急性脑出血患者血清TSP-1/2、MMP-2/9水平变化及其与脑血肿量、脑水肿量的关系

朱明建，陈礼刚，李祥龙，杨福兵

(西南医科大学附属医院，四川泸州646000)

急性脑出血(ACH)后血肿组织周围常出现水肿，并可在ACH早期时形成，也是导致患者神经功能缺损不断加重的一个重要因素[1]。脑水肿的形成及进展由多种分子机制共同参与，而基质金属蛋白酶(MMP)可能也参与其中[2]。MMP成员MMP-2、MMP-9能够降解机体中血管的基底膜，还可促使中性粒细胞不断迁移，使局部的炎症反应不断加重，最终导致血脑屏障的结构受损而引起脑水肿。有报道指出，MMP表达还会受到血小板反应蛋白(TSP)的调控，提示血脑屏障被破坏的机制可能还与TSP调控有关[3,4]。TSP-1和TSP-2均为TSP家族成员[5]。本研究观察了ACH患者血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平变化，并探讨其与患者脑血肿量、脑水肿量的相关性。现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2014年9月～2017年9月我院收治的ACH患者95例为观察组。纳入标准：①符合我国第四届脑血管病学术会议上制定的关于ACH的诊断标准[5]；②经头颅CT检查确诊；③幕上脑实质的出血未进入脑室；④在发病前无外伤史；⑤无抗凝药物应用史。排除标准：①有脑部肿瘤或其他恶性肿瘤；②血液系统疾病；③存在血管畸形；④神经系统功能性缺陷；⑤其他全身性疾病。入组患者男41例、女54例，年龄32～75(54.67±2.34)岁，发病至入院时间1～10(4.94±0.33)h。合并高血压74例、糖尿病12例。另选同期我院体检健康者100例作为对照组，男49例、女51例，年龄30～72(54.59±2.28)岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2相关指标观察

1.2.1血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平分别在对照组体检当日、观察组入院当日抽取空腹静脉血约4 mL注入抗凝管内，4 ℃下3 000 r/min离心15 min，分离血清。采用ELISA法检测血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9，试剂盒均购自武汉博士德公司，严格按试剂盒说明书操作。

1.2.2ACH患者脑血肿量、脑水肿量在一块10 cm×10 cm的透明塑料片中根据CT中比例尺长度，纵横绘制成垂直交错的检测方格，方格边长1 cm。根据体视学原理，方格直线交叉点表示面积为1 cm2。将检测系统叠放于CT片上，统计落于血肿和四周水肿带内的测点数目，累加每层血肿或者水肿中的测点数即为脑血肿量或脑水肿量(mL)。

1.2.3相关性分析采用Spearman法分析血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平与脑血肿量、脑水肿量的关系。

2　结果

观察组血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均高于对照组(P均<0.05)，见表1。观察组脑血肿量、脑水肿量分别为(27.23±8.44)、(20.99±3.65)mL。Spearman相关性分析结果显示，观察组血清TSP-1与脑血肿量、脑水肿量均无相关性(P均>0.05)；TSP-2与脑血肿量呈负相关(r=-0.639，P<0.05)，与脑水肿量无相关性(P>0.05)；MMP-2与脑血肿量无相关性(P>0.05)，与脑水肿量呈正相关(r=0.582，P<0.05)；MMP-9与脑血肿量、脑水肿量均呈正相关(r分别为0.589、0.630，P均<0.05)。

表1　　　　两组血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

3　讨论

血管壁细胞外基质降解增强是ACH发生的重要病理生理基础[6,7]。研究证实，MMP参与降解机体各类组织细胞外基质的过程， 能够不断降解细胞外基质中含有的层粘连蛋白、纤维连接类蛋白及Ⅳ型胶原，导致细胞外基质蛋白密度降低[8,9]。MMP-2及MMP-9均为MMP家族的重要成员。TSP属于调节型基质糖蛋白家族，其是调控MMP表达的上游分子。

研究证实，正常的细胞既可分泌MMP，还可形成金属蛋白酶有关的组织抑制剂。但发生ACH后机体的MMP与金属蛋白酶有关组织抑制剂的动态平衡被打破，脑病变组织MMP-2及MMP-9水平明显上升[10,11]。TSP-1和TSP-2是一组结构及功能均高度相关的一类调节型基质糖蛋白有关家族成员，二者通常是由被激活的血小板和内皮细胞以及神经元、胶质细胞所分泌[12]。ACH患者颅内由于受到病变区环境的刺激，TSP-1和TSP-2的分泌均明显增加，但TSP-1还具有针对MMP的双重调控作用。本研究结果显示，观察组入院当日血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均高于对照组；观察组血清TSP-1与脑血肿量、脑水肿量均无相关性；TSP-2与脑血肿量呈负相关，与脑水肿量无相关性；MMP-2与脑血肿量无相关性，与脑水肿量呈正相关；MMP-9与脑血肿量、脑水肿量均呈正相关。提示ACH患者血清TSP、MMP水平与脑血肿和脑水肿关系密切。可能原因是激活的MMP-2、MMP-9攻击血脑屏障中的基底膜，降解细胞外基质中的各类蛋白成分，破坏细胞结构的完整性，增大血管的通透性，促使毛细血管中的水分及血浆蛋白不断外渗，增加细胞间隙中的水分，最终促进脑血肿和脑水肿的产生[13，14]。

教师可从实验动物、观察指标和采取水样等三方面进行一定创新改进。实验动物可从金鱼拓展为水蚤，用水蚤代替金鱼有以下好处：成本更低；方便多次重复实验；学生在上个学期已经接触过水蚤，对水蚤已经有一定了解；通过观察水蚤心率来了解水蚤活动情况，以量化数据代替表象观察更具有说服力。采取水样方面也可不仅限于附近河水和不同比例不同pH的氨水溶液，也可拓展为含有不同污染物（如杀虫剂、洗涤剂等）的水样，帮助学生更直接体会到水质污染对水生小动物的影响。

综上所述，ACH患者血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均升高，并与患者脑血肿量及脑水肿量密切相关。临床上可将上述指标作为监测靶点用于辅助评估ACH患者的脑血肿量及脑水肿量。

参考文献：

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