水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量测定的标准方法改进研究

朱宗梅 汪葵阳 吴光洪

（江西省乐平市农业局，江西乐平 333300）

1 试验原理

淡水样品经无水硫酸钠脱水后由酸化乙腈提取，离心，取上清液加正己烷除脂。旋蒸提取液，流动相溶解定容，离心取上清液，经微孔滤膜上高效液相荧光检测器测定，外标法定量。

2 试验仪器、设备和材料

高效液相色谱仪（岛津LC-20AB），配荧光检测器；高速组织捣碎机、旋转蒸发仪、高速离心机、振荡器，10 mL具塞带刻度离心管、100 mL具盖朔料离心管，150 mL三角烧瓶、100 mL分液漏斗、0.45 μm微孔滤膜及其他。

3 试验设计与方法

本试验以草鱼（由江西省乐平市为民生态渔业养殖合作社提供）为样品材料，分2组，Ⅰ组以农业部783号公告-2-2006标准方法进行前处理，Ⅱ组以改进方法进行前处理。两组分别准确称取4份5.00 g糜状鱼肉，1个本底BD和3个平行A、B、C，3个平行样同时添加0.02 mg/kg的盐酸环丙沙星标准样品（农业部环境保护科监制100 μg/mL，1 mL）。

3.1 Ⅰ组方法前处理 用三角烧瓶称取4份样品，依次加入30 g无水硫酸钠（640 ℃灼烧4 h，以下同）和30 mL酸化乙腈（50%HCl/乙腈=125/1，以下同）后高速匀浆机匀浆，放入两三粒玻璃珠置于120 r/min振荡器15 min，再转入离心管中4 500 r/min离心15 min，取上清液置于分液漏斗中。往残渣中加入30 mL酸化乙腈重复上述操作一次，上清液合并于分液漏斗中。向分液漏斗加25 mL正己烷（分析纯，以下同），振荡5 min，充分静置，取下层乙腈移入烧瓶，55 ℃旋转蒸发至干。用1.0 mL流动相充分溶解残渣，移入1.5 mL离心管，4 500 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μm微孔过滤膜装瓶供高效液相色谱仪测定。

3.2 Ⅱ组方法前处理 用100 mL离心管称取4份样品，依次加入30 g无水硫酸钠和30 mL酸化乙腈后高速匀浆机匀浆，再7 500 r/min离心10 min，取上清液置于另一个100 mL离心管中。往残渣中加入30 mL酸化乙腈重复上述操作一次，上清液合并于100 mL离心管中。向离心管加25 mL正己烷，涡旋2 min，再5 000 r/min离心5 min，用一次性滴管移去上层正己烷，转入100 mL鸡心瓶中，55 ℃旋转蒸发至干。用1.0 mL流动相充分涡旋溶解残渣，移入1.5 mL离心管，4 500 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μm微孔过滤膜装瓶供高效液相色谱仪测定。

4 结果与分析

仪器条件为流动相为乙腈（色谱纯）/四丁基溴化铵（分析纯）溶液（0.01 mol/L）=5/95（V/V），反相色谱C18柱（150.0 mm×4.6 mm），流速1.5 mL/min，激发波长280 nm，发射波长450 nm，进样量20 μL，柱温40 ℃的条件进行高效液相色谱仪测定，结果见表1。

分析结果可知，改进方法Ⅱ组的回收率是81.3%，比Ⅰ组方法的回收率76.3%高；Ⅱ组的精密度（相对标准方差）3.15好于Ⅰ组的4.07，稳定性也好；而且改进方法的前处理具有操作简单、检测速度快等特点。原因是转管次数较少，尽可能地回收了残留物，离心分层快，批量处理占用空间较小。改进方法具有显著的效果和效率。

表1 不同前处理方法下盐酸环丙沙星残留量测定结果

5 试验问题与注意事项

一是用一次性滴管移去上层正己烷时要小心，移到最后要看清滴管中分层，下面的要放回去；二是该试验仅测定了环丙沙星，需要验证诺氟沙星和恩诺沙星是否有同样的效果；三是环丙沙星的添加浓度是0.02 mg/kg，未做浓度梯度，以后要继续加以验证；四是往残渣中加入30 mL酸化乙腈时应先洗上次匀浆机刀头，尽量回收残留。