p-JAK2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

谭豆豆， 马 蓉， 刘 涛， 刘 清， 郑树涛， 周 剑， 陈玉梅， 申铜雪， 张 潇， 卢晓梅

(新疆医科大学1附属肿瘤医院； 2临床医学研究院， 乌鲁木齐 830011)

食管癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，我国食管癌在全部恶性肿瘤中发病率排第3位，死亡率排第4位[1]。食管癌最常见的组织分型是鳞状细胞癌[2]，其恶性程度高且预后差，5 a生存率不足20%[3]。由于大部分病例都在中晚期被发现而又没有理想的治疗策略[4]，因此探讨ESCC的发病机制，探索新的治疗靶点就显得尤为重要。

酪氨酸激酶2(Janus kinase 2， JAK2)是Janus家族的非受体蛋白家族的成员，通过多种细胞因子受体调节JAK2/STAT3信号通路[5]，而磷酸化的JAK2(phosphorylated JAK2，p-JAK2)是其活化形式并在大多数的肿瘤进展中都起着重要的作用[5-7]。本研究应用免疫组织化学SP法检测食管鳞状细胞癌组织芯片中p-JAK2的表达，并结合临床病理特征，探讨食管鳞状细胞癌组织中p-JAK2的表达与患者预后及临床病理参数的相关性。

1 材料与方法

1.1临床组织样本食管癌组织芯片 (购自上海芯超生物科技有限公司)，其中食管鳞状细胞癌组织标本93例，癌旁正常组织85例，其中有8例食管癌组织无癌旁阴性对照组织。93例食管癌组织中，男性77例，女性16例，年龄49～85岁，平均年龄65.75岁。食管癌组织浸润肌层22例，浸润外膜层64例。根据美国癌症联合会(AJCC)2009年第7版TNM分期标准，1期11例，2期37例，3期40例，5例TNM分期缺失。发现有淋巴结转移49例，未发现淋巴结转移44例。

1.2主要试剂p-JAK2兔抗人单克隆抗体(美国Abcam公司)，SP试剂盒、DAB显色剂购自北京中杉金桥生物制品有限公司。

1.3免疫组化染色方法及结果判定食管癌组织芯片常规脱蜡，3%H2O2抑制内源性过氧化物酶，采用0.01 mol/L柠檬酸钠缓冲液微波加热修复抗原。免疫组化二步法操作步骤参照试剂盒说明书进行。p-JAK2工作液浓度为1：200。根据半定量积分法[8]及双盲法判读p-JAK2表达，每个组织随机选取10个高倍视野观察，按照染色强度分为：(-)、(+)、(++)、(+++)，分别计为0、1、2、3分；按照阳性细胞占肿瘤细胞总数的百分比分为：<5%计0分，5%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，≥75%计4分。将两项结果相加，0～1分判为阴性，≥2分判为阳性。

1.4统计学处理所得结果数据采用SPSS16.0进行统计分析，食管鳞癌组织和癌旁阴性组织p-JAK2表达及p-JAK2表达与临床病理参数的相关性分析比较采用χ2检验，单因素生存率分析则采用Kaplan-Meier检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1p-JAK2表达及其与临床病理参数的相关性根据免疫组织化学SP法结果，p-JAK2阳性表达主要定位于细胞核，呈黄色或棕黄色(图1)。食管鳞癌组织p-JAK2的阳性表达率(76.3%)明显高于癌旁正常组织(54.1%)，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。另外，p-JAK2表达与患者病理分级(P=0.044)呈显著相关，并且p-JAK2阳性率随着病理分级的升高出现下降趋势。在食管组织中p-JAK2的表达与患者的性别(P=0.644)、年龄(P=0.835)、肿瘤大小(P=0.404)、病理形态(P=0.357)、浸润深度(P=0.430)、临床分期(P=0.428)及淋巴结转移(P=0.389)的相关性差异无统计学意义(P>0.05) (表1)。

表1 p-JAK2表达与ESCC患者临床病理参数的相关性分析/例

2.2生存分析93例食管癌患者手术时间：2009年1月～2010年12月，随访时间：2015年7月，随访4.6～6.5年，半数生存期32个月。从2009年～2015年，93例ESCC患者存活26例，死亡60例，失访7例，5 a生存率约为36%。生存分析显示，食管癌组织中p-JAK2阳性率与患者生存期无明显相关性(P=0.178)(图2)。

3 讨论

食管癌是消化道高侵袭恶性肿瘤之一，最常见的组织分型是鳞状细胞癌[2]。虽然食管癌的诊断和治疗有了很大进展，但患者总体预后不佳，5 a生存率低[3]。食管癌易发生转移，是死亡率高的重要原因[9]。研究发现，JAK2不仅作为原激酶介导STAT3的磷酸化，而且在大多数肿瘤活化中都起着至关重要的作用[6]。最新研究已表明JAK2/STAT3信号通路与人类肿瘤干细胞的维持有密切关系，并已报道JAK2/STAT3信号通路参与诱导肝脏肿瘤干细胞的多潜能因子Nanog和化学抗性表型[10]，在胶质母细胞瘤中JAK/STAT3通路的激活可以维持肿瘤干细胞的表型和致瘤性[5]。相反，在乳腺癌中阻断JAK2激活将引起CD44+/CD24-肿瘤干细胞的减少和体内致瘤性的丧失[7]。同时还发现，在多种恶性肿瘤中中断JAK2/STAT3信号通路的激活将会抑制肿瘤的致瘤性及进展。

本研究采用免疫组化SP法检测食管鳞癌及癌旁正常组织中p-JAK2蛋白表达，结果发现，食管鳞癌组织中p-JAK2阳性表达率明显高于癌旁阴性组织(P<0.05)，提示在食管鳞状细胞癌中p-JAK2表达上调可能参与食管癌的发生及进展。同时发现，p-JAK2表达与食管癌分化程度(P=0.044)呈显著相关，并且p-JAK2阳性率随着分化程度的降低出现下降趋势，即p-JAK2阳性率随着肿瘤恶性程度的升高而降低，进一步提示在食管癌发生早期，JAK2磷酸化水平较高，以此来激活JAK2/STAT3信号通路参与食管癌的进展。此结果与已有文献报道一致[11-13]。本研究还发现p-JAK2表达以定位于细胞核为主，也有少量在胞浆表达，提示可能存在p-JAK2活化形式入核参与核内基因或蛋白表达调控。食管鳞状细胞癌组织中p-JAK2异常表达提示JAK2/STAT3信号通路可能发生改变，其可能与食管鳞癌的发病机制有关。

综上所述，p-JAK2在食管癌组织中高表达，并与肿瘤分化程度相关，p-JAK2在肿瘤的发生发展过程中扮演着重要角色。但本研究只限于免疫组化水平的检测，p-JAK2与食管癌浸润转移的分子机制和细胞水平研究还有待于进一步证实。

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