卡托普利-地高辛缓速释双层片的初步药动学研究

马晓星，徐 涛

(齐齐哈尔医学院 药学院, 黑龙江 齐齐哈尔 161006)

卡托普利(captopril，CAP)是血管紧张素转换酶抑制剂, 通过阻断血管紧张素I转变成具有高活性的血管紧张素Ⅱ，从而使血管紧张素Ⅱ的水平降低,起到扩张周围血管、减轻钠水储留、保钾保镁作用,减轻心脏后负荷,增加心脏排出量,营养心肌。地高辛(digoxin，DIG)是治疗心衰的正性肌力药,通过增加心肌细胞内Ca2+，增强心肌收缩力，兴奋迷走神经，减慢房室结的传导，减慢心率。文献报道，临床上使用卡托普利与地高辛联合治疗充血性心力衰竭，口服地高辛达后，加服卡托普利，地高辛可使心室容积及张力下降，不增加或降低总耗氧量，但地高辛不减轻前后负荷。而卡托普利能改善充血性心力衰竭患者的心脏功能，通过降低血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮水平而使心脏前后负荷减轻，二者联合用药比单用一种疗效更佳，作用加强，病程减短，是治疗心衰的首选药物[1-3]。卡托普利半衰期短，给药频繁，从而带来临床用药的不方便性。国外已有CAP缓释胶囊上市，国内上市的有卡托普利缓释片。地高辛起效慢，为提高地高辛在其安全范围内的释药速度，快速达到有效血药浓度，有报道将其制成分散片[4-5]。为此，根据临床用药特点及药物性质，本项目研制卡托普利-地高辛缓速释双层片，既能体现联合用药的优势，提高疗效，又能减少患者服药次数，提高其顺应性。

1 材料

1.1 药品与试剂

地高辛(武汉拉那白医药化工有限公司，批号：130405)；卡托普利(武汉拉那白医药化工有限公司，批号：130513)；卡托普利缓释片(上海凯宝药业股份有限公司，批号：111003)；地高辛(上海信谊药厂有限公司生产,批号：20140206)；甲醇(色谱纯，天津市福晨化学试剂厂)；乙腈(色谱纯，天津市光复精细化工研究所)。

1.2 实验动物

10只家兔(雄性)，体重平均 2.5 kg，购于辽宁医学院实验研究中心，动物实验许可证号：SYXK(辽)2014-0005。

1.3 仪器

集热式恒温加热磁力搅拌器(DF-101S，河南省于华仪器有限公司)；真空干燥箱(DZF6050，上海博远实业有限公司)；溶出度测定仪(RC-6，天津市光学仪器厂)；单冲压片机(TDP，上海第一制药机械厂)；高效液相色谱仪(D-1200，广州菲罗门科学仪器有限公司)；台式高速离心机(TG22-WS，上海赵迪生物科技有限公司)；超声清洗仪(KQ-250DE，昆山市超声仪器有限公司)

2 方法与结果

2.1 卡托普利-地高辛缓速释双层片的制备

根据国内外文献报道，临床观察显示[2-3，6]：口服地高辛，每日1次，加服卡托普利，每日3次，每次12.5mg，确定双层片剂量:每片含卡托普利37.5mg，地高辛0.25mg。

卡托普利缓释层处方：卡托普利3.75g，HPMC 14g，MCC 7.3g，硬脂酸镁0.2g，7%淀粉浆适量，制成100片。缓释层制备工艺：称取上述处方量原料药和辅料混匀，加淀粉浆制软材，过16目筛制粒，50℃干燥，18目筛整粒，加硬脂酸镁0.2g混匀。

地高辛速释层处方：载药颗粒9.6g，L-HPC4.5g，硬脂酸镁0.15g，制成100片。速释层制备工艺：称取地高辛0.3g，溶于400ml75%乙醇中，喷于100g空白颗粒，得载药颗粒，取载药颗粒10g与L-HPC、硬脂酸镁混匀。压制过程：先预压卡托普利缓释层，再填加速释层。

2.2 家兔体内初步药动学研究

2.2.1 色谱条件[7-8]

卡托普利：色谱柱：Agilent C18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相：乙腈-1%醋酸(45：55)，流速1.0ml·min-1。检测波长：257nm。柱温：38℃。

地高辛：Agilent C18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相：甲醇-水( 60：40)。流速：1.0ml·min-1。检测波长：220nm。柱温：室温。

2.2.2 血浆样品的处理

卡托普利：取500ul血浆, 加30ul呋塞米，加50 ulNaOH (0.1mol·L-1)旋涡混合30s, 室温避光放置30min后, 加100μl1mol·L-1HCl溶液, 再加pH4.0缓冲液150μl混合15s, 加2.5ml萃取液(乙酸乙酯-苯=1:1), 旋涡2min,离心(2000r·min-1，10min)，取有机相，40℃氮气吹干, 残渣用50μl流动相溶解后进样20μl。

地高辛：取血浆500μl，加呋塞米50μl，混合均匀，加1 mol·L-1硫酸溶液100μl，然后加提取液2ml(丙醇：氯仿=1：5)，旋涡振荡5min，置离心机中，3000r·min-1离心，待分层后，吸取下清液，移至试管中；样品再加提取液2ml，重复萃取一次，合并萃取液，置37℃水浴氮气吹干，残渣用100μl流动相溶解，取20μl进样。

2.2.3 方法学研究

2.2.3.1 标准曲线的制备

卡托普利标准曲线：取空白血浆500 ul，加入30 μl浓度为6.25，12.5，25，50，100，200，400ug·ml-1的标准溶液，进行血样处理，以卡托普利浓度(C)为横坐标，卡托普利峰面积与内标物峰面积比值为纵坐标，加权最小二乘法(W=1/X2)进行回归，得回归方程A=0.00099C+0.00658(r=0.9990)。结果表明，血浆中卡托普利浓度在5～400ng·ml-1范围内线性良好。

地高辛标准曲线：取空白血浆500ul，加入10μl浓度为0.49，0.97，1.23，2.43，3.64，4.7，9.1ng·ml-1的标准溶液，进行血样处理，以地高辛浓度(C)为横坐标，地高辛峰面积与内标物峰面积比值为纵坐标，加权最小二乘法进行回归，得回归方程A=0.0462C-0.00556(r=0.9990)。结果表明，血浆中地高辛浓度在0.4～10ng·ml-1范围内线性良好。

2.2.3.2 方法专属性考察

对空白血浆、空白血浆加内标和对照品、给药后血浆进行专属性试验，结果见图2、图3，表明血浆中杂质不影响药物和内标物的测定。

图2 空白血浆(A)，空白血浆加卡托普利和呋塞米(B)，给药后含药血浆(C)的HPLC色谱图

图3 空白血浆(A)，空白血浆加地高辛和呋塞米(B)，给药后含药血浆(C)的HPLC色谱图

2.2.3.3 精密度试验

分别配制4，100，400ug/ml的卡托普利标准血样和0.5，2，10ng/ml的地高辛标准血样，每个浓度制备并测定5个样品，3d连续制备并测定3批。计算卡托普利批内及批间精密度RSD分别为0.71%，0.93%，0.35%和1.05%，1.14%，0.81%；地高辛批内及批间精密度RSD分别为1.18%，0.58%，0.39%和1.13%，0.99%，1.01%，符合测定要求。

2.2.3.4 回收率

分别配制4、100、400ug/ml卡托普利标准血样和0.5、2、10 ng/ml地高辛标准血样，每个浓度制备并测定5个样品，3d连续制备并测定3批。同时，另取空白血500μl，不加内标溶液，处理血样分析。考察样品及其内标的回收率。卡托普利3个浓度的回收率分别为93.72%，95.01%，94.76%；地高辛3个浓度的回收率分别为90.26%，95.19%，92.88%，符合测定要求。

2.2.3.5 样品稳定性

配制 4，100，400ug/ml卡托普利标准血样和0.5，2，10 ng/ml地高辛标准血样，分别室温放置1，3，5d，处理血样，进样测定。结果卡托普利和地高辛RSD均小于2%(n=3)，表明血浆样品在上述条件下均稳定。

2.2.4 给药方案与血样采集

取10只家兔，体重平均2.5 kg，给药前禁食，4h后可进食，自由饮水。随机分成两组，每组5只，一组给卡托普利和地高辛市售片，一组给卡托普利-地高辛缓速释双层片。

给药后于20、45、60、120、240、360、480、600、720、1440、2160、2880min耳缘静脉取血2ml，置于含有肝素的离心管中。离心(3000r·min-1,8 min)，取血浆于-20℃冰箱中保存待测。将待测血样按照“2.2.1”项下HPLC法计算血浆中地高辛及卡托普利含量，绘制血药浓度-时间曲线，见图4、图5，同时利用PKSolver 2.0软件计算出药动学参数，见表1、表2。

图4 卡托普利血药浓度-时间曲线图

图5 地高辛血药浓度-时间曲线图

ParameterUnit地高辛市售地高辛自制t1/2min1828.80±0.56344.43±0.94Tmaxmin60.00±1.9160.00±0.42Cmaxng/ml635.39±0.341285.60±9.26AUC0-tng/ml∗min111143.67±9.62417024.70±4.19AUC0-inf＿obsng/ml∗min114634.89±23.25418284.22±44.89

表2 自制制剂与市售制剂中卡托普利在家兔体内的部分药动学参数

结果显示，自制片中卡托普利和地高辛的AUC(0-∞)、Tmax、Cmax与市售片比较均有一定程度的增加；计算得相对生物利用度分别为(152.45±9.11) %和(375.21±13.11)% (相对生物利用度=AUC自制/AUC市售×100%)；相对于市售片，自制片显著提高了药物口服生物利用度，二者具有一定的协同作用。

3 讨论

缓速释双层片的制备，采用湿法制粒压片制备卡托普利缓释层，释放度测定具有一定的缓释作用；空白颗粒法制备地高辛速释层，地高辛快速溶出；压制过程中，先预压卡托普利缓释层，再填加速释层，最后加入少量乳糖，制得的双层片完整，光泽度好，两层不宜裂开，且硬度符合要求。

本实验建立了HPLC法测定家兔血浆中地高辛和卡托普利浓度，方法学研究结果表明，该方法准确、可靠、简便，能够满足药动学研究要求。

通过家兔体内的药动学初步研究证实卡托普利-地高辛缓速释双层片中两种药物的AUC(0-∞)、Tmax、Cmax均呈现一定程度的增加，且卡托普利具有缓释作用；相对生物利用度与市售制剂比较也都有所提高，二者产生了一定的协同作用，这种协同作用的产生与临床上对于二者联合应用的文献报道相一致[9-11]，因此，考虑复方制剂可适当减少用药剂量，具体应再进一步进行组方筛选，但产生这种协同作用的机制有待进一步研究，以更好地为临床合理用药提供理论依据。

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