宠物葡萄球菌的分离培养和药敏试验

郭立军

（天津市滨海新区动物疫病预防控制中心，天津300454）

目前,随着人们生活水平的提高,宠物饲养越来越多,宠物本身携带或感染的疾病,对人类产生了新的威胁。日常生活中,人被猫、狗咬伤等,都可感染金黃色葡萄球菌;此外,耐药菌可能通过食物、水源、毛发(尤其是猫、狗)和其他接触方式传递给人(于振清等,2006),给公共健康造成了严重威胁。宠物感染金黃色葡萄球菌的报道较少,而有研究结果表明,猫、狗等宠物身上的金黃色葡萄球菌可能传染给主人,主人也可能将细菌传染给宠物。因此,应加强金黄色葡萄球菌的监测,并采取相应措施减少或延缓该种细菌耐药性的产生,为该病的防控和治疗提供参考[1]。

1 材料与方法

1.1 材料

使用的培养基为普通肉汤培养基，普通琼脂培养基，鲜血琼脂培养基。

1.2 病料采集

试验所采病料分别采自患病宠物的伤口分泌物，脓汁，渗出液，尿液，粪便等。其中伤口分泌物22份、脓汁8份、粪便5份、渗出液7份，共42份。共计20个宠物。

2 分离培养

2.1 增菌培养

将采集后配制的稀释液2mL接入7.5%NaCl肉汤中，37℃培养24小时。

2.2 划线分离培养

从葡萄球菌肉汤中取少许涂布于培养基边缘，用接种环在所涂的地方划线。

接种完毕，作好标记，平皿倒扣，置于37℃培养24～48h。

2.3 触酶试验

进行葡萄球菌触酶试验，如立即（1min内）有大量气泡产生为阳性，不产生或气泡量少为阴性[1]。

2.4 生化试验

2.4.1 菌液制备

取培养基上新鲜菌落制成麦氏比浊管3号及0.5号菌液各一管约1.5mL，另取已制备好的3号菌液4滴，加入2滴甲苯用于ONPG试验。

2.4.2 试验操作

（1）碱磷酶、尿素酶、PYR及木糖试验均加相当于3号麦氏比浊管浓度菌液各4滴；（2）ONPG加相当于3号麦氏比浊管浓度菌液4滴及2滴甲苯；（3）O-F葡萄糖管用液体石蜡加封。

2.4.3 培养条件

放在35℃温箱中，6h后观察结果。

2.4.4 判定方法

（1）碱磷酶试验管内加两滴IMNaOH，5分钟变为黄色为阳性；（2）ONPG试验 变成黄色为阳性；（3）尿素试验 变为红色为阳性；（4）PYR试验管内加入一滴PYR显色剂5分钟呈现红色为阳性；（5）木糖试验变 成黄色为阳性；（6）无氧条件下发酵葡萄糖为葡萄糖球菌，不发酵为微球菌。

2.5 药敏试验

取金黄色葡萄球菌种，用灭菌接种环致密划线于琼脂平板表面。用无菌镊子将抗菌药物圆片，贴于培养基表面，各片距离要相等。做好标记，37℃培养24h。

3 结果

3.1 在普通琼脂培养基上的菌落特征

菌落厚、有光泽、圆形凸起，边缘整齐、表面光滑、湿润，直径一般为1～2mm。

3.2 在血平板上的菌落特征

呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的β溶血环。

3.3 染色观察

革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列，无芽孢、荚膜。

3.4 触酶试验结果

玻片上滴加双氧水后产生大量气泡。

结论：金黄色葡萄球菌属为触酶阳性。

3.5 生化试验结果

金黄色葡萄球菌在碱磷酶试验中呈阳性，在ONPG中呈阴性，在尿素中呈阳性，在PYR中呈阴性，在木糖中呈阴性，在OF葡萄糖中呈阳性[2]。

3.6 药敏试验结果

30株金黄色葡萄球菌对抗生素药敏试验结果

4 结论

从本实验得知患病动物被金黄色葡萄球菌感染后，建议采用头孢唑林、庆大霉素抗生素进行治疗。对抗生素治疗效果不好的病症，如皮肤、伤口等感染应做细菌培养和药敏试验,以选取敏感药物，减少细菌耐药性的发生，但要注意用药的剂量和用药时间，应适时停用并经常更换品种，已获得最好的治疗效果，防止产生耐药性。

[1]赵永达,黄显会.一例犬金黄色葡萄球菌病的诊断及药敏试验[J].中国畜牧兽医,2010，37（9）：225-226.

[2]崔庆,张代民,张承伟.249株葡萄球菌药物敏感试验分析[J].临床军医杂志，2002,30（5）：52-53.

[3]朱以军,徐瑞龙,单小云,等.医院感染葡萄球菌属的分布特点与耐药性[J].中华医院感染学杂志,2007,17(5)：599-601.