沙苑子的保肝作用实验研究

渭南职业技术学院，陕西　渭南　714000

沙苑子来源于豆科(Leguminosee)植物扁茎黄芪AstragaluscomplanatusR.Br.的干燥成熟种子，其性味甘温，归肝、肾二经，具有养肝明目、补肾助阳、固精缩尿止带的功效。实验以四氯化碳制备小鼠急性化学性肝损伤模型，研究沙苑子的保肝作用，以期为肝病的防治，提供更为广泛的药源。

1　材料

1.1动物SPF级昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g，由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，动物合格证号是陕医动证字第08-025号。

1.2药物沙苑子购于华芝堂药店，经渭南职业技术学院孙教授鉴定为正品沙苑子，然后制备成浓度为600 mg生药/mL、300 mg生药/mL、150 mg生药/mL的水煎液，按1 mL/kg体重的剂量给药，分为三个计量组：高(600 mg生药/kg体重)、中(300 mg生药/kg体重)、低(150 mg生药/kg体重)。双环醇片(规格25 mg/片，批号：130815，北京协和药厂)。

1.3试剂四氯化碳(CCL4，批号：20151030，广州光华化学厂有限公司)制备成10%的花生油油剂。丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.4仪器UV-754紫外可见分光光度计(上海科学精密仪器有限公司)。

2　方法

2.1分组将小鼠随机分为6组，每组10只，即正常对照组，模型组，双环醇阳性对照组，沙苑子高(600 mg生药/kg体重)、中(300 mg生药/kg体重)、低(150 mg生药/kg体重)剂量组。

2.2试验方法除正常对照组与模型组灌胃生理盐水，其余药物组灌胃相应药物，1次/d，连续7 d。末次灌胃后1 h，除正常对照组外，其余各组腹腔注射四氯化碳花生油油剂造模24 h，眼眶静脉采血，静置1 h，3000 rpm离心10 min，取血清100 μL，测定ALT、AST活性。取小鼠肝脏，用生理盐水制成10%的肝组织匀浆，离心，取上清，测定CAT、GSH活性。

3　结果

与正常组对比，模型组ALT、AST显著升高(P<0.01)，CAT、GSH显著降低(P<0.01)，说明模型制备成功。沙苑子高剂量组可降低血清ALT(P<0.05)，降低AST但无统计学差异(P>0.05)，升高肝组织中CAT、GSH活性(P<0.01)；中剂量组与双环醇阳性对照组均可降低血清ALT(P<0.01)，降低AST(P<0.05)，升高肝组织中CAT、GSH活性(P<0.01)；低剂量组对四氯化碳引起的小鼠血清ALT、AST升高均无明显作用(P>0.05)，但可以显著升高肝组织中CAT活性(P<0.01)。见表1。

组别剂量/g/kgALT/U/LAST/U/LCAT/U/mgprotGSH/mg/gprot正常对照组-405±1311465±201755±175011±43模型对照组-3312±1259△△3164±1272△△569±20△△1407±46△△双环醇组0151605±582∗∗1933±661∗1162±48∗∗9763±139∗∗沙苑子高0061776±1172∗∗2886±12721379±33∗∗9493±93∗∗沙苑子中0031552±1187∗∗2101±763∗1330±09∗∗5492±48∗∗沙苑子低00152167±16022261±10541413±82∗∗1734±57

注：与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4　讨论

反应肝脏毒性的血清酶指标是丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)，二者存在于机体肝细胞内，当肝细胞细胞膜结构破坏，通透性改变，可从细胞内逸出而进入血液循环[1]。研究表明[2]氧化应激能够损伤肝细胞，在肝脏疾病中起重要作用。大量的ROS可氧化不饱和脂质导致脂质过氧化，加剧线粒体功能障碍。此外，抗氧化物质的缺乏使ROS灭活障碍，进一步增加ROS对线粒体的损伤作用，致使AST、ALT流出细胞，消耗细胞内的抗氧化物质，导致过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)缺乏，形成恶性循环，从而引起肝脏疾病。试验结果显示以300 mg生药/kg体重沙苑子灌胃给药，可达到阳性对照药双环醇的效果，均能显著降低血清ALT(P<0.01)，降低AST(P<0.05)，显著升高肝组织中CAT、GSH活性(P<0.01)，表明沙苑子在300 mg生药/kg体重剂量下，可通过升高肝组织中CAT、GSH活性来降低AST、ALT，以达到保护肝脏免受CCL4所致的急性化学性损伤，其机制还需后续深入研究。

[1]Jain AK，Jaiswal AK．Phosphorylation of tyrosine 568 controis nuclear export of nrf2[J]．J Biol Chem，2006, 281(17) ∶12132-12142．

[2]Matsuzawa NN，Takamura T，Ando H，et al．Increased oxidative stress precedes the onsetofhigh-fatdiet-induced insulin resistance and obesity[J]．Metabolism，2008,57(8) ∶1071-1077．