显微镜计数法复核血细胞分析仪计数PLT的临床价值分析

陈小美 梁建嫦

广东省云浮市卫生学校，广东云浮 527300

血小板计数在各种出血性与血栓性疾病诊断中具有重要意义，是一项重要的血液常规检查，目前已逐渐应用于临床诊断疾病。乙肝、肝硬化均为我国高发疾病，防治任务艰巨，由于肝病患者肝脏功能明显受损，无法发挥合成与清除功能，常出现PLT异常[1]。因此，加强PLT含量的检测，提高计数真确性，对早期发现疾病，评估疾病进展显得尤为重要。近年来血细胞分析仪器随着科技的进步而得到快速发展，并因其检测准确、快速、可重复性等优点而广泛应用于临床实验室[2]，其检测的血液标本抗凝剂选用EDTA-K2，但EDTA-K2可引起PLT凝集，从而造成PLT假性减少现象，加之PLT聚集与部分红细胞体积较小等因素的干扰，导致PLT计数存在一定缺陷[3]。故本研究探讨手工显微镜计数法复核血细胞分析仪计数在PLT计数中的应用价值。现报道如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料

选取我院2017年1～8月住院患者血液标本548份，所有标本PLT计数均经血液细胞分析仪检测不足50×109/L，且根据PLT计数范围548份标本分为两组，A组：PLT计数（20～50）×109/L，B组：PLT计数＜20×109/L。所有患者均知晓并同意参与本研究，自愿签署知情同意书，获我院伦理委员会审核通过。

1.2　方法

仪器与试剂：采用贝克曼库尔特Act5diffal5分类全自动分析仪与配套试剂、EDTA-K2真空管、稀释液中EDTA-K2含量0.2g/L、全血质控物。血液标本取自患者晨起空腹静脉血，约3mL，经EDTAK2抗凝测定PLT计数，混匀至标本无血凝块或溶血，但避免应用振摇器。显微镜PLT计数稀释液为草酸铵，严格按照操作规程进行检测，采用细滴管吸取1滴悬液至计数池内，注意避免外溢或有气泡。水平静置20min后，借助高倍镜手工计数PLT数。血涂片法：取干净载片做血液标本推片，将其晾干后，采用瑞士染色，阅片。

1.3　观察指标

不同计数方法PLT计数结果，PLT假性减少标准：PLT＜50×109/L，无黏膜或浅表皮肤出血。染色后经油镜下阅片显示，PLT聚集成堆。

1.4　统计学处理

采用SPSS21.0软件进行数据处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　不同PLT计数方式结果比较

经计数发现，10例为PLT假性减少，其余538例可分为A组（350例）与B组（188例）两组。A组显微镜计数、血涂片计数及仪器计数结果与B组三种计数结果比较，差异无统计学意义（t=1.951、1.181、0.826，P＞0.05）；而在B组计数中，显微镜计数与血涂片计数均明显多于仪器计数（t=10.005、11.788，P＜0.05），血涂片与显微镜计数比较，差异无统计学意义（t=1.694，P＞0.05）。见表1。

表1　不同PLT计数方式结果比较（x ± s ，×109/L）

2.2　PLT假性减少标本计数结果

仪器计数结果为（15.86±5.29）×109/L，显微镜计数结果为（190.51±28.76）×109/L，显微镜计数PLT明显多于仪器计数，差异有统计学意义（t=18.887，P＜ 0.05）。

3　讨论

PLT是一种具有生理活性及酶的无核细胞，产生于巨核细胞脱落颗粒，具有生理性止血功能，常作为凝血与止血障碍的重要指标。PLT由骨髓释放至外周血，可经历5～7d的半衰期，其凝血功能与分布宽度、平均体积呈正相关，PLT曲线平滑度可有效判断标本凝结与否，曲线终点位置可对骨髓造血功能进行判断[4]。目前，我国卫生部门规定流式细胞术检测由单克隆抗体标记的全血PLT与红细胞比值为PLT计数方法，但其操作过于繁琐，且价格高昂，不利于临床广泛应用[5]。因此，积极选取简单精确的PLT计数方法称为临床关注的焦点之一。

近年来，国内血液检验学界对国际血液学组织建议采用显微镜复检的标准给予了密切关注，其内容主要包括：复查标本、复核仪器报告、人工分类涂片、确认标本，检查仪器运行状态[6]，血细胞分析仪对PLT进行计数虽可有效缩短计数时间，实现简单、快速计数PLT的目的，其具有可重复性等优点，同时可减轻医务人员工作强度，便于批量检测。但临床实际检测过程中受诸多因素影响常常发生PLT假性减低等现象，且PLT凝集常被计数为白细胞，进而导致白细胞假性增多[7-8]。两者均可在一定程度上造成医疗隐患，指导错误治疗，一旦引发医疗事故，后果不堪设想。基于此情况，本研究采用显微镜计数法对血细胞分析仪计数PLT进行复核。研究结果显示，PLT＞20×109/L时，显微镜计数、仪器计数及血涂片计数差异无统计学意义，但PLT＜20×109/L时，显微镜计数可达到与血涂片计数法相近的结果，同时PLT计数明显高于仪器计数法，提示仪器计数法可信度不足，应采用显微镜计数复核，确保计数结果的准确度。同时显示血涂片法亦具有一定的优点：能够对PLT形态进行准确的识别，将可疑物质如杂物、细胞碎片等排除，避免对PLT计数造成影响，有助于降低PLT计数假性降低，且能够减少异常PLT漏检事件的发生。而自动血细胞分析仪计数PLT的原理在于散射光、电阻抗法与荧光法结合进行PLT计数，通过低频电流对PLT体积进行准确分析，绘制PLT直方图，从而对PLT进行计数[9]。该测定原理的局限为：干扰PLT计数的因素较多，尤其是血小板、大血小板聚集、红细胞碎片、小红细胞等，影响检测结果的准确性[10-11]。手工计数检测结果相对准确则是由于其干扰因素较少，应用草酸铵稀释液可增强红细胞破坏能力，清晰辨认PLT形态。在该法应用过程中值得注意的是：（1）稀释液配成后需经有效过滤方可应用，避免造成细菌与微粒感染。（2）保持吸管与试管干净清洁，以防交叉污染。（3）采血时注意针刺稍深，快速完成操作，以免PLT聚集，引起PLT假性降低。（4）检测应在标本采集1h之内完成，防止搁置时间过长对检测结果造成影响。（5）充入计数池后，静置10～ 15min左右，保持适当的光线，注意区别灰尘、杂志及折光性PLT。另本研究发现，PLT假性减少10例，虽发生率较低，但易对临床诊断造成明显影响，如误诊，进而贻误病情、造成患者经济损伤，引发医疗纠纷。PLT假性减少10例血液标本中，经手工显微镜下计数证实PLT均处于正常范围，而出现假性的原因多由EDTA-K2抗凝剂引起PLT聚集成堆所致[12-13]。PLT计数波动是临床工作中常见的问题之一，亦是困扰检验医师进行临床诊断的重要难题。考虑其原因为：（1）人为因素，临床护理人员等医务人员在标本采集时存在操作不规范现象，未充分混匀抗凝剂与标本；或采血过程不畅，造成标本凝集，进而出现PLT计数假性降低情况。（2）仪器因素，多数实验室应用的全自动血液分析仪为电阻抗原理，在同一通道上测量红细胞与PLT，导致无法将PLT卫星现象、PLT凝集、体外溶血、冷球蛋白对PLT计数造成的影响排除[14-15]。因此，操作人员在发现PLT减少或异常报警时，应高度怀疑是否存在PLT凝集现象，并采用显微镜计数法进行复核，同时应联合血涂片染色检查，以最大限度减少误诊事件的发生。显微镜检能够准确观察PLT形态及分布情况，判断血涂片中PLT数量，结合显微镜计数结果可获得更加客观、准确的PLT计数结果，从而为临床诊断与治疗提供科学合理的依据。

综上所述，显微镜计数法复核血细胞分析仪计数PLT的临床应用价值显著，能够较好的弥补仪器法的缺陷，有助于早期发现PLT假性减少，做出准确诊断，减少误诊，为临床掌握患者病情进展，制定合适的治疗方案提供合理参考，从而有助于改善疾病的防治工作，构建和谐的医患关系。

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