某规模猪场免疫抗体水平及抗原检测分析

许小康 ，邓贤才 ，邓琍 ，陈茂金 ，黄萃 ，邬向东 *

（1.万年县裴梅动物防疫检疫站，江西上饶 335500；2.江西农业大学兽医院；3.江西农业大学动科院）

目前我国规模化猪场几乎都有自家的猪场疫病免疫程序，对重要传染病进行有计划的免疫接种，这对防控烈性传染病的暴发起到了至关重要的作用。但仍有部分猪场疫情不稳定，尤其是在保育阶段常出现或大或小的问题。针对猪群的不稳定，为查找原因，一般可采血清样本进行免疫抗体水平的监测，可以了解注射疫苗免疫的免疫效果；同时对病死猪淋巴结、肺脏和脾脏等病料进行重要疫病病原检测，对判断疫情具体重要参考意义。2017年3月，江西省某规模猪场保育猪群出现疫情，随即送检了31份血清样本和3头患病仔猪到江西农业大学兽医院，分别进行了重要疫病免疫抗体水平和抗原的检测。发现其猪瘟抗体、伪狂犬总抗体、蓝耳病毒抗体均很高；但伪狂犬野毒抗体阳性率也在75%以上，蓝耳抗体参差不齐。病原基因检测结果，未检测到猪瘟病毒和变异蓝耳病毒基因，但检测到伪狂犬病毒基因和经典蓝耳病毒基因。初步判断该病疫情与蓝耳、伪狂犬野毒感染相关，现将其具体分析报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样本：31份全血样本，来自猪场经产母猪（19 头）、公猪（6 头）、产床仔猪（3 头）和保育猪（3头）。离心，弃沉淀，取上清为待检测血清样本。

1.1.2 病料：无菌操作采集病死保育猪脾脏、肺脏以及淋巴结等病料，一共3头。

1.1.3 抗体检测试剂盒：试剂盒均购自美国Idexx公司。

猪瘟抗体检测ELISA试剂盒，批号：99-43220-H641；猪蓝耳抗体检测ELISA试剂盒，批号：40959-H461，猪伪狂犬总抗体（gB抗体）检测ELISA试剂盒，批号09732-EM176，猪伪狂犬野毒抗体（gE抗体）检测ELISA试剂盒，批号：09836-GM453。

1.1.4 细菌分离所需鲜血培养基，由实验室参照文献［1］自行配制并保存。

1.1.5 病毒基因PCR检测引物，由江西农业大学兽医院设计并保存。

1.1.6 PCR检测试剂，购自Shanghai Promega公司产品。

1.2 方法

1.2.1 细菌分离：无菌钩取病料，划线接种于鲜血培养基，置37℃恒温生化培养箱中培养24h，观察结果。

1.2.2 免疫血清抗体检测：参照试剂盒说明书进行操作。

1.2.3 病料中病毒基因检测：DNA病毒采用PCR方法；RNA病毒采用RT-PCR方法。

对伪狂犬病毒、圆环病毒等DNA病毒，采用PCR方法进行检测，先从病料中提取DNA，再进行PCR扩增，最后进行核酸电泳，观察结果。

对猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪变异蓝耳病毒等RNA采用RT-PCR方法检测，先从病料中提取RNA，再以总RNA为模板，反转录扩增cDNA，然后以cDNA为模板，进行PCR扩增，最后进行核酸电泳，观察结果。具体方法参见分子克隆实验指［2］。

2 结果

2.1 细菌分离结果

血平板上没有细菌生长，细菌分离均为阴性。

2.2 免疫血清抗体检测结果

猪瘟抗体24头合格、蓝耳抗体29头阳性、伪狂犬gB抗体全合格、伪狂犬gE抗体24头阳性，阳性率分别为77.42%、93.54%、100%、77.42%（具体见表 1、图 1）。

表1 免疫血清抗体检测结果

图1 不同猪群重要疫病免疫抗体阳性率

2.3 病原基因检测结果

电泳见图2，结果显示送检3头仔猪蓝耳病毒和圆环病毒检测全阳性（+），变异蓝耳病毒、猪瘟病毒全阴性 （-），2头仔猪伪狂犬病毒阴性、1头阳性（+）。

图2 样品PCR结果

3 小结与讨论

3.1 本次对送检31份全血样本提取血清，分别检测了猪瘟抗体、伪狂犬总抗体和野毒抗体、蓝耳病毒抗体；对3头仔猪分别检测了猪瘟病毒、经典蓝耳病毒、变异蓝耳病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒。结果：猪瘟抗体全群合格率77.42%、平均阻断率57.16%、变异系数31.88%；蓝耳抗体阳性率93.55%、平均S/P值1.308、变异系数55.72%；伪狂犬总抗体（gB抗体）全合格，合格率100%；伪狂犬野毒抗体 （gE抗体）阳性率77.42%、平均S/N值0.326、变异系数108.18%。猪瘟、变异蓝耳全阴性；伪狂犬2头阴性、1头阳性；经典蓝耳病毒和圆环病毒全阳性。

3.2 分猪群来看，猪瘟病毒抗体水平种猪较高，母源抗体水平高，因而哺乳仔猪抗体水平也比较高，但到保育猪出现一个明显的下降，这与猪群在保育发病情况是一致的。估计可能是疫情出现导致免疫力下降，仔猪在第一次免疫猪瘟疫苗后，抗体产生受到抑制。蓝耳病毒和伪狂犬野毒抗体全群抗体水平均很高，尤其蓝耳病毒抗体水平特别高，而且变异系数比较大，说明抗体水平参差不齐。还有2头（1头公猪和1头母猪）蓝耳病毒抗体S/P值已经超过2.5，根据试剂盒的应用经验提示猪群有蓝耳野毒感染。这与3头发病仔猪均查出经典蓝耳病毒是一致的。

3.3 根据检测结果，初步判断本次疫情应是蓝耳病毒感染导致猪群免疫力下降（也表现在保育仔猪猪瘟抗体水平明显下降），猪群伪狂犬野毒感染压力大，免疫力下降也导致伪狂犬零星发生，圆环病毒普通感染。综合因素作用下，疫情出现。但疫苗的效果还是有的，所以没有出现大的疫情暴发，但猪群一到保育阶段就不稳定，生长速度减慢、消瘦、腹泻等症状出现，死亡数量增加。

3.4 本次疫情的控制，还是通过综合措施得以实现。针对疫情，主要采取加强饲养管理的基础上，进行药物保健，同时进行适度蓝耳疫苗和伪狂犬疫苗的免疫，最终将疫情控制。但伪狂犬野毒感染在普遍的情况下，猪群仍是处于比较危险状况中，建议猪场对后备种猪进行伪狂犬病的逐步净化，才是长久之计。

参考文献：

［1］胡桂学主编，兽医微生物学实验教程 （第二版）［M］，北京：中国农业大学出版社出版，2016.

［2］ J.萨姆布鲁克（Sambrook.J.），D.W.拉塞尔著；黄培堂等译，分子克隆实验指南（第三版）［M］，北京：科学出版社，2008.

［3］何海健，张传亮，陆国林，等.不同年龄猪群中猪瘟抗体监测及免疫效果分析［J］.中国预防兽医学报，2012（7）：573～575.

［4］刘永波，宋春莲，谢相悦，等.云南4个规模化猪场猪瘟抗体水平监测及免疫效果分析［J］.中兽医学杂志，2017（1）：84～86.

［5］郑春芳，雷元顺，于桂阳，等.湖南永州某县猪瘟抗体水平效价低的原因分析及改进措施［J］.中国动物检疫，2013（1）：50～52.