变异冬红果组织培养中褐化控制研究

韦晨　丁悦来　王醒

摘要 [目的]研究不同因素对变异冬红果茎段褐化的影响。[方法]以变异冬红果茎段为外植体，研究茎段木质化程度、不同消毒方法、茎段转移频率、不同6-BA浓度、不同活性炭浓度对褐化的影响。[结果]同一灭菌处理下，木质化茎段的褐化率最高；单独用0.1%HgCl2溶液消毒更有利于减轻变异冬红果茎段的褐化程度；转移频率为1 d时，更有利于减轻变异冬红果茎段的褐化程度；低浓度的6-BA有利于减轻变异冬红果茎段的褐化程度；在培养基中添加活性炭并不一定适合变异冬红果茎段的防褐化处理。[结论]该研究可为变异冬红果茎段的继代培养提供一定的参考。

关键词 变异冬红果；组织培养；褐化；外植体

中图分类号 S723.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2018）17-0102-03

Abstract [Objective] To study the effect of different factors on the degree of browning in the stem segments of mutant Malus spectabilis.[Method] With mutant M. spectabilis stem segments as explant，to study the lignification degree of stem segments， different disinfection methods， transfer frequency of stem segments， different concentrations of 6BA， different concentrations of activated carbon on the degree of browning. [Result] Under the same sterilization treatment， the browning rate of the lignified stem segments was the highest；disinfection with 0.1% HgCl2 solution alone was more conducive to reduce the degree of browning of stem segments；when the transfer frequency was 1 d， it was more conducive to the reduction of browning of stem segments. Low concentration of 6BA was beneficial to reduce the degree of browning of stem segments；adding activated carbon in the medium was not necessarily suitable for browning of stem segments of mutant M. spectabilis. [Conclusion] It provides some reference for the subculture of mutant M. spectabilis.

Key words Mutant Malus spectabilis；Tissue culture；Browning；Explant

冬红果（Malus spectabilis）是蔷薇科苹果属落叶灌木或小乔木[1-2]，因该品种的变异植株叶片呈紫色，且果实颜色初期至深秋由紫入红，寓意万紫千红，相较于正常冬红果，它前期的紫叶紫果增添了色彩变化的多样性，使得观果期在一定程度上向前延伸，也更具有观赏价值，因此，具有这一特异性状的冬红果变异植株未来将更受市场欢迎。

变异冬红果用传统的嫁接繁育技术不仅优良性状难以保存，而且繁殖效率较低，极大地限制了变异冬红果的优树选育和规模化扩繁。而采用组织培养繁殖方法，不仅可对变异母本的优良性状进行保持、提纯或复壮，而且离体培养下繁殖体个体小、群体大，且可控的环境还能消除季节因素的限制，从而显著地提高繁殖系数[3-4]。因此，组织培养繁殖方法在变异冬红果的繁殖方面优势明显，但在组织培养的过程中外植体很容易褐化，严重影响了变异冬红果组织培养的成活率，找到解决褐化问题的方法成为当务之急。目前鲜见有关冬红果组织培养快繁技术的报道。而在苹果属植物组织培养进行防褐化处理时，选择合适的外植体、消毒处理、连续转移、在培养基中添加不同浓度的细胞分裂素和添加活性炭等方法，均能很好地控制褐化[5-6]。笔者以变异冬红果茎段为外植体，通过研究外植体木质化程度、不同消毒处理、连续转移的时间、在培养基中添加不同浓度的细胞分裂素和添加不同浓度的活性炭等对褐化的影响程度，为变异冬红果组织培养中控制褐化现象研究以及进一步进行继代培养提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验以采自江苏艺轩园林景观工程有限公司的一株变异冬红果的未木质化、半木质化和木质化茎段为外植体。

1.2 方法

1.2.1 同一消毒處理对变异冬红果不同木质化程度茎段褐化的影响。取变异冬红果1年生枝条，用洗衣粉水浸泡3～5 min，流水下冲洗30～60 min，冲洗干净后，剪取2 cm左右单芽茎段，经常规消毒后接种于MS+6-BA 0.5 mg/L的培养基中。设置未木质化、半木质化和木质化茎段3种外植体处理，每瓶接种1个茎段，每个处理接种30个带芽茎段，重复3次。培养温度为24～26 ℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1 800～2 200 lx，30 d后统计褐化率、污染率、存活率。

1.2.2 不同消毒处理对变异冬红果茎段褐化的影响。取变异冬红果的茎段，用洗衣粉水浸泡3～5 min，流水下冲洗30～60 min，冲洗干净后设置6个处理：①用75%乙醇消毒30 s后，再用0.1%HgCl2溶液消毒7 min；②用75%乙醇消毒30 s后，再用0.1%HgCl2溶液消毒8 min；③用75%乙醇消毒30 s后，再用0.1%HgCl2溶液消毒9 min；④用0.1%HgCl2溶液消毒7 min；⑤用0.1%HgCl2溶液消毒8 min；⑥用0.1%HgCl2溶液消毒9 min。无菌水冲洗3～4遍，冲洗干净后，剪取2 cm左右单芽茎段，经常规消毒后接种于MS+6-BA 0.5 mg/L的培养基中，每瓶接种1个茎段，每个处理接种30个带芽茎段，重复3次，培养温度为24～26 ℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1 800～2 200 lx，观察其褐化程度。