山东地区鸭源大肠杆菌耐药性分析

郭 磊,李开锋,王述柏,张启迪

(1.青岛农业大学动物医学院,山东 青岛 266109;2.威海出入境检验检疫局,山东 威海 264200)

鸭大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的局部或全身性感染的细菌性疾病,其主要发病特征为心包炎、肝周炎和急性败血症等。由于大肠杆菌的血清型复杂,给免疫防治带来一定的困难,因此,药物防治是目前控制该病的主要手段,但在临床治疗和实际养殖过程中滥用抗生素,导致耐药大肠杆菌的大量出现,不仅造成抗菌药物在兽医临床上的治疗失败,而且其耐药基因可通过食物链进入人体,使人体肠道菌产生相应的耐药性,对人类的健康安全构成威胁。本试验检测了山东部分地区113株鸭源大肠杆菌对15种常用抗菌药物的敏感性,并对其耐药性及耐药谱进行分析,为兽医临床正确选择药物治疗鸭大肠杆菌病提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 113株大肠杆菌为2012年9月-2013年8月自青岛、烟台、潍坊、济南等8个规模化养鸭场病鸭中分离。质控菌株为大肠杆菌ATCC25922标准株,购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.2 药品与试剂 药敏纸片(头孢噻吩、头孢噻肟、头孢噻呋、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、加替沙星、左旋氧氟沙星、氨苄西林、克林霉素、复方新诺明、四环素、氯霉素、红霉素、亚胺培南),均购自杭州天和微生物试剂有限公司。细菌微量生化反应管,购自青岛高科园海博生物技术有限公司。

1.3 培养基 麦康凯琼脂、营养琼脂、MH培养基、LB肉汤培养基,均购自青岛高科园海博生物技术有限公司。

1.4 大肠杆菌的分离鉴定 无菌采集病死鸭的心脏、肝脏等病料,接种于2 mL LB肉汤中,37℃恒温培养24 h。将培养液接种于麦康凯琼脂平板,37℃培养20 h,观察菌落生长情况。挑取典型的菌落染色、镜检,纯培养后进行生化鉴定,三糖铁试验、吲哚试验、M.R.、V-P、麦芽糖、葡萄糖、乳糖等发酵试验,确定为大肠杆菌者保存备用。

1.5 药敏试验 将测试菌株接种于普通营养琼脂平板,于35℃恒温培养16～24 h,挑取3～4个单菌落,用4 mL生理盐水配成0.5 Mcfarland(麦氏标准)的菌悬液,用无菌棉签接种至4个MH琼脂平板上,每个平板放置3～4个药敏纸片,37℃培养20 h,测量抑菌圈直径,每次试验时,保证质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内。

1.6 耐药分析 试验方法参考世界卫生组织(WHO)推荐的Kirby-Bauer法,药敏结果判定按照美国临床检验标准委员会(NCCLS)的标准判断敏感、中介或耐药。

2 结果

2.1 大肠杆菌的分离鉴定从采集的150份病鸭心脏、肝脏病料中,分离鉴定出113株细菌,经生化试验结果分析,均符合大肠杆菌的特征,证明此113株分离菌是大肠杆菌,其分离率为75.3%。

2.2 药敏试验结果

2.2.1 菌株对15种抗菌药的耐药情况 113株鸭源大肠杆菌对15种抗菌药物的药敏试验结果见表1。复方新诺明、四环素、红霉素、克林霉素、庆大霉素、氨苄西林、左旋氧氟沙星、阿米卡星、氯霉素、环丙沙星10种抗菌药物的耐药率高于50%,而复方新诺明的耐药率达到了100%;耐药率低于20%的抗菌药物有亚胺培南、头孢噻呋和加替沙星3种。113株鸭源大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性也有所不同,其中亚胺培南、头孢噻呋、加替沙星、头孢噻肟4种的敏感率高于50%。

2.2.2 大肠杆菌的多重耐药 113株鸭源大肠杆菌表现出不同程度的耐药且至少对1种抗菌药表现出耐药,同时耐14种抗菌药物的菌株已达2.67%。同时对3种或以上药物表现出耐药的菌株占92.92%,其中同时耐12种药物的菌株所占比例最大,为16.81%,其次是耐7种药物的菌株为12.39%。细菌多重耐药情况详见图1。

2.2.3 大肠杆菌的耐药谱 鸭源大肠杆菌对15种抗菌药物的耐药谱有56种,最普遍的耐药谱型是复方新诺明-四环素-红霉素-克林霉素-庆大霉素-氨苄西林-左旋氧氟沙星-阿米卡星-氯霉素-环丙沙星。

图1 113株鸭源大肠杆菌多重耐药性情况

表1 113株鸭源大肠杆菌对15种抗菌药物的药敏试验结果

3 讨论

3.1 鸭源大肠杆菌的耐药情况 本试验分析了从山东地区分离的113株鸭源大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性,结果显示,分离菌对四环素类和磺胺类药物的耐药率最高,其中对复方新诺明的耐药率达到100%,对四环素的耐药率达到93%。参考养殖场临床用药情况,这两种药物作为常用药物使用,大肠杆菌在药物长期选择压力作用下,产生了耐药性,导致这两种药物已基本失去了临床治疗价值。

试验显示,亚胺培南是最敏感的药物,但与2009年张珍珍[1]的报道相比,猪源大肠杆菌对亚胺培南的耐药率高达55.65%,说明不同动物间的耐药率存在很大差异。但亚胺培南不能作为兽药使用,所以应该选择头孢噻呋作为有效的治疗药物。氯霉素因对骨髓造血机能有抑制作用,现已被禁用于食品动物,与刘吉山[2]报道的相比,分离株对氯霉素的敏感率由2005年报道的17%升到26%,提示在终止使用抗生素一定时间之后,细菌可能恢复其对药物的敏感性。

氟喹诺酮类药物作为一种广谱抗菌药物,其耐药率也在逐年升高[3],第一代氟喹诺酮类药物萘啶酸已基本失去临床治疗价值;第三代的氧氟沙星和环丙沙星的耐药率已经达到了50%以上,结果与刘建华[4]的研究相符;但与朱恒乾的研究有一定差距,说明不同地区的用药也存在一定的差异,第四代加替沙星的耐药率仅为 19.4%,敏感率高达 56.6%。

3.2 分离菌的多重耐药 试验结果显示,所分离的113株鸭源大肠杆菌均有不同程度的耐药,且多重耐药现象严重。部分菌株对多达14种药物耐药,且菌株中以同时耐12种、7种、6种、9种和11种药物的耐药菌居多,同时耐3种或3种以上药物的菌株占总分离株的92.92%,参考央珍[5]报道的重庆鸭源大肠杆菌耐3种或3种以上药物的菌株达到100%、于学辉[6]报道的92.3%相一致,说明大肠杆菌多重耐药问题在全国范围内都很严重。

交叉耐药性现象提示在兽医临床用药时,应先进行细菌的药物敏感性试验,再进行选择,以避免同一种或几种药物长期使用,影响临床治疗效果及产生细菌耐药性[7]。需要引起重视的是,对氟喹诺酮类药物耐药的大肠杆菌,对复方新诺明、四环素和克林霉素等的耐药率均在65%以上,说明鸭源大肠杆菌不仅对同类药物存在交叉耐药,而且对其他种类的抗菌药物也有严重的多重耐药现象,这对鸭源大肠杆菌病的药物治疗提出了新的挑战。

据报道,大肠杆菌很多耐药基因位于质粒上,而细菌的耐药性可以通过质粒水平传播到其他细菌,甚至可以通过食物链进入人体,将内源耐药菌群的耐药基因扩散到环境,对人体健康造成很大威胁[8]。虽然一般认为质粒介导的耐药机制属于低水平的,但有学者研究发现,这种低水平的耐药性可使细菌数量达到出现突变所需的浓度,从而出现高度耐药,会对畜禽养殖业造成严重的经济损失,对人的健康会产生无可估量的影响[9]。因此加强对病原菌的耐药性检测刻不容缓。

本试验监测的鸭源大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药水平普遍较高,总体耐药情况不容乐观,归结原因主要是临床用药不规范引起的,其结果能够反映山东部分地区临床用药情况。抗菌药物耐药性的监测为鸭场临床用药提供了依据,对指导临床合理用药,减缓细菌耐药性的产生具有重要意义。为了延长抗菌药物的使用周期,更好地控制疾病的发生,应合理的使用抗菌药物,对症下药,定期进行细菌药敏试验,轮换使用抗菌药物等。

参考文献:

[1] 张珍珍,吴俊伟,唐建华,等.重庆市猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性监测[J].中国兽医杂志,2009,45(4):85-87.

[2] 刘吉山,沈志强,王燕,等.我国部分地区禽致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验[J].中国家禽,2005,27(7):14-16.

[3] 杜向党,张素梅,李新生,等.致病性大肠杆菌对头孢噻呋和氟喹诺酮类药物的敏感性[J].中国兽医杂志,2007,43(8):73.

[4] 刘建华,苑丽,李凤娟,等.鸭致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验[J].中国畜牧兽医,2009,36(7):161-163.

[5] 央珍,聂奎.重庆市部分地区鸭源大肠杆菌的O抗原血清型及耐药性[J].西南大学学报(自然科学版),2011,33(8):53-56.

[6] 于学辉,张焕荣,汤承,等.我国西南地区鸭病原性大肠杆菌耐药性检测[J].养禽与禽病防治,2008(4):5-8.

[7] 宋立,宁宜宝,沈建忠,等.中国不同年代食品动物大肠杆菌耐药性调查研究[J].中国科学 C辑:生命科学,2009(7):692-698.

[8] 徐继英,刘俊林,李先波,等.我国部分地区奶牛乳房炎源大肠杆菌生物学特性及耐药性分析[J].农业生物技术学报,2012,20(9):1 035-1 041.

[9] 刘健华,陈杖榴.喹诺酮类抗菌药耐药新机制[J].中国兽医杂志,2007,43(1):54-57.