脑胶质瘤患者血清miR-720、miR-29c表达及临床意义

周景儒，王栋梁，刘志，武广永， 刘如恩

(北京大学人民医院，北京100044)

脑胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，源于神经上皮组织，患者预后较差。微小RNA(miRNA)属于非编码RNA，是长度19～25个核苷酸的小RNA分子，其序列具有高度保守性[1～3]。研究发现，脑胶质瘤组织中存在多种 miRNA异常表达[4,5]。本研究观察了miR-720和miR-29c在脑胶质瘤患者血清中的表达变化，现分析结果，探讨其在脑胶质瘤发生、发展中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选取2013年1月～2017年1月我院收治的脑胶质瘤患者87例(胶质瘤组)，男54例、女33例，年龄37～68(48±9)岁；星形胶质细胞瘤27例，少突胶质细胞瘤32例，少突星形细胞瘤28例；Ⅰ～Ⅱ级58例，Ⅲ～Ⅳ级29例；肿瘤位于额叶32例、颞叶21例、其他部位16例，肿瘤位于多个脑叶18例。纳入标准：手术切除肿瘤，术后经病理诊断证实为脑胶质瘤；术前未接受放疗、化疗；临床病理资料完整；完成12个月的随访。排除标准：合并其他系统恶性肿瘤；合并慢性疾病(如冠心病、高血压、糖尿病等)；合并感染性疾病。选择同期体检健康者50例为对照组，男32例、女18例，年龄33～70(52±12)岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2血清miR-720和miR-29c表达检测分别采集胶质瘤组手术前后及对照组清晨空腹肘静脉血10 mL，3 000 r/min离心10 min，收集血清。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-720和miR-29c表达。具体步骤：取血清样本，采用mirVanaTMPARISTM试剂盒(Ambion-560)提取血清总RNA，超微量核酸蛋白测定仪(ND-2000)检测RNA浓度及纯度，DNAase Ⅰ酶去除DNA，TaqMan microRNA RT试剂盒进行反转录，反应体系和反应条件参照试剂盒说明书。引物及探针序列：hsa-miR-720：UCUCGCUGGGGCCUCCA；hsa-miR-29c：TAACCGA-

TTTCAAATGGTGCTA。目标基因探针和内参基因探针均为5′端采用FAM报告荧光标记，3′端采用TAMRA淬灭荧光标记。PCR反应体系：4.5 μL反转录产物，0.5 μL TaqMan microRNA assay (5×)，5.0 μL TaqMan Mix。PCR反应条件：95 ℃预热5 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，循环40次。采用相对定量法(2-ΔΔCt法)计算相对表达量。分别以血清miR-720、miR-29c相对表达量的平均值为界限，≥平均值为高表达，<平均值为低表达。分析血清miR-720、miR-29c表达与脑胶质瘤患者临床病理特征及预后的关系。

2　结果

2.1两组血清miR-720、miR-29c表达比较胶质瘤组术前、术后血清miR-720相对表达量均高于对照组，血清miR-29c相对表达量均低于对照组。胶质瘤组术后血清miR-720相对表达量低于术前，miR-29c相对表达量高于术前；组间及组内比较P均<0.05。见表1。胶质瘤组miR-720高表达者47例、低表达者40例，miR-29c高表达者42例、低表达者45例。

2.2血清miR-720、miR-29c表达与脑胶质瘤患者临床病理特征的关系脑胶质瘤患者血清miR-720表达与肿瘤分化程度呈负相关，即分化水平越高，血清miR-720相对表达量越低(P<0.05)；血清miR-29c表达与肿瘤分化程度呈正相关，即分化水平越高，血清miR-29c相对表达量越高(P<0.05)；血清miR-720、miR-29c表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理类型、肿瘤位置、KPS评分均无关(P均>0.05)。见表2。

表1　两组血清miR-720、miR-29c相对表达量比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与同组术前比较，△P<0.05。

表2　　　　血清miR-720、miR-29c表达与脑胶质瘤患者临床病理参数的关系

2.3血清miR-720、miR-29c表达与胶质瘤患者预后的关系观察组miR-720高表达者与低表达者1年生存率分别为74.37%、92.50%，二者比较χ2=4.924、P=0.026。miR-29c高表达者与低表达者1年生存率分别为92.86%、73.33%，二者比较χ2=5.803、P=0.016。

3　讨论

脑胶质瘤呈浸润性生长、通常与正常脑组织无明显界限，导致常规影像学、血常规等检查手段不能精准地进行诊断和评估病情[6]。

miRNA可与靶基因信使RNA(mRNA)的3′-非翻译区(3′-UTR)特异性结合，抑制蛋白翻译，从而参与细胞分化、增殖等生物过程。研究证实，在脑胶质瘤中存在多种miRNA异常表达[7]，如miR-137可靶向EZH2基因，参与脑胶质瘤的增殖和血管形成[8，9]。miR-720不是经典的miRNA，很可能是一种来源于转运RNA(tRNA)的miRNA[9]。在正常生理状态下，miR-720在内皮生长和牙髓细胞分化等过程中发挥作用[10]。研究证实，miR-720在人类肿瘤中表达异常，如在宫颈癌中miR-720表达显著增加，参与宫颈癌的发生发展[11]；血清miR-720可以作为人结肠癌[12]和骨髓瘤[13]的血清标志物。本研究结果显示，脑胶质瘤组血清miR-720水平显著高于对照组，术后血清miR-720水平较术前降低，且血清miR-720水平与肿瘤分化程度呈正相关，miR-720高表达患者的近期预后较差；提示miR-720高表达参与并促进了脑胶质瘤的肿瘤形成和恶性进展过程，miR-720可以作为评估脑胶质瘤恶性程度及患者预后的重要参考指标。Li等[14]发现，miR-720在乳腺癌中表达降低，且其低表达与淋巴结转移、患者预后有明显的相关性；与本研究在脑胶质瘤中的研究结果不一致。可能原因为miRNA通过靶向调节不同功能的基因表达，进而发挥完全不同的生物学效应。

miR-29c是miR-29家族的重要成员，在多种肿瘤中处于低表达状态、发挥抑癌基因的功能，如在肝细胞癌中，miR-29c靶向TNFAIP3基因，进而抑制细胞生长和诱导细胞凋亡；在膀胱癌中，miR-29c通过靶向CDK6基因，抑制细胞生长转移、诱导细胞周期阻滞。有研究证实，在脑胶质瘤中miR-29c参与细胞对替莫唑胺的化疗敏感性[15]。Yu等[16]发现miR-29c在胃癌细胞表达水平较低，增加miR-29c表达可抑制NASP基因表达，进而促进细胞凋亡、诱导G1/G0期阻滞。本研究结果发现，与对照组相比，脑胶质瘤组血清miR-29c水平明显降低，术后血清miR-720水平较术前升高，且血清miR-29c水平与肿瘤分化程度呈负相关，miR-29c高表达患者的近期预后较好；提示miR-29c低表达参与并促进了脑胶质瘤的肿瘤形成和恶性进展过程，miR-29c可以作为评估脑胶质瘤恶性程度、患者预后的重要参考指标。

综上所述， miR-720高表达、miR-29c低表达共同促进了脑胶质瘤的发生及发展；血清miR-720、miR-29c具有作为脑胶质瘤生物靶标的潜能。

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