮喘患儿血清中Eotaxin、IL-13的表达水平及临床意义

魏淑丽，黄雪玲

(1.厦门医学院临床医学系，福建 厦门 361023；2.厦门医学院附属厦门市第二医院儿科，福建 厦门 361021)

支气管哮喘是儿童时期最常见的慢性阻塞性疾病，近年来大量的动物实验和临床研究说明有许多细胞因子、炎症因子等与哮喘发病有关系。趋化因子在哮喘的病理变化过程中发挥着重要作用，其中认为Eotaxin、IL-13与哮喘的发作关系密切，但其确切机制和二者之间的关系还不清楚[1-3]。本研究旨在通过观察哮喘患儿血清中Eotaxin、IL-13变化，探讨其在哮喘疾病发作及演变过程中的作用及相互关系，从而为儿童哮喘的诊断、病情判定、治疗疗效的评价提供客观参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

哮喘组选择2015年11月至2017年3月间在厦门医学院附属医院儿科就诊且确诊为支气管哮喘患儿，24例均符合中华医学会儿科分会呼吸组于2008年修订的我国《儿童支气管哮喘诊断和防治指南》中5岁以上患儿典型支气管哮喘诊断标准：(1)反复发作喘息、咳嗽、气促、胸闷，多与接触变应原、冷空气、物理、化学性刺激、呼吸道感染以及运动等有关，常在夜间和(或)清晨发作或加剧。(2)发作时在双肺可闻及散在或弥漫性，以呼气相为主的哮鸣音，呼气相延长。(3)上述症状和体征经抗哮喘治疗有效或自行缓解。(4)除外其他疾病所引起的喘息、咳嗽、气促和胸闷。患儿均为特应性体质，无感染性、免疫性疾病史。其中男性13例，女性11例；城市17例，农村7例；年龄5～12岁，平均(7.82±2.78)岁，身高(131.42±2.18)cm，体质质量指数(BMI)均在正常范围。健康对照组为附属医院儿科门诊体检健康儿童30名，其中男性16名，女性14名；城市22名，农村8名；年龄5～13岁，平均(8.12±2.65)岁，身高(132.42±1.98)cm，体质质量指数(BMI)均在正常范围，无个人与家族过敏史，无感染性、免疫性疾病史，半年内无糖皮质激素应用史。两组儿童均为汉族且一般资料比较，均无统计学差异(P>0.05)。家长同意抽血化验，并签订知情同意书，两组儿童失访率均为0。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及保存 哮喘组于急性发作期、临床缓解期(临床症状消失、双肺听诊哮鸣音消失3～5 d)及健康对照组分别留取清晨空腹静脉血3 mL，注入密封采血管,室温放置60 min凝固后，3 000 r·min-1离心8 min取上层血清分别注入EP管，保存于-80 ℃冰箱待测，保存期间避免反复冻融。

1.2.2 研究方法 采用人定量酶联免疫吸附实验法(ELISA法)检测Eotaxin、IL-13,采用武汉优尔生科技股份有限公司试剂盒,标准品均设复孔，样品均设单孔，操作步骤严格按照试剂说明书的标准操作程序进行。仪器采用Stat-fax-2100酶标仪。IL-13测定范围:0～800 ng·L-1,灵敏度1.0 ng·L-1；Eotaxin测定值范围:0～240 ng·L-1,敏感度0.1 ng·L-1。实验结束后，在酶标仪中检测得出每个标本的OD值，使用CurveExpert汉化版1.4系统绘出七点图并算出每份标本的eotaxin浓度。标本采用同一批测定。

1.2.3 肺功能检查 哮喘组在急性发作期和临床缓解期行肺功能检测。采用RSFJ900型肺功能检测仪，精度为±3%。首先把受试者的年龄、身高、体重、性别参数输入肺功能检测仪得到该受试者的预计值。让受试者练习至熟练掌握其步骤,重复测3次，每次间隔5～10 min让患儿充分休息，取重复测定中最佳值用于分析。所得参数包括50%肺活量最大呼气流速(V50)、25%肺活量最大呼气流速(V25)、用力肺活量(FVC)；最大呼气流量(PEF)、一秒钟用力呼气量(FEV1)等。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 血清Eotaxin、IL-13水平比较

哮喘患儿组急性期与缓解期儿童血清中Eotaxin、IL-13水平组内比较，差异具有统计学意义(P<0.001)；哮喘患儿组急性期、缓解期儿童血清中Eotaxin、IL-13水平与健康组组间比较，差异具有统计学意义(P<0.001)。见表1。

表1 血清中Eotaxin、IL-13水平比较

2.2 哮喘组患儿急性期与缓解期肺功能的比较

哮喘患儿组肺功能测定包括：FEV1( L·min-1)、PEF/%、FEV1/FVC、V50%、V50( L· min-1)、V25%、V25( L· min-1)。急性期与缓解期儿童肺功能进行比较，差异具有统计学意义(P=0.001)。见表2。

表2 哮喘组急性期与缓解期儿童肺功能的比较(n=24)

2.3 哮喘患儿组血清Eotaxin、IL-13的相关关系

哮喘患儿组急性期儿童血清中Eotaxin、IL-13水平进行相关分析，差异具有统计学意义(r=0.698,P=0.001)；缓解期儿童血清中Eotaxin、IL-13水平进行相关分析，差异亦具有统计学意义(r=0.485,P=0.001)。见表3。

表3 哮喘患儿急性期、缓解期血清Eotaxin、IL-13的相关关系

2.4 哮喘患儿组急性期血清Eotaxin、IL-13水平与FEV1及PEF的关系

急性期儿童血清中Eotaxin、IL-13水平与一秒钟用力呼气量(FEV1)进行相关分析，二者与FEV1均呈负相关，相关性具有统计学意义(P<0.05)；急性期儿童血清中Eotaxin、IL-13水平分别与呼气高峰流量(PEF)进行相关分析，二者与PEF均呈负相关，相关性具有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4哮喘组急性期患儿血清Eotaxin、IL-13水平与FEV1及PEF的关系

项目FEV1r值P值PEFr值P值Eotaxin-0.6720.001-0.4080.004IL-13-0.7190.001-0.7060.001

2.5 哮喘患儿组缓解期血清Eotaxin、IL-13水平与FEV1及PEF的关系

缓解期儿童血清中Eotaxin、IL-13与一秒钟用力呼气量(FEV1)进行相关分析，二者与FEV1均呈负相关，相关性具有统计学意义(P<0.05)；缓解期儿童血清中IL-13水平与呼气高峰流量(PEF)进行相关分析，二者呈负相关，相关性具有统计学意义(P<0.05)；缓解期儿童血清中Eotaxin水平与呼气高峰流量(PEF)进行相关分析，二者呈负相关，但P=0.138，相关性不具有统计学意义。见表5。

表5哮喘组缓解期患儿血清Eotaxin、IL-13水平与FEV1及PEF的关系

项目FEV1r值P值PEFr值P值Eotaxin-0.5010.001-0.2040.138IL-13-0.4120.017-0.4020.021

3 讨论

3.1 Eotaxin与儿童支气管哮喘

Eotaxin最早于致敏豚鼠的支气管肺泡灌洗液中分离获得[4]，目前发现Eotaxin家族有Eotaxin-1、Eotaxin-2、Eotaxin-3，虽然它们结构不同，但功能相似，都对嗜酸性粒细胞具有趋化作用。在肺组织中Eotaxin主要来源于支气管的上皮细胞、肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞。刘新等[5]在动物实验中发现气道炎症时，肺Eotaxin基因的表达水平明显增高，证实Eotaxin在气道炎症中对炎症细胞的聚集、活化起重要作用。Lamkhioued等[6]在临床研究进一步证实Eotaxin与支气管哮喘发病密切相关。Eotaxin与受体CCR3结合，通过对嗜酸性粒细胞强大的选择性激活作用在支气管哮喘的发病过程中起着重要作用[7]。本研究结果显示哮喘急性发作时Eotaxin比缓解期、健康组儿童血清的含量明显增高，差异有统计学意义，进一步证实Eotaxin对嗜酸性粒细胞的趋化作用在哮喘发作过程中的重要地位。以后可以从抑制或阻断Eotaxin对嗜酸性粒细胞趋化作用环节作为新的突破口来研究防治儿童支气管哮喘。

3.2 IL-13与哮喘

IL-13是由活化的TH2细胞释放的多效能的细胞因子，通过激活嗜酸性粒细胞，促进IGE的分泌，诱导气道的高反应性的形成，维持哮喘患者气道的炎症。本研究结果显示哮喘组患儿急性发作期血清中IL-13水平显著高于缓解期以及健康对照组的儿童,差异有统计学意义。哮喘急性发作期患儿血清中IL-13明显升高,随着病情缓解,IL-13表达水平逐渐减少。提示IL-13参与哮喘发病,哮喘患者缓解期呼吸道炎症仍持续存在，L-13表达水平可用于监测哮喘的发病及疗效。有研究报道，IL-13在支气管哮喘气道炎症和气管重塑过程中均起到重要作用，通过降低或抑制IL-13生成对控制儿童哮喘发作和恢复患儿肺功能还有待进一步研究。

3.3 支气管哮喘患儿血清中Eotaxin、IL-13与肺功能的相互关系

支气管哮喘是一种以气道变应性炎症(AAI)和气道的高反应性(BHR)为特征的变态反应性疾病，是一种病因复杂的具有家族聚集倾向的多基因遗传病，多种细胞因子和炎症细胞、炎症因子等参与哮喘的调节。世界上许多国家都对哮喘的治疗做了大量的研究，但儿童哮喘的发病率跟死亡率反而有上升趋势(尤其是儿童)，所以哮喘的防治仍任重道远[8]。支气管哮喘防治的疗效可以体现在患儿的肺功能的检测上。本研究结果提示，哮喘组患儿急性发作期及缓解期血清中Eotaxin及IL-13水平与肺功能(FEVI、PEF)值之间均呈负相关，哮喘患儿肺功能的改善同时伴随血清Eotaxin及IL-13水平的降低，与国外学者报道一致[9]。本研究提示Eotaxin及IL-13的水平在哮喘患儿可以反映肺功能的变化，可以作为评判哮喘病情严重程度的一项客观指标，对哮喘的诊断及肺功能的评估有重要意义。

3.4 支气管哮喘患儿血清中Eotaxin、IL-13的相互关系。

本研究哮喘患者血清中Eotaxin与IL-13水平明显高于健康对照组,哮喘患者急性期及缓解期血清中Eotaxin与IL-13水平均呈显著正相关(P<0.05)，表明Eotaxin与IL-13在哮喘发病过程中起重要的作用。支气管哮喘的发病机理复杂，对其发病过程中的病理变化仍缺乏全面认知，细胞因子方面研究发现，“因子网络失衡”在哮喘发病过程中可能起到重要作用[10]，本研究中哮喘患儿血清IL-13、Eotaxin在急性期及缓解期均呈正相关。由此可见，IL-13与Eotaxin在哮喘发病过程中相互影响,共同参与哮喘的病理生理改变。具体的相互影响的方式和途径还有待进一步研究。

以往在临床实践工作中，哮喘的诊断相对更重视临床症状、肺部体征的价值，但临床症状与体征是病理生理改变的外现形式，仅仅依靠症状、体征去防治哮喘，在疾病演变过程中有种“后知后觉”的滞后感，动态观察血清Eotaxin、IL-13水平，对于哮喘诊断和病情评估以及治疗疗效的评定有指导意义，为通过阻断IL-13、Eotaxin产生途径、治疗哮喘的新思路提供理论依据。

参考文献

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