延安地区妇女HPV基因分型及临床相关研究*

杜伟平，米思蓉，王　丽，张宁梅，呼志西，李芳芹　

(延安大学附属医院，陕西延安　716000)

近年来临床观察发现中国宫颈癌的发生有明显上升和年轻化趋势，宫颈病变是育龄女性常见的疾病，广泛存在于育龄期妇女当中，广义的宫颈病变有炎症、损伤、畸形、癌前病变及肿瘤等，其中宫颈癌危害最大，已成为仅次于乳腺癌的恶性肿瘤。宫颈癌的发生经历了一个漫长的过程，经过慢性炎症、不典型细胞增生、细胞内瘤变等多个阶段发展而成。临床病因学研究证实HPV在侵犯人体皮肤与黏膜后引起增殖性乳头状瘤状病变。大量研究已经证实高危型HPV感染是引起宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌的必要条件[1]，选择合理高效的筛查方法对早期诊断、有效降低宫颈癌的发生具有重要的价值。目前临床进行HPV检测的方法包括质谱、基因分型、PCR定量等，由于方法学的差异和检出效率存在差别，临床多采用基因分型和PCR定量检测[2]。不同人群感染情况差异较大，为了给临床提供更多的数据支持，本研究探讨针对不同人群的筛查手段，对2 014例延安地区女性HPV感染情况进行检测，对其基因分型结果及临床相关研究进行了分析，现报道如下：

1　材料与方法

1.1研究对象选取2015年6月～2017年6月在延安大学附属医院体检科、妇科门诊以及住院就诊的健康体检者及患者共2 014例，年龄18～69岁，平均年龄37岁。

1.2试剂与仪器试剂盒：HPV基因分型试剂盒由广州凯普生物公司提供。主要仪器：PCR扩增仪由博日提供，生物安全柜由鑫贝西提供，高速离心机由湘仪离心机有限公司提供，干式恒温器由杭州奥森仪器厂提供，振荡器由其林贝尔仪器厂提供。

1.3研究方法

1.3.1采样：采用专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。用生理盐水冲洗宫颈口，用专用宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4～5周以获取足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处折断，关盖后进行标识。

1.3.2HPV分型检测：进行样本DNA提取后PCR扩增，将扩增产物进行杂交，对照标准结果进行结果的判读。

1.4统计学分析采用SPSS18.0统计软件。样本率比较采用χ2检验。

2　结果

2.1基因分型特点见表1。HPV高危型中HPV- 16，52，53居于前三位；HPV低危型以HPV- 81，6，44为主。检出阳性332例，总阳性率为16.48%。

表1 HPV基因分型结果构成比[n(%)]

2.2基因分型感染类型特点2 014例分析标本中共检出阳性标本332例，单纯高危型感染219例，单纯低危型感染74例，混合感染39例，构成比分别为65.96%，22.29%和11.75%。

2.3不同年龄段的分布特点见表2。随年龄增长呈现先增长后下降的趋势，差异有统计学意义(χ2=34.238，P<0.01)。

表2 不同年龄段的受检者HPV阳性率

2.4不同职业人群感染特点见表3。HPV阳性检出率也存在差异，医疗保障相对全面和条件好的职业感染率低，差异有统计学意义(χ2=50.35，P<0.01)。

表3 不同职业HPV基因分型检测阳性率

2.5不同地域人群感染特点见表4。不同地域检出率也存在差异，反映出经济水平差异与保健意识和在医疗保健中的投入水平也存在差异，差异有统计学意义(χ2=12.084，P<0.01)。

表4 HPV感染情况的区域性差异

2.6HPV感染性质特点见表5。单一感染占比最高，其次是二重感染和三重感染。

表5 HPV多重感染情况

—：表示无数据。

3　讨论

研究表明HPV感染是引发宫颈癌的重要致病因子[2]，宫颈癌是目前少有的明确病因的肿瘤。在宫颈癌患者中HPV 检出率很高，目前临床进行HPV检测的方法多样，包括质谱、基因分型、PCR定量等，在健康妇女中，HPV的感染率较低，而在存在宫颈病变的患者当中感染率较高，不同地区报道的结果存在差异。高危型HPV的持续性感染是宫颈癌患病的关键病因，如能早期对HPV进行检测对宫颈癌的早期防治有非常重要的意义。

本研究显示，延安地区妇女HPV总感染率与徐州地区的20.92%和广州东莞的28.04%相比感染率低[3，4]，与张晓艳等[5]报道的延安地区不同采样人群HPV阳性率(18.09%)相比相差不大，而同原荣等[6]报道的延安地区其他数据相差很大，这与临床检测面向的人群有很大的关系。所有样本检出阳性332例，其中单纯高危型感染的构成比最高，这也表明高危型单独进行检测对于宫颈癌的筛查是完全可行的，对于经济和条件有限的地区可以进行单纯主要高危型的筛查。其中危害最大的HPV- 16型构成比最高，这与文献报道相一致。高危型中HPV- 16，52，53居于前三位，这与文献报道存在差异。由于不同地区存在经济、文化等多因素差异，感染率及基因型别也就存在差异。在HPV低危型中以HPV- 81，6，44为主，与文献报道的有差异[7]。随着年龄的增长高危HPV的感染持续增加，到达一定年龄后又开始下降，这与文献研究相似，文献有报道在20～30岁年龄段感染率最高。本研究发现41～50岁年龄段感染率最高，这与文献有差异，但与南京地区数据相似[7]。在不同群体中感染率也存在明显的差异，在干部组当中HPV感染率最低，而在农民工群体当中感染率最高，这也表明卫生保健水平、人员认知及文化水平素养的高低与疾病的发病有一定的相关性。在分地域的研究中发现经济文化和人员流动性等多种因素的存在导致感染率存在明显差异，如在相对经济多元化、人口流动性强的宝塔区相对而言感染率最高，与其他区县比较差异有统计学意义。研究显示多重感染主要为二重感染，以高危型和混合型多见[8]，这与文献报道一致，这也提示进行HPV检测时单纯检测可能导致漏检，或者无法明确型别的问题，应该进行分型检测，提高检出率的同时提高正确度，保证临床获得准确的数据。

广州凯普HPV检测试剂为陕西省普查专用试剂，科室仪器设备都是经过国家认证的仪器，实验检测人员经过专业培训，并获得PCR证书。此方法为HPV筛查的有效方法。宫颈癌患者从感染HPV到宫颈癌的潜伏期时间很长。所以实现HPV早期筛查对宫颈癌有重要意义，对早期诊断、规范治疗以及预测病变进展等具有重要价值[9]。充分掌握HPV感染情况及亚型分布，对发现HPV感染的高危人群进行HPV感染的控制和有效治疗有重要意义，进而对降低宫颈癌的发生率产生积极的影响。

参考文献：

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