马桑水提取物对大鼠深Ⅱ度烧伤创面微循环和氧化应激的影响*

胡泽华，余昭芬，黄 谨，陈薛妃，黄德斌

（湖北民族学院医学院，恩施445000）

深Ⅱ度烧伤是伤及皮肤真皮深层而临界Ⅲ度的烧伤，创面残留的真皮、毛囊、汗腺和皮脂腺等皮肤附件可增殖形成创面修复的上皮岛［1］。若及时处理且方法适宜，上皮岛形成快，创面愈合快，瘢痕少，全身并发症也少。反之，则创面损伤加重，影响上皮岛的形成，瘢痕多，甚至挛缩畸形。因此，深Ⅱ度烧伤创面的早期处理对烧伤的转归与愈后有重要意义。研究表明，深Ⅱ度烧伤的快速愈合与创面早期微循环状况和后期微血管密度密切相关［2］。烧伤后创面氧自由基以加重水肿、休克、炎症反应，阻碍修复细胞迁移与增殖等一系列氧化应激过程而影响创面愈合［2］。因此，寻找抑制烧伤创面早期氧化应激和促进创面愈合的外用药物，是当今医学研究的热点。马桑水提取物（Coriaria Sinica Maxim’s extract，CSME）能促进烧伤创面的修复，同时抑制其病理性瘢痕的过度增生［3］。本实验进一步探讨其作用机制与改善烧伤创面微循环和抑制氧化应激反应有关。

1 材料与方法

1.1 实验动物、试剂与器材

1.1.1 CSME的制备［3］两年生鲜原生植物枝条，九月采集，经植物学鉴别晾干粉碎备用。取1 kg马桑粉为样品，将其用1 000 ml蒸馏水浸泡30 min，煎煮90 min分别提取3次，3次提取物合并、过滤和水浴锅浓缩成100%的马桑提取浸膏（1 ml相当于1 g生药）备用［3］。随后，按CSME与普通医用白凡士林1∶10、5∶10、10∶10比例混合成低剂量、中剂量和高剂量三种外用烧伤软膏。

1.1.2 实验动物 SD大鼠180只（6周，180～220 g），雌雄各半，购于三峡大学实验动物中心（中国宜昌，No.42010200000304）。

1.1.3 实验器材与试剂 CUT 4050-旋转切片机（德国，Leica），BX53倒置显微镜和 JEM-1200EX透射电镜（日本，OLYMPUS），微量移液器（德国 Eppendorf艾本德股份公司），Multiskan FC-51119000酶标仪（美国，Ameritech），ZS83-1型内切式组织匀浆器（无锡德谱仪器制造有限公司），722S分光光度计（杭州汇尔仪器设备有限公司），Optima MAX-XP低温离心机（美国，Beckman Coulter），YLS-5Q烫伤仪（天津科技发展有限公司）。SP、ELISA试剂盒 B＆D（美国，Sigma），血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）试剂盒（上海微蒙生物科技有限公司），DAB显色试剂盒、SP一抗和SABC二抗试剂盒（北京索莱宝科技有限公司），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）测定试剂盒及考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒（北京雷根生物技术有限公司）。内皮素（endothelin，ET）和一氧化氮（nitric oxide，NO）试剂盒（北京杰辉博高生物技术有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 实验分组、造模及给药［3］阳光与阴影的昼夜节律1周（温度24℃±3℃，湿度50%±5%）。随机将动物分成6组（n＝30）：对照组（NS）、凡士林组（WPL）、磺胺嘧啶银组（SSD）、马桑提取物组低剂量组（CSME-L）、中剂量组（CSME-M）和高剂量组（CSME-H）。常规配方饲料喂养和自来水饮水。所有动物都保持在昼夜周期（12 h光照，12 h黑暗）的标准实验室条件下的动物房内。自由摄取食物和水。动物治疗严格按照国家卫生实验动物护理和使用指南进行。在学院实验动物管理委员会的监督下进行实验。造模前禁食12 h，10%水合氯醛麻醉（0.3 ml／100 g，ip），背部剪毛3 cm×3 cm，8%Na2S脱毛，温热水冲洗，75%乙醇消毒处理脱毛区。除NS组外，其他各组均以烫伤仪2.5×2.5 cm探头烫伤脱毛区（压力 500 g，时间 15 s）［3］。伤后创面分别涂擦NS、WPL、SSD和 CSME烧伤软膏（低剂量、中剂量、高剂量），腹腔注射乳酸林格氏液5 ml抗休克。每天上午9：00换药1次，直至21 d。

1.2.2 观察指标及内容 愈合率［3］：分别于伤后48 h、7 d、14 d、21 d上午 9：00计算创面愈合率（创面大小用透明膜描记法）后各组大鼠分别各取6只，以10%水合氯醛麻醉（0.3 ml／100 g，ip）开胸暴露心脏，插管至升主动脉，快速灌注NS 150 ml，再灌注多聚甲醛（4%，200 ml）后，分别以创面中心直径 2.5 cm取圆形创面全层皮肤组织修块后，一部分用于组织学观察，另一部分保存于-80℃冰箱备用于血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），MDA、SOD、HYP等检测。创面愈合率数据用 Image-Pro Plus结合Excel 2000处理，测量创面愈合率（healing rate，HR），其与原始创面面积（primordial area，PA）和未愈创面面积（no healing area，NHA）关系为：HR＝完全愈合时间：记录创面完全愈合的时间，其标准为：创面完全被上皮覆盖，无残余缺损，创面色均一而光滑。

1.2.3 创面微血管密度的检测 通过免疫荧光、免疫酶标或免疫电镜法显示血管内皮细胞。先以石蜡切片脱蜡，干燥箱干燥（60℃，10 min），二甲苯Ⅰ和Ⅱ分别浸泡5 min，梯度乙醇各洗脱5 min，PBS洗脱5 min后，分别以0.25%胰蛋白酶消化行抗原修复、3%H2O2除内源过氧化酶、一抗、二抗、辣根酶标记链霉卵白素、DAB显色剂显色、苏木素复染、氨水返蓝等，镜下观察并拍照。以Pareek法计算微血管密度（microvessel density，MVD）［4］（200倍镜下计数真皮血管丰富处10个连续而不重叠微血管数的平均值）。各个标准品和样品的OD值均以零孔调零，使用SPSS10.0软件处理，分别以标准品浓度、OD值为横坐标和纵坐标画出标准曲线，相应曲线方程，计算样品含量。

1.2.4 创面组织含水量（tissue moisture，TM）的测定［5］用电子天平精确称取创面组织200 mg，置于烤箱烘烤24 h（80℃），取出称重，干湿法计算组织含水量。计算方法为［5］：

1.2.5 创面组织学观察 实验时取出备用创面全层皮肤组织进行修块，用于HE染色。先以多聚甲醛固定2 h，梯度酒精脱水，石蜡包埋切片（厚 5 μm），最后行HE染色，镜下观察组织变化情况。

1.2.6 创面组织 VEGF、MDA、SOD、HYP、胶原蛋白、ET和NO的测定 取创面全层皮肤组织500 mg左右，去痂，以NS漂洗去血液，滤纸拭干称重。冰浴中剪碎组织，加9倍4℃NS，匀浆机匀浆后低温离心（3 000 r／min，10 min），取上清置于液氮中保存备用。相关成分检测方法均按试剂盒说明书步骤逐一进行检测。消化法测定HYP，NO测定用Griess比色法测定（mol／g），按试剂盒说明书设标17准孔，分光光度计波长为550 nm读取OD值，绘制标准曲线［5，6］。

1.3 统计方法

数据以均数±标准差（±s）表示，所有数据用SPSS 11.0软件分析。

2 结果

2.1 CSME对创面愈合的影响

在各个时间点，NS与WPL组均无明显差异。48 h时，各组大鼠创面明显水肿，较原始创面略有扩大，无显著性差异；7 d时，各组大鼠创面水肿消失，明显收缩，创面面积缩小，其中SSD、CSME-L、CSMEM、CSME-H的HR无明显差异，均显著大于NS（P＜0.05）；14 d和 21 d时，各组创面进一步缩小，SSD、CSME-L、CSME-M、CSME-H肉芽组织生长良好，血管形成丰富，结痂厚薄均匀，无明显渗出液，而NS和WPL肉芽组织少，结痂厚薄不均匀，黄色渗出液较多，SSD、CSME-L、CSME-M、CSME-H的 HR显著大于NS（P＜0.05），其中 SSD与 CSME-M相当而小于CSME-H（P＜0.05，表 1，图 1，见彩图页Ⅲ）。

Tab.1 Effects of CSME on the HR of wound tissue in rats（%，±s，n＝6）

Tab.1 Effects of CSME on the HR of wound tissue in rats（%，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；HR：Healing rate；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Groups 0 h 48 h 7 d 14 d 21 d NS 0.00 -0.87±0.13 15.42±0.84 31.07±2.37 64.34±1.52 WPL 0.00 -1.02±0.10 14.95±1.04 29.84±0.63 66.76±1.44 SSD 0.00 -1.03±0.11 23.11±1.54* 61.21±1.02* 83.14±1.12*CSME-L 0.00 -1.14±0.22 22.07±1.28* 56.46±0.81* 70.24±2.49*CSME-M 0.00 -1.06±0.15 24.62±2.18* 62.61±1.38△ 82.75±1.67△CSME-H 0.00 -0.91±0.07 23.89±2.41* 71.16±1.32#▲ 91.46±2.03#▲

Fig.1 Effects of CSME on healing of wound tissue in rats

2.2 CSME对创面组织MVD的影响

2.2.1 CSME对创面组织MVD形态的影响 在各个时间点，NS组与WPL组均无明显差异。伤后48 h，各组创面明显水肿，浅层MVD受损状况、数目与形态无明显差异；伤后7 d和14 d，SSD组和CSME各组的MVD排列致密、形态规则、大小均匀、充盈良好，新生血管内皮细胞排列整齐，数量众多，成熟度良好，明显优于NS；伤后21 d，CSME各组的MVD大小、形态、排列以及充盈度明显优于SSD，但管径、数量和分布方面呈剂量依赖性少于SSD。

2.2.2 CSME对创面组织MVD数量的影响 在各个时间点，NS组与WPL组均无明显差异。烧伤后，各组大鼠创面的MVD随时间的推移逐渐增加，直至21 d达最高峰；在7 d时，CSME各组的MVD显著多于 SSD（P＜0.05），并呈现剂量依赖趋势；在第 14天时，SSD与 CSME-M和 CSME-H相当；在 21 d时，CSME各组的MVD较14 d显著性减少，SSD的MVD继续增加，明显超过 CSME各组（P＜0.05，表 2）。

Tab.2 Effects of CSME on the MVD of wound tissue in rats（piece／mm2，±s，n＝6）

Tab.2 Effects of CSME on the MVD of wound tissue in rats（piece／mm2，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；MVD：Microvessel density；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 8.16±1.04 12.06±2.19 21.24±1.08 32.86±3.57 WPL 7.89±0.87 11.73±3.08 20.01±3.52 30.44±3.06 SSD 8.02±0.38 17.45±4.67* 42.27±4.15* 51.67±4.16*CSME-L 7.95±0.94 15.28±2.01* 27.19±2.18*# 36.01±3.48*#CSME-M 7.78±0.46 22.37±2.53*#△ 41.08±2.43*△ 32.14±4.05*#CSME-H 8.26±0.91 28.11±3.46*#△▲ 43.27±3.39* 34.37±2.64*#

2.3 CSME对创面组织TM的影响

在各个时间点，NS与WPL均无明显差异。各组TM于48 h达最高峰，之后逐渐下降恢复为损伤前水平。在48 h和7 d，CSME各组呈现剂量依赖性低于其他各组（P＜0.05），在各个时相SSD的TM均与NS相当。表明SSD对烧伤后创面组织的急性渗出无显著影响，而CSME可显著减轻创面组织的急性渗出（图 2）。

Fig.2 Effects of CSME on the TM of wound tissuein rats TM：Tissue moisture

2.4 CSME对创面组织病理形态学的影响

在各个时间点，NS与WPL均无明显差异。伤后48 h，各组病理学特征相似，无显著差异。第7天，NS创面明显凹凸不平，可见大量炎细胞浸润，并出现大片坏死组织，新生上皮增殖不明显，未见初始细胞层；SSD创面平整度和炎细胞浸润明显优于NS和WPL，见散在片状坏死组织，新生上皮偶有增殖，稚嫩细胞层尚未形成，排列尚可；CSME-L创面平整度和炎细胞浸润情况与SSD相似，新生上皮增殖存在，稚嫩细胞层已基本形成，排列尚可；CSME-M创面平整度和炎细胞浸润情况优于SSD，新生上皮增殖明显，典型稚嫩细胞层形成，排列良好；CSME-H创面平整度良好，炎细胞浸润明显，新生上皮增殖典型，典型稚嫩细胞层形成，排列整齐。

第14天，NS创面凹凸不平，炎细胞浸润严重，坏死组织散在片状分布，新生上皮明显增殖，形成薄的细胞层，厚薄不均，排列紊乱；SSD创面仍然凹凸不平，较第7天明显改善，炎细胞浸润明显，偶见散在片状坏死组织，见新生上皮增殖，出现少量复层上皮细胞，已形成成熟细胞层，排列尚可；CSME-L与SSD相当；CSME-M创面平整，炎细胞浸润少许，见点状坏死组织，新生上皮增殖明显，典型大量复层上皮细胞，已形成成熟的较厚细胞层，排列整齐。深部组织结构（皮脂腺、汗腺等）表浅；CSME-H创面平整，炎细胞浸润少许，偶见散在点状坏死组织，新生上皮增殖典型，出现典型多层复层上皮细胞层，形成成熟的较厚细胞层，排列整齐，厚薄均匀，深部组织结构（皮脂腺、汗腺等）表浅。

第21天，NS创面凹凸不平，新生上皮组织嫩薄不均匀，成熟度差，未见表皮钉脚深入真皮层，少数大鼠创面基本愈合；SSD创面凹凸不平，新生上皮组织嫩薄不均匀，成熟度尚可，少见表皮钉脚深入真皮层，多数大鼠创面基本愈合；CSME-L创面平整，新生上皮组织厚而均匀，成熟度尚可，较多表皮钉脚深入真皮层，所有大鼠创面基本愈合；CSME-M创面平整，新生上皮组织较厚而均匀，成熟度良好，表皮钉脚广泛深入真皮层，所有大鼠创面基本愈合；CSMEH创面平整，新生上皮组织厚而均匀，成熟度好，表皮钉脚广泛深入真皮层，所有大鼠创面基本愈合（图3，见彩图页Ⅲ）。

Fig. 3 Staining results of wound tissue（HE×100）

2.5 CSME对大鼠创面组织 VEGF、SOD、MDA、HYP和NO的影响

2.5.1 CSME对大鼠创面组织VEGF含量的影响

在各个时间点，NS组与WPL组均无明显差异。伤后48 h，CSME各组创面组织的VEGF呈剂量依赖性显著高于 NS、WPL和 SSD（P＜0.05）；随着时间的推移，各组逐渐升高，7 d达到最高，以后逐渐下降；伤后7 d、14 d，CSME各组呈现剂量依赖性高于NS、WPL和 SSD（P＜0.05）；伤后 21 d，各组均降至最低，其中 CSME呈剂量依赖性低于 NS、WPL和 SSD（P＜0.05，表 3）。

2.5.2 CSME对大鼠创面组织 SOD、HYP和 MDA的影响 在各个时间点，NS与WPL均无明显差异。随时间的推移，各组各时间段创面组织SOD活性逐渐增强和HYP含量逐渐增多。伤后48 h、7 d、14 d、21 d，NS、WPL、SSD的 SOD活性和 HYP含量无显著性差异；CSME各组SOD活性和HYP含量呈剂量依赖性强于 NS、WPL、SSD（P＜0.05）；伤后7 d、14 d、21 d时间段SSD的SOD活性显著弱于其他各组。各时间段各组创面组织MDA活性呈剂量依赖性减弱；伤后各时间段，NS与WPL的MDA活性无显著性差异；SSD的MDA活性显著强于其他各组（P＜0.05）；CSME各组MDA活性呈剂量依赖性弱于NS、WPL、SSD（P＜0.05，表 4、表 5、表 6）。

Tab.3 Effects of CSME on the VEGF of wound tissue in rats（10-12g／g，±s，n＝6）

Tab.3 Effects of CSME on the VEGF of wound tissue in rats（10-12g／g，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；VEGF：Vascular endothelial growth factor；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 18.69±1.07 30.52±1.19 32.08±2.04 23.68±0.63 WPL 17.93±1.14*#▲ 31.79±1.27 31.17±1.71 21.02±1.35*#△SSD 20.04±1.26 29.28±1.48*#▲ 32.62±1.15 22.19±1.64*#△CSME-L 24.71±1.51*#▲ 34.83±1.08*# 27.57±1.47 17.84±1.41*#▲CSME-M 30.86±2.06*#△ 38.15±2.11*#△ 28.93±1.05 12.11±1.28*#△CSME-H 31.45±2.37*#△ 41.63±2.24*#△▲ 29.61±1.43 13.04±0.79*#△

Tab.4 Effects of CSME on the SOD activity of wound tissue in rats（NU／mg·prot，±s，n＝6）

Tab.4 Effects of CSME on the SOD activity of wound tissue in rats（NU／mg·prot，±s，n＝6）

SOD：Superoxide dismutase*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 4.28±0.12 6.89±0.08 10.07±0.04 14.83±0.48 WPL 3.97±0.08 6.03±0.29 10.76±0.17 15.01±0.76 SSD 4.03±0.27 4.67±0.07* 7.14±0.05* 10.39±0.62*CSME-L 5.68±0.04*# 9.28±2.01*# 12.25±0.33*# 14.62±0.46*#CSME-M 7.73±0.17#△ 11.37±0.04*#△ 15.31±0.46*#△ 17.04±0.71*#△CSME-H 8.89±0.31*#△▲ 13.35±0.52*△▲ 17.68±0.43*△▲ 18.87±0.61*△▲

Tab.5 Effects of CSME on the HYPof wound tissue in rats（μg／mg，±s，n＝6）

Tab.5 Effects of CSME on the HYPof wound tissue in rats（μg／mg，±s，n＝6）

HYP：Hydroxyproline*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 28.14±1.12 43.51±2.17 59.04±2.09 71.68±1.75 WPL 27.86±1.34 44.07±2.26 57.87±1.62 72.04±2.86 SSD 28.09±1.18 43.68±1.96 58.04±2.49 71.38±2.37 CSME-L 27.73±2.03 52.46±2.38*# 65.73±2.51*# 76.53±1.58*#CSME-M 29.82±1.07 59.12±1.93*#△ 73.24±1.64*#△ 82.65±1.87*#△CSME-H 33.96±2.14*#△ 67.58±2.41*#△▲ 81.61±2.84*#△▲ 89.05±2.43*#△▲

Tab.6 Effects of CSME on the MDA content of wound tissue in rats（nmol／mg prot，±s，n＝6）

Tab.6 Effects of CSME on the MDA content of wound tissue in rats（nmol／mg prot，±s，n＝6）

MDA：Malondialdehyde*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 7.51±0.34 5.82±0.13 4.84±0.09 2.67±0.24 WPL 7.84±0.27 6.01±0.37 5.04±0.28 2.59±0.14 SSD 8.93±0.45 7.04±0.12* 6.27±0.16* 4.84±0.09*CSME-L 6.79±0.39*# 6.01±0.03*# 4.65±0.27*# 3.73±0.17*#CSME-M 5.11±0.42#△ 4.46±0.06*#△ 3.65±0.46*#△ 2.62±0.24*#△CSME-H 4.29±0.31*#△▲ 3.35±0.22*△▲ 2.72±0.15*△▲ 1.43±0.01*△▲

2.5.3 CSME对大鼠创面组织NO和ET的影响

在各个时间点，NS与WPL均无明显差异。伤后48 h，各组创面组织NO含量达高峰，之后下降。伤后48 h、7 d、14 d、21 d，CSME-L显著低于 NS、WPL、SSD而高于 CSME-M和 CSME-H（P＜0.05），而 CSME-M与CSME-H相当，而显著低于其他组（P＜0.05，表7）。烧伤后，各组创面组织ET含量随时间持续升高，7 d达高峰，随后下降；14 d，CSME-M与CSME-H的ET相当，显著低于其他组（P＜0.05）；SSD显著低于 NS、WPL，显著高于 CSME-L（P＜0.05）。21 d CSME-M和CSME-H显著高于其他各组和正常组织（P＜0.05），SSD显著低于其他各组（P＜0.05，表8）。

Tab.7 Effects of CSME on the NO content of wound tissue in rats（10-9 mol／g，±s，n＝6）

Tab.7 Effects of CSME on the NO content of wound tissue in rats（10-9 mol／g，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；NO：Nitric oxide；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group Normal tissue 48 h 7 d 14 d 21 d NS 3.03±0.07 16.93±0.51 14.74±0.08 11.47±0.15 7.28±0.05 WPL 2.97±0.04 17.68±0.46 15.03±0.21 12.19±0.13 6.02±0.04 SSD 3.15±0.12 16.75±0.62 14.39±0.13 10.92±0.08 7.84±0.03 CSME-L 2.89±0.09 13.64±0.28* 9.64±0.15*# 8.33±0.06*# 5.18±0.07*#CSME-M 2.71±0.05 12.86±0.49* 7.59±0.06*#△ 2.88±0.02*#△ 2.42±0.01*#△CSME-H 3.08±0.13 13.09±0.61* 6.13±0.03*#△▲ 3.27±0.07*#△ 2.11±0.02*#△

Tab.8 Effects of CSME on the ET content of wound tissue in rats（10-12 mol／g，±s，n＝6）

Tab.8 Effects of CSME on the ET content of wound tissue in rats（10-12 mol／g，±s，n＝6）

ET：Endothelin*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group Normal tissue 48 h 7 d 14 d 21 d NS 8.174±0.622 9.468±0.372 15.315±0.127 11.238±0.513 8.542±0.146 WPL 8.381±0.413 9.371±0.294 15.103±0.206 11.175±0.218 8.298±0.325 SSD 8.097±0.564 8.624±0.316 13.316±0.318* 9.183±0.346* 5.327±0.261*CSME-L 8.411±0.616 10.537±0.425*# 11.204±0.409*# 8.048±0.257*# 9.026±0.572*#CSME-M 8.263±0.273 11.004±0.217*# 11.137±0.612*# 5.583±0.609*#△ 9.821±0.411*#CSME-H 8.029±0.348 11.831±0.104*# 10.981±0.248*# 5.796±0.517*#△ 10.005±0.152*#△

3 讨论

深Ⅱ度烧伤若处理不当，加重上皮岛的损伤，影响创面愈合，增加瘢痕形成［4，7］。马桑 （Coriarianepalensis Wall.），又称千年红，主要成分为马桑毒素（coriamyrtin）、羟基马桑毒素（tutin）、马桑亭（coriatin）、含鞣质（tannin）、多糖（polysaccharide）及树脂等［3］。中国民间一直沿用马桑水提取物作治疗经久不愈的皮肤溃疡和烧伤创面愈合［3，8］。我们曾研究发现［3，9］，CSME对大鼠背部皮肤深Ⅱ度烧伤具有显著的治疗作用。本研究发现，CSME早期促进创面修复，后期阻止瘢痕的过度增生的机制是：因NO为重要的细胞生长双重调控因子，ET是存在于血管内皮的重要细胞因子，对于维持血管张力具有重要作用。NO有抑制ET合成效应。本研究发现创面修复早期，CSME增加NO合成，减少ET含量，从而增加新生血管的数量，增强创面组织营养供应，促进创面愈合。但CSME呈剂量依赖性抑制NO的过多合成，减轻创面组织因NO作用的炎性渗出与水肿，缩短急性渗出期，加快创面修复。创面修复后期，CSME抑制NO的合成，增加ET的合成，减少新生血管密度，规则血管形态，缩小血管管径，减少血管充盈，从而减轻瘢痕组织的填充。

大量研究证实，烧伤后创面氧化应激反应的启动促进创面瘀滞带扩大，影响创面愈合［6，10］。烧伤创面的修复也就是创面各种修复细胞增殖、分泌蛋白及成纤维细胞的修复过程［5，11］。创面组织中胶原成分HYP是胶原含量的标志，体现创面愈合的程度与质量。烧伤后，创面组织产生氧自由基，通过链式反应放大活性氧作用，产生具有很强的细胞毒作用的MDA、氢过氧基等脂质过氧化物，导致细胞代谢紊乱甚至细胞凋亡［7］。SOD能清除氧自由基而阻止脂质过氧化反应，防止细胞受损。本研究认为CSME促进早期烧伤创面愈合与增强SOD和抑制MDA的活性而阻止细胞凋亡有关，同时，早期增加HYP的合成，加快胶原蛋白的合成。

VEGF是加速新生血管形成的重要细胞因子，在烧伤创面修复过程中，有效调节着血管内皮的快速增殖，促使创面微血管快速形成以保证创面组织营养物质与氧供应，有助于加速创面愈合。我们曾发现，CSME在促进烧伤创面愈合的同时，通过调控Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA表达比值而阻止病理性瘢痕的过度增生［3］。本研究发现，创面修复的早期，CSME通过促进VEGF的合成而促进创面组织新生血管的形成而加快创面的修复。在创面修复的后期，调控VEGF的合成，延缓新生血管的过度增生，同时调控Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA表达比值而阻止病理性瘢痕的过度增生［3］。

总之，马桑水提取物对深Ⅱ度烧伤显示出良好的治疗作用。其主要作用机制是通过调控NO、ET、HYP、MDA、SOD而影响烧伤后全身或局部组织氧化应激过程，减轻组织器官损伤。且早期促进与新生血管增生有关的VEGF表达，后期抑制VEGF的表达，在促进创面早期愈合的同时，阻止创面瘢痕过度增生，这对于烧伤治疗具有重要临床价值。

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