医用器械络合氯消毒液性能研究

李长青 高珊 肖潇 高迪

医用器械络合氯消毒液(由北京万金兆元消毒技术有限公司提供)是以二氯异氰尿酸钠为主要杀菌成分，辅助成分为增效剂、稳定剂和缓蚀剂。该器械消毒液为浅黄色有氯气味的液体，原液有效氯含量为4.90 g/L，pH值为12.74。为研究该消毒剂的消毒性能，在实验室条件下，于2017年1－6月对其杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果及影响因素、稳定性、腐蚀性和毒性进行了研究。现将结果报道如下。

1 方法［1］

1.1 稳定性试验 取密封包装的器械消毒液原液3份，分别置54℃恒温箱内存放14 d和37℃存放90 d。于存放前、后分别取样，测定有效氯含量，计算下降率。

1.2 金属腐蚀性试验 将不锈钢、铜、铝和碳钢制成直径(24±0.2)mm、厚1.0 mm、中间有一直径2.0 mm小孔的圆片。用120号粒度水砂纸磨去表面氧化层，经洗涤剂浸泡10 min，洗净;用无水乙醇再次脱脂。置50℃干燥1 h，称重(精确至0.1 mg)后浸泡于该器械消毒液原液中(200 mL/片)。连续浸泡72 h后，取出金属片，用蒸馏水和软毛刷反复洗净，滤纸吸干，置50℃干燥1 h后称重，计算腐蚀速率(R)。

1.3 染菌载体制备 取枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽孢(由军事医学科学研消毒检测中心提供)。按规定程序培养制备芽孢悬液，用胰蛋白胨肉汤(TSB)制备成试验浓度芽孢悬液。取芽孢悬液10 μL滴染在无菌不锈钢圆片上(直径15 mm、厚0.5 mm)，置37℃温箱烘干，制成染菌载体菌片备用。

1.4 中和剂鉴定试验 以枯草杆菌黑色变种芽孢为代表，设6组试验，按载体定量杀菌试验程序进行。试验结果，当第1组不长菌或菌数远少于第2组，第2组菌数≥100 cfu/片，第3、4、5组组间菌数相差≤10%时，第6组不长菌时，表明所用中和剂及其浓度适宜。

1.5 杀菌试验 ①载体浸泡定量杀菌试验。按每个菌片5 mL消毒液用量，将盛有消毒液(阳性对照为PBS)的平皿置19～21℃水浴中恒温，再将菌片浸入消毒液中。作用至预定时间，将菌片移入含5.0 mL中和剂溶液的试管中，中和作用10 min，经充分振荡洗脱，取洗脱液或其稀释液作活菌计数，计算杀灭对数值。试验重复3次。②载体浸泡定性灭菌试验。试验条件和过程同载体浸泡定量杀菌试验。作用至预定时间，将菌片移入含5.0 mL中和剂TSB溶液的试管中，经充分振荡混合，置于37℃条件下培养7 d观察结果。试验重复5次。结果以阳性对照组有菌生长且回收菌数对照组符合要求，阴性对照组无菌生长，5次试验均无菌生长为灭菌合格。

1.6 有机物影响试验 在枯草杆菌黑色变种芽孢悬液中加入体积分数25%和50%小牛血清，用其滴染菌片。用有效氯含量2 000 mg/L的该器械消毒液进行载体浸泡定量杀菌试验，计算杀灭对数值，观察有机物对杀菌效果的影响。

1.7 医疗器械模拟现场试验 ①医疗器械消毒模拟现场试验。载体为截断的止血钳关节部位，将枯草杆菌黑色变种芽孢菌悬液滴染在载体朝上的齿部，干燥后进行试验。将盛有消毒液(阳性对照为PBS)的平皿置19～21℃水浴上恒温，按每件样品浸泡10 mL消毒液用量将染菌载体浸没于消毒液中。作用至规定时间，分别将染菌载体移入含10.0 mL中和剂溶液的塑料管中，中和作用10 min，经充分振荡洗脱，取洗脱液或其稀释液作活菌计数，计算杀灭对数值。重复试验30份。②医疗器械灭菌模拟现场试验。试验条件和过程同医疗器械消毒模拟现场试验。作用至规定时间，分别将染菌载体移入含10.0 mL中和剂肉汤的试管中进行定性培养7 d。试验重复3次。

1.8 连续使用稳定性试验 将清洁的医用止血钳置于2 000 mL消毒液中，达满载要求。每日将止血钳取出、洗涤、沥干、在空气中暴露后再放入，连续使用7 d。分次吸取浸泡后的器械消毒液，作定量和定性杀灭枯草杆菌黑色变种试验，观察其杀灭效果变化情况。

1.9 毒理学评价 ①小鼠急性经口毒性试验:选体重18～22 g清洁级昆明种小鼠20只(由斯贝福(北京)实验动物科技有限公司提供，实验动物生产许可证号:SCXK(京)2014－0006)，随机分成2组，每组10只，雌、雄各半，实验前禁食(只给饮水)过夜。采用一次最大限度试验法，设10 000 mg/kg(体质量)1个剂量组，按0.1 mL/10 g(体质量)一次性灌胃给药。给药后正常饲养，连续观察14 d，记录中毒表现及死亡情况，计算LD50。②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验:选体质量25～30 g清洁级昆明种小鼠50只(来源同1.9①)，随机分成5组，每组10只，雌、雄各半。共设 5 000、2 500、1 250 mg/kg(体质量)3 个剂量组，另设阳性对照组给予环磷酰胺40 mg/kg(体质量)，阴性对照组以去离子水灌胃给药。受试物均采用经口灌胃30 h染毒法，在0、24 h各给药1次。第二次给药后6 h，常规取胸骨制片固定、染色，于油镜下对每只动物观察1 000个嗜多染红细胞(PEC)，记录观察200个PEC同时出现的成熟红细胞数(NEC)，计算微核细胞率，并采用χ2检验进行统计分析。

2 结果

2.1 稳定性试验结果 经检测，该器械消毒液原液有效氯含量为4.90 g/L，经54℃恒温存放14 d后，有效氯含量下降率平均为3.47%;经37℃恒温存放90 d后，有效氯含量下降率平均为7.76%。

2.2 金属腐蚀性试验结果 用该器械消毒液原液浸泡金属片72 h后，对不锈钢、碳钢、铜、铝片平均腐蚀速率依次为0.000 0、0.004 8、0.001 5 和0.0 046 mm/a;结果表明，该器械消毒液对以上四种金属基本无腐蚀。

2.3 中和剂试验结果 用含5 g/L硫代硫酸钠、10 g/L吐温－80的PBS作为中和剂，可有效中和含有效氯为4 000 mg/L的该器械消毒液对枯草杆菌黑色变种芽孢的残留作用，且中和剂、中和产物对试验菌生长无明显影响。

2.4 杀菌试验结果 用有效氯含量为1 000 mg/L该器械消毒液作用10 min，有效氯含量为2 000 mg/L作用5 min，对载体上枯草杆菌黑色变种芽孢的平均杀灭对数值分别为3.31和4.27(表1)。用有效氯含量为2 000 mg/L该器械消毒液作用20 min，有效氯含量为4 000 mg/L作用10 min，对载体上枯草杆菌黑色变种芽孢可达到完全杀灭(表2)。

表1 器械消毒液对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果

表2 器械消毒液载体浸泡定性灭菌试验结果

2.5 有机物影响试验结果 在枯草杆菌黑色变种芽孢悬液中加入体积分数25%和50%小牛血清制备染菌载体，经含2 000 mg/L有效氯的器械消毒液作用不同时间，显示有机物对器械消毒液杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果有轻度影响(表3)。

表3 有机物对器械消毒液杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢的效果影响

2.6 模拟现场试验结果 结果表明，用有效氯含量为2 000 mg/L该器械消毒液作用10 min，对污染于止血钳关节部位上枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值均＞3.57;有效氯含量为4 000 mg/L作用20 min，对该细菌芽孢可达完全杀灭。

2.7 连续使用稳定性试验结果 用含有效氯为2 000 mg/L的器械消毒液连续浸泡器械7 d后，取浸泡液进行载体定量杀菌试验，作用10 min，对污染于止血钳关节部位上枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值均＞3.07。用含有效氯为4 000 mg/L的器械消毒液连续浸泡器械7 d后，取浸泡液进行载体定性杀菌试验，作用20 min，对该细菌芽孢可达完全杀灭。

2.8 毒性试验结果 ①小鼠急性经口毒性试验结果。试验期内受试动物生长良好、进食正常，无中毒症状及死亡，小鼠经口 LD50＞10 000 mg/kg(体质量)，属实际无毒级。②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果。受试物各剂量组动物微核细胞率均在正常范围内，阳性对照组微核细胞率与阴性对照组比较，差异有极显著性(P＜0.01);PCE/NCE均值在正常范围内;结果表明，微核试验结果阴性。

3 讨论

3.1 以二氯异氰尿酸钠为主要杀菌成分的该器械消毒液主要采用了增效剂、稳定剂和缓蚀剂复配而成。在碱性条件下(pH＞10)，配方中的某些成分与氯离子形成了络合物，该络合物性质比较稳定，与溶液中的次氯酸(HCIO)和次氯酸根(CLO－)保持着动态平衡。配方中的某些成份与氯络合反应后，在特定条件下，可能在金属表面形成一种极薄的“钝化膜”和“氧化膜”物质，使金属表面的电极电位等于或接近零，这样金属表面没有了电位差，也就停止了电池现象的电子转移了，从而大大降低了腐蚀性。因而该器械消毒液表现出腐蚀性低、性能稳定、耐储存，在37℃储存3个月其有效氯下降率＜10%。

3.2 该器械消毒液属于含氯消毒剂，由于其pH值比较高，不利于氯的活化［2］，因此杀菌所需有效氯剂量较大。本研究结果表明，该器械消毒液在常规使用浓度下对载体上细菌芽孢具有较好的杀灭效果;經毒性试验证明属实际无毒级物质微核试验结果阴性，毒性低，此可能与产品的配方有关，需进一步研究。

［1］卫生部.消毒技术规范［S］.(2006－02－09).http://www.nhfpc.gov.cn/zhjcj/s9139/200804/86d017920ad84 e64a90806717719624f.shtml.

［2］杨华明，易滨.现代医院消毒学［M］.北京:人民军医出版社，2008:126－130.